Für die Zellkultur: Medien, Antibiotika, Aminosäuren

Collagenase aus Clostridium histolyticum ist ein Enzymgemisch aus Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Collagenase Typ III zeigt eine geringe proteolytische bei gleichzeitig normaler Collagenaseaktivität. Typ III Collagenase wird normalerweise bei Brustdrüsen- und fötalen Zellen eingesetzt. und weist eine spezifische Aktivität von 100 bis 250 Mandl-Einheiten pro mg Trockensubstanz auf. Collagenase wird in Clostridium histolyticum von zwei unterschiedlichen Genen codiert. Beide Gene wurden kloniert und sequenziert (Yoshihara 1994). Das colG-Gen kodiert für Collagenase Typ I, ein Protein mit 936 Aminosäuren. Das colH-Gen kodiert für Typ IICollagenase, ein Protein mit 1021 Aminosäuren. Die Gene sind zu 72% identisch, während die Proteine nur zu 43% Identität zeigen. Beide Genprodukte können als zwei oder mehr Isoformen vorliegen und unterscheiden sich im Molekulargewicht. Nicht gereinigte Collagenasemischungen können daher sechs bis acht verschiedene Proteine mit Molekulargewichten im Bereich von 68 bis 130 kDa beinhalten. Studien zur Substratspezifität haben gezeigt, dass das colG-Genprodukt natürliche Substrate, wie intaktes Collagen bevorzugt, verglichen mit dem colH-Genprodukt, das kurze, synthetische Substrate (z.B. FALGPA) bevorzugt (Eckhard et al. 2009 und Matsushita 1999). Allgemeine Beschreibung:Die Behandlung von Geweben mit Collagenase bewirkt den schonenden, selektiven Abbau der interzellulären Matrix und beeinträchtigt die Wachstumsfähigkeit der Zellen nicht. Die von Genaxxon bioscience angebotene Collagenase ist eine Mischung verschiedener proteolytisch wirksamer Enzyme und benötigt Calciumionen sowohl für die katalytische Aktivität, als auch für die Bindung an das Collagenmolekül. Im Gegensatz zur Collagenase aus Wirbeltieren, schneidet die Collagenase aus Clostridium histolyticum natives Tripelhelix-Collagen in kleine Peptidstücke, was der Hauptgrund für die Anwendung der Collagenase in der Zellkultur ist. Für optimale Ergebnisse ist eine genau abgestimmte Mischung proteolytischer Enzyme nötig. Vier verschiedene Collagenasen, Collagenase Typ I >, Collagenase Typ II >, Collagenase Typ III > und Collagenase Typ IV >, stehen dafür zur Verfügung. Typ IV wird meist zusammen mit anderen Enzymen wie Trypsin >, Elastase oder Hyaluronidase > eingesetzt. Das üblicherweise in der Zellkultur verwendete Trypsin bzw. Trypsin/EDTA greift die Matrix nur langsam an und kann darüber hinaus irreversible Schädigungen der freigesetzten Zellen bewirken. Daher empfehlen wir statt Trypsin oder Trypsin/EDTA besser den Einsatz von Accutase >. Clostridium Collagenasen gehören zur großen Gruppe der Metalloproteasen, einer Proteasenfamilie, die als Gemeinsamkeit ein Zinkion enthaltenes Motiv im aktiven Zentrum besitzen (Gonzales and Robert-Baudouy 1996). Collagenase wird reversibel durch hohen pH und irreversibel durch niedrigen pH inaktiviert.  Folgende Verbindungen inhibieren: Cystein, EDTA, o-Phenanthrolin, 8-Hydroxyquinolin-5-sulfonat, Bipyridyl, 2,3-Dimercaptopropanol oder Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+. Collagenase wird NICHT durch Diisopropylphosphorofluoridat (DFP) oder Serum inhibiert. Lyphilisierte Collagenase sollte bei +2°C bis +8°C gelagert werden und ist dann mind. 3 Jahre stabil. Gelöste Collagenase kann bei -20°C gelagert werden und ist dann ungefähr für 1 Jahr stabil. Umrechnungsfaktoren für Collagenase-Aktivitätseinheiten: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg - 1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl oder CDU U/mg - 1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg (PZ-Einheiten entsprechen Wünsch-Einheiten).

Cäsiumchlorid für die Dichtezentrifugation. Ideal für die Isolation von hochreiner RNA ohne Kontamination von RNAsen, oder anderen Proteinen und DNA. Ref.: Miller H. (1987) Methods Enzymol., 152, 145, Dorin M. and Bornecque C.A. (1995) BioTechniques, 18,90.

