Proteinase K Lösung (20 mg/mL) - PCR tauglich

Proteinase K solution M3037


Artikel-Nr.: M3037.0001

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CAS-Nr: 39450-01-6

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Proteinase K aus dem Pilz Tritirachium album ist eine unspezifische Protease aus der Familie der... mehr
Produktinformationen "Proteinase K Lösung (20 mg/mL) - PCR tauglich"

Proteinase K aus dem Pilz Tritirachium album ist eine unspezifische Protease aus der Familie der Serinproteasen. Proteinase K wird für die Aufspaltung von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet, da Proteinase K ein sehr breites und unspezifisches Erkennungsspektrum (schneidet die Carboxylenden von aromatischen, hydrophilen und aliphatischen Aminosäuren) besitzt und somit zuverlässig die verschiedensten Proteine verdauen kann. Damit ist das Enzym ein hervorragendes Werkzeug zur vollständigen hydrolytischen Spaltung von Proteinen (Ebeling W. et al. (1974) Eur. J. Biochem., 47, 91).

Proteinase K wird hauptsächlich in der Nukleinsäurereinigung oder zur Entfernung von Nukleasen eingesetzt.

Anwendungsbeispiele:

  • Präparation chromosomaler DNA für die PFGE
  • Abbau von Nukleasen (DNase, RNase) bei der Präparation von Nukleinsäuren, einschließlich der Gewinnung nativer RNA
  • Isolierung genomischer DNA aus Gewebe von Mausschwänzen
  • Isolierung genomischer DNA aus Zellkulturen

Aktivität: (Hämoglobin, pH7,5, 25°C) >30 mAnsonU/mg. Fremdaktivität: RNase und DNase nicht nachweisbar. Temperatur-Optimum: +65°C (Die Aktivität ist bei +65°C ca. 12x höher als bei +25°C). Über +65°C erfolgt Hemmung. Zur Inaktivierung  werden Temperaturen über 95°C benötigt (Inaktivierung durch Denaturierung). Stabil von pH4,0-12,5. Aktivatoren: Denaturierende Agenzien wie SDS und Harnstoff. Inhibitoren: Hg2+, DFP, PMSF (M3194) >, AEBSF (M6360) > und Phenol. Keine Inhibition durch EDTA, Sulfhydryl-Reagenzien und Trypsin- bzw. Chymotrypsininhibitoren. Stabilisatoren wie Ca2+ (1-5mM) verhindern die Autolyse.

Anwendungshinweise: Reaktionspuffer: 50mM Tris-HCl, pH7,5, 5mM CaCl2, 0,5% SDS. Übliche Stammlösung: 20mg/mL in Wasser. Lagertemperatur der Stammlösung: -20°C. Übliche Arbeitskonzentration: 50µg/mL.

Proteinase K erhalten Sie von Genaxxon als Pulver (M3036) > oder als Lösung (20mg/mL, M3037) >.

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Technische Daten:

Specifications:
Conc. 20mg/mL proteinase K
Activity: min. 600 mAnsonU/mL (>600 units/mL)
Spec. Activity: >40 mAnsonU/mg protein (>40 units/mg protein)

 

Applikation:

Protein digest in DNA samples for example: Purification of genomic DNA from bacteria (miniprep): Bacteria from a saturated liquid culture are lysed and proteins are removed by a digest with 100μg/mL Proteinase K for 1 h at 37°C. Whole-Mount in situ hybridization and determination of RNAs in vertebrate embryos and isolated organs: Digest of the sample with e. g. 10μg/mL Proteinase K for 15 minutes at room temperature. The period of the treatment and/or the concentration of the enzyme has to be optimized. Prepration of DNA from cells or tissue for PCR: Cells or tissue are incubated over night at 50°C with 100μg/mL Proteinase K. Isolation of vaccinia virus DNA: Digest the virus in a suspension with 2mg/mL Proteinase K for 4 h at 37°C.

Einheitendefinition:

Concentration: 20mg/mL, Activity: >40 units/mg protein (>600U/mL). 1 unit is definded as the enzyme acitivity which liberates folin-positive amino acids and peptides corresponding to 1 µmol tyrosine in 1 minute at 37°C using haemoglobin as substrate.

