Puffer für die Forschung

BES (N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid) is a useful secondary standard biochemical buffer. Useful pH range for BES is 6.4 to 7.8. It is useful for diagnostic assay manufacturing industry. BES, a sulfonic acid-containing cross-linking agent, induces cross-linking between sulfonated polyimide chains in sulfonated polyimide membranes.

N,N-Bis-(2-hydroxyethyl)-glycin. Bicin wird für biochemische Arbeiten bei niederen Temperaturen und für die Präparation von stabilen Substratlösungen für die Bestimmung von Serumguanase eingesetzt. Bicine wird für verschiedene Applikationen wie Puffer für enzymatische Reaktionen bis zur elektrophoretischen Puffern eingesetzt. Bicine kann nicht benutzt werden, wenn man eine BCA oder einen Lowry Proteintest durchführen möchte. Arbeitskonzentrationen sind: 3 mM bis 100 mM.

2-[Bis(2-hydroxyethyl)imino]-2-(hydroxymethyl)-1,3-propandiol. Puffersubstanz: Daboo M. and Bates R. (1970) J. Phys. Chem., 74, 702-5. Bis-Tris ist ein Aminpuffer, in der chemischen Struktur sehr ähnlich zu Trizma ("Tris": z.B. M6210 > oder M6215 >). Bis-Tris stellt einen wichtigen Puffer für Protein- und Nukleinsäurearbeiten dar. Auch wird er häufig verwendet, um Puffer, die Kakodylsäure (Dimethylarsinsäure) beinhalten, zu ersetzen.

3-[(3-Cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane sulfonate. CHAPS ist ein nichtdenaturierendes zwitterionisches Detergents für die Membranbiochemie, die isoelektrische Fokussierung und die 2-dimensionale Elektrophorese. CHAPS ist sehr nützlich für die Solubilisierung von Membranproteinen und um Protein-Protein Interaktionen aufzubrechen. Das kleine Micellenmolekulargewicht von 6150 Da und der hohen kritischen micellaren Konzentration (6-10 mM) erlaubt die Entfernung durch Dialyse. CHAPS wird gewöhnlich in der nichtdenaturierenden (ohne Harnstoff) IEF eingesetzt und zeigt dabei eine exzellente Auflösung für einige subzellulare Präparationen und Pflanzenproteinen. Normal eingesetzte Konzentrationen liegen im Bereich 2-4% (v/v).

CHAPS ist ein nichtdenaturierendes zwitterionisches Detergents für die Membranbiochemie, die isoelektrische Fokussierung und die 2-dimensionale Elektrophorese. CHAPS ist sehr nützlich für die Solubilisierung von Membranproteinen und um Protein-Protein Interaktionen aufzubrechen. Das kleine Micellenmolekulargewicht von 6150 Da und der hohen kritischen micellaren Konzentration (6-10 mM) erlaubt die Entfernung durch Dialyse. CHAPS wird gewöhnlich in der nichtdenaturierenden (ohne Harnstoff) IEF eingesetzt und zeigt dabei eine exzellente Auflösung für einige subzellulare Präparationen und Pflanzenproteinen. Normal eingesetzte Konzentrationen liegen im Bereich 2-4% (v/v).

3-[(3-Cholamidopropyl)-dimethylammonio]-2-hydroxy-1-propansulfonat.

CHES ist mit einem pKa (25°C) von 9,55 als Puffersubstanz im pH-Bereich von 8,6 bis 12,0 gut geeignet. CHES stört die Proteinbestimmung nach Lowry. Es ist für die Kristallisation von Phosphotriesterase (50mM) oder in der chemischen Modifikation von Bacteriorhodopsin (10mM) geeignet. Synonyme für CHES sind: 2-(Cyclohexylamino)ethansulfonsäure oder auch 2-(N-Cyclohexylamino)ethansulfonsäure.