Zymolyase®, produced by a submerged culture of Arthrobacter luteus, has strong lytic activity against living yeast cell walls to produce protoplast or spheroplast of various strains of yeast cells. An essential enzyme for the lytic activity of Zymolyase® is β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase. It hydrolyzes linear glucose polymers with β-1,3-linkages and releases specifically laminaripentaose as the main and minimum product unit. Reported to be useful for lysis of Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomyces species. There are two preparations of Zymolyase®, Zymolyase®-20T (C4352) and Zymolyase®-100T (C4366) , having lytic activity of 20,000 units/g and 100,000 units/g respectively. The activity was tested towards brewer’s yeast cells (Saccharomyces cerevisiae, resting stage) or towar yeast cells of Saccharomyces uvarum (IFO 0565) cultured statically in malt extract medium. Zymolyase®-20T is ammonium sulfate precipitate while Zymolyase®-100T is a further purified preparation by affinity chromatography. Lytic activity varies depending on yeast strain, growth stage of yeast, or cultural conditions. Further informations related to Zymolyase® can be obtained from the data sheet and the references given there.

Phleomycin gehört zur Bleomycinfamilie und zeigt in-vivo Aktivität gegen Bakterien, eukaryontischen Mikroorganismen, Pflanzen und tierischen Zellen. Phleomycin zerfällt irreversibel bei einem pH von 4,0 und darunter. Phleomycin ist ein Gemisch aus verschiedenen Bleomycinsalzen. Bleomycin ist ein Antibiotikum aus Streptomyces verticillus, einem Actinobacteria der Gattung der Streptomyceten. Bleomycin findet auch Verwendung als Zytostatikum in der Chemotherapie, da es Doppelstrangbrüche in der DNA verursacht. Phleomycin wird als Antibiotikum gegen Zellen empfohlen die nicht oder nur schwach auf Zeocin® reagieren, wie z.B. filamentöse Pilze oder Hefen. Eine Resistenz gegen Phleomycin wird durch das Sh ble gene von Streptoalloteichus hindustanus verliehen, welches für ein Protein codiert, das an Phleomycin bindet und dadurch die DNA-Endonukleaseaktivität unterbindet. Typischerweise wird Phleomycin in Konzentrationen von 10µg/µL (bei Hefen) und 25-150µg/µL (bei filamentösen Pilzen) eingesetzt. Zeocin® is a trade mark of InvivoGen USA.

Exosome Ultra sind lyophilisierte Exosomen, die als Referenzmaterial/Standard für Ihre Exosomenforschung benutzt werden können. Lösen Sie die lyophilisierten Exosomen zum sofortigen Gebrauch einfach in sterilem Wasser auf. Herkunft: Menschliche MSC. Exosomen sind kleine, nanoskalige extrazelluläre Vesikel (membranumhüllte Partikel von 30-120 nm), die von Endosomen abstammen und kontinuierlich von Zellen ausgeschieden werden. Exosomen sind unter anderem für die Zell-Zell-Kommunikation (Cell Signaling) von großer Bedeutung und können äußerst wertvolle Informationen über die Zusammensetzung von Proteinen, Lipiden, Metaboliten und Nukleinsäuren der ursprünglichen Mutterzelle liefern. Die Untersuchung des Inhalts der Exosomen kann Informationen über die Zellgesundheit, den allgemeinen Krankheitsstatus und mehr liefern. Daher wird von immer mehr Arbeitsgruppen untersucht, inwieweit Exosomen für diagnostische Zwecke eingesetzt werden können. Zumal nachgewiesen wurde, dass Exosomen bei Krebs, neurodegenerativen Erkrankungen und Herz-Kreislauf-Erkrankungen eine Rolle spielen.

Trypsin aus Rinderpankreas, min. 2500 U/mg (nach BAEE) lyophilisiert. Enthält ca. 0.1% Chymotrypsin, Elastase und nichtproteolytische Aktivitäten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit).

N-Acetyl-L-Alanyl-L-Glutamin (stabiles Glutamin) für die Zellkultur. L-Glutamine ist eine essentielle Aminosäure, die für das Zellwachstum unentbehrlich ist. Während normales L-Glutamin einer autohydrolyse unterliegt und somit nicht lange in Lösung stabil ist, kann durch Zusatz von N-Acetyl-L-Alanyl-L-Glutamin (stabiles Glutamin) garantiert werden, dass das Zellkulturmedium auch nach 2 Jahren noch entsprechende Menge an Glutamin enthält. N-Acetyl-L-Alanyl-L-Glutamin wird durch zelleigenen Aminopeptidasen in Alanin und Glutamin gespalten, so dass die Zelle selbst für den notwendigen Nachschub an L-Glutamin für das Wachstum sorgt.   Mechanismus:Wenn Zellen in N-Acetyl-L-Alanyl-L-Glutamin enthaltenden Medien kultiviert werden, setzen die Zellen nach und nach Aminopeptidasen frei, die das Dipeptid hydrolysieren, wodurch langsam L-Alanin und L-Glutamin in das Kulturmedium freigesetzt werden. L-Glutamin und L-Alanin können dann von den Zellen aufgenommen und für die Proteinproduktion oder im TCA-Zyklus verwendet werden. Dies kann mit der Fed-Batch-Kulturstrategie verglichen werden, bei der L-Glutamin kontinuierlich in die Kultur eingespeist wird, aber auf einer niedrigen Konzentration gehalten wird. Das Ergebnis ist ein effizienter Energiestoffwechsel und eine hohe Wachstumsausbeute ohne Ammoniaküberschuss.