Quelle

Tritirachium album

Sicherheits Hinweise / Safety

H-Sätze: H315, H319, H335
GHS-Symbole: GHS07, GHS08
R-Sätze: R.36/37/38-42
Gefahrstoffkürzel: Xn

Klassifizierungen / Classification

EC-Nr: 254-457-8
CAS-Nr: 39450-01-6
eclass-Nr: 32-16-04-10
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Following some application examples based on 20mg/mL concentrations of Proteinase K dissolved in pure water or 50mM Tris, pH8.0.

Standard reaction buffer: 
Cell lysis: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 5 mM CaCl2; 0.5 % SDS.
DNA purification: 100 mM Tris-HCl (pH 8.0); 50 mM EDTA, 500 mM NaCl.

Some Application Protocols:
Isolation of genomic DNA from mammal cells
(3h, 50°C) 10mM Tris/HCl (pH8.0), 100mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5%SDS, 20µg/mL DNase free RNase, 100µg/mL proteinase K.
Isolation of genomic DNA from mice tails
(overnight, 55°C) 20mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
Rapid isolation of genomic DNA as a PCR-template from cell cultures
(1h, 37 °C) 67mM Tris/HCl (pH8.8), 16.6mM ammonium sulfate, 5mM β-mercaptoethanol, 6.7mM MgCl2, 6.7µM EDTA (pH8.0), 1.7µM SDS, 50µg/mL proteinase K.
Preparation of DNA for PFGE, lysis in agarose block
(approx. 20h, 50°C). 100mM EDTA (pH8.0), 1 mM Tris/HCl (pH7.6), 20mM NaCl, 1% sarcosyl, 100µg/mL proteinase K.
Purification of mRNA prior to cDNA synthesis (leads often to an increase in cDNA yield)
(1-2h, 37°C) 100mM Tris/HCl (pH7.5), 10mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.1% SDS, 5µg/mL proteinase K.
Purification of PCR-reactions prior to cloning
(overnight, 55°C) PCR-reaction + 10mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
Purification of plasmid-DNA prior to in vitro transcription
(1h, 37°C) Plasmid-DNA + 21mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5% SDS, 100µg/mL proteinase K.
RNase inactivation in ribonuclease-protection-assays
(30 min, 37°C) 30µL RNA/RNA-hybridisation mix + 300µL RNase digestion mix + 0.6% SDS, 300µg/mL proteinase K.
Inactivation of DNase in transcription-run-on-assays
(30 min, 42°C) Suspension of nuclei in 36mM Tris/HCl (pH7.4), 17mM MgCl2, 0.7mM CaCl2, 170mM NaCl, 13mM EDTA (pH8.0), 0.5% SDS with DNase, 100µg/mL proteinase K.
Denaturation of alkaline phosphatase when cipping vector DNA
(30 min, 56°C) 1 x dephosphorylation buffer + 0.5% SDS, 5mM EDTA (pH8.0), 100µg/mL proteinase K.

 
 
 
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Referenzen..

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Quelle/Source: NCBI PubMed >

Decreased Enhancer-Promoter Proximity Accompanying Enhancer Activation
Nezha S. Benabdallah, Iain Williamson, Robert S. Illingworth, Lauren Kane, Shelagh Boyle, Dipta Sengupta, Graeme R. Grimes, Pierre Therizols, Wendy A. Bickmore
Mol Cell. 2019 Nov 7; 76(3): 473–484.e7. doi: 10.1016/j.molcel.2019.07.038
PMCID: PMC6838673

Glucocorticoid Receptor Binding Induces Rapid and Prolonged Large-Scale Chromatin Decompaction at Multiple Target Loci
Alasdair W. Jubb, Shelagh Boyle, David A. Hume, Wendy A. Bickmore
Cell Rep. 2017 Dec 12; 21(11): 3022–3031. Published online 2017 Dec 12. doi: 10.1016/j.celrep.2017.11.053
PMCID: PMC5745231

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Nucleic Acids Res. 2015 Aug 18; 43(14): 6959–6968.  Published online 2015 Jun 27. doi: 10.1093/nar/gkv637
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PMCID: PMC3916430

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PLoS One. 2012; 7(4): e34848.  Published online 2012 Apr 9. doi: 10.1371/journal.pone.0034848
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Mol Cell Biol. 2007 Jan; 27(2): 453–465.  Published online 2006 Nov 13. doi: 10.1128/MCB.01576-06
PMCID: PMC1800810