Hepes (N-2-Hydroxyethyl)piperazin-N'-2-ethansulfonsäure) dient in der Biochemie, Molekularbiologie, Mikrobiologie und Zellkultur als Puffersubstanz mit optimalem Pufferbereich bei pH6,8 - 8,2 (pKs = 7.55 (20°C). Hepes gehört zu den "Goods Puffern". Dr. Norman Good et al. beschreibt in seiner Arbeit aus dem Jahre 1966 eine Auswahl and "biologischen" Puffern die alle bestimmte Eigenschaften haben. Diese Eigenschaften sind: pKa zwischen 6,0 und 8,0, hohe Löslichkeit, ungiftig, minimaler Effekt auf biologische Reaktionen, sehr geringe Absorption zwischen 240nm und 700nm, enzymatische und hydrolytische Stabilität, minimale Änderungen bei Temperatur oder Konzentrationsänderungen, geringer Effekt bei geänderten ionischen Bedingen (z.B. geänderte Salze), geringe Wechselwirkung mit anorganischen Kationen und geringe Durchlässigkeit durch biologische Membranen. Zu den Goods Puffern zählen: BES, BICINE, CAPS, EPPS, HEPES, MES, MOPS, PIPES, TAPS, TES, TRICINE. Reference:Good N.E. et al. (1966) Hydrogen Ion Buffers for Biological Research, Biochemistry 5, 467-77. Shipman jr. Ch. (1969) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 130, 305-10.

1,3-Diaza-2,4-cyclopentadien, Glyoxalin

Morpholinoethansulfonsäure. Puffersubstanz (Good N.E., Izawa S. (1972) Methods Enzymol. 24, 53-68, Sankar M., Bates R.G. (1978) Anal. Chem. 50, 1922-24). Keine Interferenz mit dem Folin Protein Assay. MES zersetzt sich teilweise wenn es im Beisein von Glucose autoklaviert wird.

Morpholinoethansulfonsäure. Puffersubstanz (Good N.E., Izawa S. (1972) Methods Enzymol. 24, 53-68, Sankar M., Bates R.G. (1978) Anal. Chem. 50, 1922-24). Keine Interferenz mit dem Folin Protein Assay. MES zersetzt sich teilweise wenn es im Beisein von Glucose autoklaviert wird.

MOPS (3-N-(Morpholino)propansulfonsäure) wird als Puffersubstanz bei pH 6,5 bis 7,9 eingesetzt. MOPS gehört zu den "Goods Puffern". Zu den Goods Puffern zählen: BES, BICINE, CAPS, EPPS, HEPES, MES, MOPS, PIPES, TAPS, TES, TRICINE.  Reference:(Goods N.E., Izawa S. (1972) Methods Enzymol., 24, 53, Ferguson W.K. et al. (1980) Anal. Biochem., 104, 300).

Piperazin-N,N'-bis(ethansulfonsäure). Puffersubstanz im pH-Bereich von 6,1-7,5. Good N.E. et al. (1966) Biochemistry 5, 467-77, Shipman jr. Ch. (1969) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 130, 305-28.

TAPS (Synonym: N-[Tris(hydroxymethyl)methyl]-3-aminopropanesulfonic acid, [(2-Hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)amino]-1-propanesulfonic acid) wird als Puffersubstanz bei pH 7,7 bis 9,1 eingesetzt. TAPS gehört zu den "Goods Puffern". Zu den Goods Puffern zählen: BES, BICINE, CAPS, EPPS, HEPES, MES, MOPS, PIPES, TAPS, TES, TRICINE.  Reference:(Goods N.E., Izawa S. (1972) Methods Enzymol., 24, 53, Ferguson W.K. et al. (1980) Anal. Biochem., 104, 300).

Tris für die Herstellung von Puffern mit einem pH von 7,2 bis 9,0. für die biochemische und enzymatische Forschung. Synonyme: Tris(hydroxymethyl)aminomethan, THAM, Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, Tris-Base, Trometamol, Tromethamin, Amino-2-(hydroxymethyl)-propan-1,3-diol.

