Zelldissoziation

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,05% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4289.0100 (100mL) oder 2 x C4289.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,05% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Äquivalent/Alternative zu: Biochrom Cat.-no. L 2143, oder zu Bio&Sell Nr. BS.L2143. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4260.0100 (100mL) oder 2 x C4260.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,05% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4261.0100 (100mL) oder 2 x C4261.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,25% Trypsin in HBSS wird aus Trypsinpulver, gelöst in HBSS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4288.0100 (100mL) oder 2 x C4288.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,25% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4267.0100 (100mL) oder 2 x C4267.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,25% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4259.0100 (100mL) oder 2 x C4259.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,25% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4262.0100 (100mL) oder 2 x C4262.0500 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 0,5% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4261.0110 (100mL) oder 2 x C4261.0510 (500mL).

Trypsin ist eine Mischung von Proteasen aus Schweinepankreas. 2,5% Trypsin in PBS wird aus Trypsinpulver, gelöst in PBS hergestellt. Aufgrund seiner Proteaseaktivität werden Trypsinlösungen häufig für die Zelldissoziation, die routinemäßige Passage von Zellkulturen und die Dissoziation von Primärgewebe verwendet. Die für die Dissoziation erforderliche Trypsinkonzentration variiert mit dem Zelltyp und den experimentellen Anforderungen. Daher werden von Genaxxon unterschiedliche Trypsinlösungen mit und ohne EDTA angeboten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Die Mindestbestellmenge beträgt 5 x C4287.0100 (100mL) oder 2 x C4287.0500 (500mL).

Accutase® zeigt gegenüber dem gebräuchlichen Trypsin > ein weitaus schonenderes Ablöseprofil und löst adhärente Zellen innerhalb kurzer Zeit äußerst schonend ab, wobei die Zellmatrixproteine intakt bleiben. Accutase® hat sich besonders beim Einsatz von primären Fibroblasten, Endothelzellen, Neuronen, Tumorzelllinien und Insektenzellen bewährt. Zellen die mit Accutase® abgelöst wurden sind außergewöhnlich gut für die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumsassay und Durchflusszytometrie geeignet. Da die Grundsubstanz von Accutase® weder aus Wirbeltier- noch Bakterienmaterial gewonnen wird, sind entsprechende Viruskontaminationen oder Endotoxinbelastungen ausgeschlossen. Einmal aufgetaut, ist die Accutase®-Lösung bei +2°C bis +8°C für mindestens sieben Tage haltbar. Mehrfaches Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden. Die Lösung kann jedoch aliquotiert und danach eingefroren werden. Die Haltbarkeit bei -20 °C Lagerung beträgt 12 Monate. Note: Accutase ist registrietes Markenzeichen von Innovative Cell Technologies, Inc.

