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Ribonuklease A (RNase A)

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Hersteller Genaxxon bioscience



Artikel-Nr.: S5231.0100

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CAS-Nr: 9001-99-4
 

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Produktinformationen "Ribonuklease A (RNase A)"

Ribonuklease A ist eine Endo-Ribonuklease, die spezifisch Einzelstrang-RNA am 3'-Ende von Pyrimidinbasen (Cytosin und Uracil) schneidet. RNAse A wird benutzt, um RNA-freie DNA zu erhalten und um nichthybridisierte RNA-DNA Hybride zu hydrolisieren. Das pH Optimum von RNAse A liegt zwischen 7,0 und 7,5. RNAse A wird durch Diethylpyrocarbonate (DEPC), Guanidiniumsalz (4 M Guanidiniumthiocyanat), ß-Mercaptoethanol, Schwermetalle, Vanadylkomplexe, RNAse-Inhibitor inhibiert. RNAse A spaltet Einzel- und Doppelstrang RNA und RNA in RNA:DNA Komplexen bei niedriger Salzkonzentration (100 mM NaCl). Bei hohen Salzkonzentrationen (>300 mM NaCl) spaltet das Enzym nur noch Einzelstrang RNA. Das Enzym kann durch Proteinase K-Verdau und anschließende Phenolextraktion entfernt werden.

Eliminierung von potentieller DNAse-Aktivität:
Produkt S5231 (RNAse A (nicht zertifiziert DNAse-frei)) kann DNAse-Aktivität beinhalten. Da jedoch RNAse A hitzestabil ist empfehlen wir eventuelle DNAse-Aktivität durch Hitzeinaktivierung zu entfernen. 
Prozedur:
10mg/mL RNAse A gelöst in 0,01 Natriumacetat (pH5.2) werden 15 Minuten lang bei 100°C for 15 im Wasserbad inkubiert. Anschließend verbleibt der Ansatz im Wasserbad, während dieses auf Raumtemperatur abkühlt. Der pH-Wert der Lösung kann durch Zugabe des 0,1-fachen Volumens an 1M Tris-HCl (pH7,4) angepasst werden. Nach dem aliquotieren, der nun DNAse-freien RNAse A, sollten alle Aliquote bei -20°C gelagert werden.
ACHTUNG: RNAse A präzipitiert wenn konzentrierte Lösungen bei neutralem pH-Wert auf 100°C erhitzt werden!

 

Applikation:

RNase protection assays; Remove unspecifically bound RNA; Analysis of RNA sequences; Hydrolyze RNA contained in protein samples; Purification of DNA; Pancreatic RNase A specifically cleaves at the 3'-side of pyrimidine (uracil or cytosine) phosphate bonds
 
 

Unser Kommentar zu "Ribonuklease A (RNase A)"

• RNase protection assays • Remove unspecifically bound RNA • Analysis of RNA sequences • Hydrolyze RNA contained in protein samples • Purification of DNA
 

Technische Daten:

Assay: about 70% (UV); MW = ca. 13700 Da; No proteases detected; 70 KU/mg (Kunitz). Extinction coefficient: E(1%) = 7.1 (280 nm); Isoelectric point (pI): = 9.6.

Optimal temperature: 60°C (activity range of 15–70°C); Optimal pH: 7.6 (activity range of 6–10); Inhibitors: ribonuclease inhibitor. Activators of RNase A: potassium and sodium salts.

Applikation:

RNase protection assays; Remove unspecifically bound RNA; Analysis of RNA sequences; Hydrolyze RNA contained in protein samples; Purification of DNA; Pancreatic RNase A specifically cleaves at the 3'-side of pyrimidine (uracil or cytosine) phosphate bonds

Einheitendefinition:

1 unit corresponds to the amount of enzyme which hydrolyzes RNA at a rate constant k = 1 at 25°C and pH 5.0 (Kunitz-units), M. Kunitz, J. Biol. Chem. 164, 563 (1946).

Quelle

bovine pancreas

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

EC-Nr: 232-646-6
CAS-Nr: 9001-99-4
eclass-Nr: 32-16-04-10

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Hier finden Sie Infos und weiterführende Literatur zu Ribonuklease A (RNase A)

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