Zymolyase®, produced by a submerged culture of Arthrobacter luteus, has strong lytic activity against living yeast cell walls to produce protoplast or spheroplast of various strains of yeast cells. An essential enzyme for the lytic activity of Zymolyase® is β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase. It hydrolyzes linear glucose polymers with β-1,3-linkages and releases specifically laminaripentaose as the main and minimum product unit. Reported to be useful for lysis of Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomyces species. There are two preparations of Zymolyase®, Zymolyase®-20T (C4352) and Zymolyase®-100T (C4366) , having lytic activity of 20,000 units/g and 100,000 units/g respectively. The activity was tested towards brewer’s yeast cells (Saccharomyces cerevisiae, resting stage) or towar yeast cells of Saccharomyces uvarum (IFO 0565) cultured statically in malt extract medium. Zymolyase®-20T is ammonium sulfate precipitate while Zymolyase®-100T is a further purified preparation by affinity chromatography. Lytic activity varies depending on yeast strain, growth stage of yeast, or cultural conditions. Further informations related to Zymolyase® can be obtained from the data sheet and the references given there.

Kanamycin ist als Lösung im pH-Bereich 6-8 sehr stabil und kann 6-8 Monate bei Raumtemperatur (mit nur 1-2% Aktivitätsverlust) gelagert werden. Autoklavieren bei 120°C (auch über 1 Stunde) führt zu einem geringen Aktivitätsverlust (5%). Bei Luftzutritt verfärbt sich Kanamycin ohne jedoch wesentlich an Aktivität zu verlieren. Die Verfärbung kann durch Antioxidantien verhindert werden. Kanamycinsulfat ist ein aminoglycosidisches Antibiotikum mit einem breiten antibakteriellen Spektrum (einschließlich Mycobakterien, vielen Gram-positiven und den meisten Gram-negativen Organismen). Es wird als Additiv in der Zellkultur für die Isolation von Gruppe D Streptococcoen auf Esculin Azide Agar (Mossel et al.) oder für die Selektion von transformierten Pflanzenzellen die eine Neomycinphosphotransferase (Kanamycinresistenz) besitzen, eingesetzt. Kanamycinsulfat besteht üblicherweise zu 98% aus Kanamycin A. Kanamycin inhibiert die Bildung von Peptidbindungen (Cox d. et al. (1977) Sammes, P.G (ed.) Topics in antibiotics chemistry Vol. I, Chichester, Horwood, pp. 1-190, Lancini G., Parenti F. (1982) Antibiotics: Springer, New York, Pestka S. (1971) Annu. Rev. Microbiol. 25, 487-562).

Recombinant murine GM-CSF produced in E.Coli is a single, non-glycosylated, polypeptide chain of 125 amino acids and a molecular mass of 14,285 Dalton. The ED50 as determined by the dose-dependant stimulation of the proliferation of murine FDC-P1 cell line is <0.2ng/mL, corresponding to a Specific Activity of 5,000,000 IU/mg. GMCSF is a cytokine that controls the production, differentiation, and function of granulocytes and macrophages. The active form of the protein is found extracellularly as a homodimer. This gene has been localized to a cluster of related genes at chromosome region 5q31, which is known to be associated with interstitial deletions in the 5q- syndrome and acute myelogenous leukemia. Other genes in the cluster include those encoding interleukins 4, 5, and 13. GM-CSF stimulates the growth and differentiation of hematopoietic precursor cells from various lineages, including granulocytes, macrophages, eosinophils and erythrocytes. Synonyms: CSF-2, MGI-1GM, GM-CSF, Pluripoietin-alpha, Molgramostin, Sargramostim. Biological activity: The ED50 as determined by the dose-dependant stimulation of the proliferation of murine FDC-P1 cell line is <0.2ng/mL, corresponding to a Specific Activity of 5,000,000 IU/mg. Sequence: The sequence of the first five N-terminal amino acids is Met-Ala-Pro-Thr-Arg.