Collagenase aus Clostridium histolyticum ist ein Enzymgemisch aus Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Collagenase Typ I zeigt eine ausgeglichene Aktivität von Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Dieser Collagenasetyp ist für die Anwendung bei Leber-, Lungen-, Fett- und Nebennierengewebe empfohlen. Typ I Collagenase weist eine spezifische Aktivität von >100 Mandl-Einheiten pro mg (>100 units/mg) Trockensubstanz auf. Collagenase wird in Clostridium histolyticum von zwei unterschiedlichen Genencodiert. Beide Gene wurden kloniert und sequenziert (Yoshihara 1994). Das colG-Gen kodiert für Collagenase Typ I, ein Protein mit 936 Aminosäuren. Das colH-Gen kodiert für Typ IICollagenase, ein Protein mit 1021 Aminosäuren. Die Gene sind zu 72% identisch, während die Proteine nur zu 43% Identität zeigen. Beide Genprodukte können als zwei oder mehr Isoformen vorliegen und unterscheiden sich im Molekulargewicht. Nicht gereinigte Collagenasemischungen können daher sechs bis acht verschiedene Proteine mit Molekulargewichten im Bereich von 68 bis 130 kDa beinhalten. Studien zur Substratspezifität haben gezeigt, dass das colG-Genprodukt natürliche Substrate, wie intaktes Collagen bevorzugt, verglichen mit dem colH-Genprodukt, das kurze, synthetische Substrate (z.B. FALGPA) bevorzugt (Eckhard et al. 2009 und Matsushita 1999). Allgemeine Beschreibung:Die Behandlung von Geweben mit Collagenase bewirkt den schonenden, selektiven Abbau der interzellulären Matrix und beeinträchtigt die Wachstumsfähigkeit der Zellen nicht. Die von Genaxxon bioscience angebotene Collagenase ist eine Mischung verschiedener proteolytisch wirksamer Enzyme und benötigt Calciumionen sowohl für die katalytische Aktivität, als auch für die Bindung an das Collagenmolekül. Im Gegensatz zur Collagenase aus Wirbeltieren, schneidet die Collagenase aus Clostridium histolyticum natives Tripelhelix-Collagen in kleine Peptidstücke, was der Hauptgrund für die Anwendung der Collagenase in der Zellkultur ist. Für optimale Ergebnisse ist eine genau abgestimmte Mischung proteolytischer Enzyme nötig. Vier verschiedene Collagenasen, Collagenase Typ I >, Collagenase Typ II >, Collagenase Typ III > und Collagenase Typ IV >, stehen dafür zur Verfügung. Typ IV wird meist zusammen mit anderen Enzymen wie Trypsin >, Elastase oder Hyaluronidase > eingesetzt. Das üblicherweise in der Zellkultur verwendete Trypsin bzw. Trypsin/EDTA greift die Matrix nur langsam an und kann darüber hinaus irreversible Schädigungen der freigesetzten Zellen bewirken. Daher empfehlen wir statt Trypsin oder Trypsin/EDTA besser den Einsatz von Accutase >. Clostridium Collagenasen gehören zur großen Gruppe der Metalloproteasen, einer Proteasenfamilie, die als Gemeinsamkeit ein Zinkion enthaltenes Motiv im aktiven Zentrum besitzen (Gonzales and Robert-Baudouy 1996). Collagenase wird reversibel durch hohen pH und irreversibel durch niedrigen pH inaktiviert.  Folgende Verbindungen inhibieren: Cystein, EDTA, o-Phenanthrolin, 8-Hydroxyquinolin-5-sulfonat, Bipyridyl, 2,3-Dimercaptopropanol oder Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+. Collagenase wird NICHT durch Diisopropylphosphorofluoridat (DFP) oder Serum inhibiert. Lyphilisierte Collagenase sollte bei +2°C bis +8°C gelagert werden und ist dann mind. 3 Jahre stabil. Gelöste Collagenase kann bei -20°C gelagert werden und ist dann ungefähr für 1 Jahr stabil. Umrechnungsfaktoren für Collagenase-Aktivitätseinheiten: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg - 1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl oder CDU U/mg - 1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg (PZ-Einheiten entsprechen Wünsch-Einheiten).

Collagenase aus Clostridium histolyticum ist ein Enzymgemisch aus Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Collagenase Typ II weißt eine hohe Clostripain-Aktivität auf. Die tryptische Aktivität entspricht der Collagenase Typ I. Typ II Collagenase ist für die Isolierung von Zellen aus Leber-, Knochen-, Schilddrüsen-, Herz- oder Speicheldrüsengewebe empfohlen und weist eine spezifische Aktivität von >180 Mandl-Einheiten pro mg Trockensubstanz auf. Collagenase wird in Clostridium histolyticum von zwei unterschiedlichen Genencodiert. Beide Gene wurden kloniert und sequenziert (Yoshihara 1994). Das colG-Gen kodiert für Collagenase Typ I, ein Protein mit 936 Aminosäuren. Das colH-Gen kodiert für Typ IICollagenase, ein Protein mit 1021 Aminosäuren. Die Gene sind zu 72% identisch, während die Proteine nur zu 43% Identität zeigen. Beide Genprodukte können als zwei oder mehr Isoformen vorliegen und unterscheiden sich im Molekulargewicht. Nicht gereinigte Collagenasemischungen können daher sechs bis acht verschiedene Proteine mit Molekulargewichten im Bereich von 68 bis 130 kDa beinhalten. Studien zur Substratspezifität haben gezeigt, dass das colG-Genprodukt natürliche Substrate, wie intaktes Collagen bevorzugt, verglichen mit dem colH-Genprodukt, das kurze, synthetische Substrate (z.B. FALGPA) bevorzugt (Eckhard et al. 2009 und Matsushita 1999). Allgemeine Beschreibung:Die Behandlung von Geweben mit Collagenase bewirkt den schonenden, selektiven Abbau der interzellulären Matrix und beeinträchtigt die Wachstumsfähigkeit der Zellen nicht. Die von Genaxxon bioscience angebotene Collagenase ist eine Mischung verschiedener proteolytisch wirksamer Enzyme und benötigt Calciumionen sowohl für die katalytische Aktivität, als auch für die Bindung an das Collagenmolekül. Im Gegensatz zur Collagenase aus Wirbeltieren, schneidet die Collagenase aus Clostridium histolyticum natives Tripelhelix-Collagen in kleine Peptidstücke, was der Hauptgrund für die Anwendung der Collagenase in der Zellkultur ist. Für optimale Ergebnisse ist eine genau abgestimmte Mischung proteolytischer Enzyme nötig. Vier verschiedene Collagenasen, Collagenase Typ I >, Collagenase Typ II >, Collagenase Typ III > und Collagenase Typ IV >, stehen dafür zur Verfügung. Typ IV wird meist zusammen mit anderen Enzymen wie Trypsin >, Elastase oder Hyaluronidase > eingesetzt. Das üblicherweise in der Zellkultur verwendete Trypsin bzw. Trypsin/EDTA greift die Matrix nur langsam an und kann darüber hinaus irreversible Schädigungen der freigesetzten Zellen bewirken. Daher empfehlen wir statt Trypsin oder Trypsin/EDTA besser den Einsatz von Accutase >. Clostridium Collagenasen gehören zur großen Gruppe der Metalloproteasen, einer Proteasenfamilie, die als Gemeinsamkeit ein Zinkion enthaltenes Motiv im aktiven Zentrum besitzen (Gonzales and Robert-Baudouy 1996). Collagenase wird reversibel durch hohen pH und irreversibel durch niedrigen pH inaktiviert.  Folgende Verbindungen inhibieren: Cystein, EDTA, o-Phenanthrolin, 8-Hydroxyquinolin-5-sulfonat, Bipyridyl, 2,3-Dimercaptopropanol oder Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+. Collagenase wird NICHT durch Diisopropylphosphorofluoridat (DFP) oder Serum inhibiert. Lyphilisierte Collagenase sollte bei +2°C bis +8°C gelagert werden und ist dann mind. 3 Jahre stabil. Gelöste Collagenase kann bei -20°C gelagert werden und ist dann ungefähr für 1 Jahr stabil. Umrechnungsfaktoren für Collagenase-Aktivitätseinheiten: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg - 1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl oder CDU U/mg - 1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg (PZ-Einheiten entsprechen Wünsch-Einheiten).