Tris der höchsten Reinheit für die Herstellung von Puffern mit einem pH von 7,2 bis 9,0. Unter-, bzw. oberhalb dieser pH-Werte ist Tris nicht als Puffersubstanz geeignet. Der pH-Wert von Tris hängt stark von der Temperatur und der Konzentration ab. Daher sollte der pH-Wert von Trislösungen immer bei der Temperatur und der Konzentration eingestellt werden bei denen der Puffer anschließend benutzt wird. Tris ist die am häufigsten verwendete Puffersubstanz in der biologischen Forschung. Eine der wichtigsten Anwendungen ist die Verwendung als Elektrophoresepuffer (z. B. TBE (M3206 Buffer Grade 10-fach, M3088 MolBio Grade 10-fach, M3405 Buffer Grade 5-fach) und D2033 (ready-to-use Pulver) oder TAE (M3085 10-fach und M3087 50-fach) für die Polyacrylamid- und Agarose-Gelelektrophorese. Außerdem ist Tris in TE-Puffer (pH8,0) enthalten. TE-Puffer wird für das Auflösen und Lagern von Nukleinsäuren benutzt. Dabei schützt das enthaltene EDTA die Nukleinsäuren durch Komplexierung von Me ++-ionen vor Nukleaseaktivität. Eine 1M Tris-Lösung wird durch Auflösen von 121g Tris-Base in 800mL deionisiertem Wasser hergestellt. Dann wird der pH-Wert mit konz. HCl auf den gewünschten Wert eingestellt und die Lösung mit deionisiertem Wasser auf 1L aufgefüllt. Tris inaktiviert den RNase-Inhibitor DEPC, eine Chemikalie mit der RNase-Aktivität an Geräten oder in Lösungen elimiert wird. Synonyme: Tris(hydroxymethyl)aminomethan, THAM, Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, Tris-Base, Trometamol, Tromethamin, Amino-2-(hydroxymethyl)-propan-1,3-diol. Anwendungen und Literaturverweise1. Blocking in western blots by incubation of the nitrocellulose membrane after blotting with TBST (10 mM Tris-HCl, pH8.0, 150mM NaCl, 0.05% Tween® 20) with 5% nonfat dried milk (Takemoto, Y. et al. (1995) EMBO J. 14, 3403-3414) or TBS (100mM Tris-HCl, pH7.5, 0.9% NaCl) with 10% (w/v) nonfat dried milk (Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Supplement 39 Page 10.8.10; Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York).2. TBE is one of the most commonly used electrophoresis buffers with the composition for a 10X buffer: 890mM Tris base, 890mM boric acid, 20mM EDTA (pH8.3) (for 1Liter: 108g Tris base, 9.3g EDTA x Na2, 55g boric acid, pH8.3). (Peacock, A.C. & Dingman, C.W. (1967) Biochemistry 6, 1818-1827; Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Supplement 40 Page A.2.5, Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York; Ogden, R.C. & Adams, D.A. (1987) Methods Enzymol. 152, 61-87).

SSC-Puffer wird oft in molekularbiologischen Experimenten für die Herstellung von Prähybridisierungs und Hybridisierungs-, Waschlösungen, etc. benutzt. Der pH-Wert des gelösten SSC-Puffer Pulvers beträgt ca. 8,2 ± 0,2. Stellen Sie den pH-Wert mit Salzsäure auf 7,0 ± 0,2 ein. SSC Puffer (20X) in Lösung für die Molekularbiologie. SSC-Puffer wird zum einen zur Denaturierung von DNA beim Screening von DNA-Bibliotheken (z.B. genomische DNA, cDNA, YAC) eingesetzt. Die Arbeitskonzentration liegt hierfür bei 2X.Die zweite wichtige Anwendung findet SSC-Puffer als Transfer-Puffer beim Blotten von DNA nach der Gelelektrophorese aus Agarose- oder Polacrylamid-Gelen auf Nitrocellulose oder Nylon-Membranen (Southern-Blot). Bei Verwendung von Nitrocellulose-Membranen sollte mit 20X SSC eine sehr hohe Konzentration (hohe Ionenstärke) eingesetzt werden, da bei niedrigeren Konzentrationen (z. B. 10X) kleinere DNA-Fragmente verloren gehen können. Für Nylon-Membranen sind 20X und 10X SSC-Puffer gut geeignet, je nach Nylon-Membran können aber mit anderen Bedingungen (bei positiv geladenen Membranen z. B. ein alkalischer Transferpuffer) bessere Ergebnisse erzielt werden.