Collagenase aus Clostridium histolyticum ist ein Enzymgemisch aus Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Collagenase Typ III zeigt eine geringe proteolytische bei gleichzeitig normaler Collagenaseaktivität. Typ III Collagenase wird normalerweise bei Brustdrüsen- und fötalen Zellen eingesetzt. und weist eine spezifische Aktivität von 100 bis 250 Mandl-Einheiten pro mg Trockensubstanz auf. Collagenase wird in Clostridium histolyticum von zwei unterschiedlichen Genen codiert. Beide Gene wurden kloniert und sequenziert (Yoshihara 1994). Das colG-Gen kodiert für Collagenase Typ I, ein Protein mit 936 Aminosäuren. Das colH-Gen kodiert für Typ IICollagenase, ein Protein mit 1021 Aminosäuren. Die Gene sind zu 72% identisch, während die Proteine nur zu 43% Identität zeigen. Beide Genprodukte können als zwei oder mehr Isoformen vorliegen und unterscheiden sich im Molekulargewicht. Nicht gereinigte Collagenasemischungen können daher sechs bis acht verschiedene Proteine mit Molekulargewichten im Bereich von 68 bis 130 kDa beinhalten. Studien zur Substratspezifität haben gezeigt, dass das colG-Genprodukt natürliche Substrate, wie intaktes Collagen bevorzugt, verglichen mit dem colH-Genprodukt, das kurze, synthetische Substrate (z.B. FALGPA) bevorzugt (Eckhard et al. 2009 und Matsushita 1999). Allgemeine Beschreibung:Die Behandlung von Geweben mit Collagenase bewirkt den schonenden, selektiven Abbau der interzellulären Matrix und beeinträchtigt die Wachstumsfähigkeit der Zellen nicht. Die von Genaxxon bioscience angebotene Collagenase ist eine Mischung verschiedener proteolytisch wirksamer Enzyme und benötigt Calciumionen sowohl für die katalytische Aktivität, als auch für die Bindung an das Collagenmolekül. Im Gegensatz zur Collagenase aus Wirbeltieren, schneidet die Collagenase aus Clostridium histolyticum natives Tripelhelix-Collagen in kleine Peptidstücke, was der Hauptgrund für die Anwendung der Collagenase in der Zellkultur ist. Für optimale Ergebnisse ist eine genau abgestimmte Mischung proteolytischer Enzyme nötig. Vier verschiedene Collagenasen, Collagenase Typ I >, Collagenase Typ II >, Collagenase Typ III > und Collagenase Typ IV >, stehen dafür zur Verfügung. Typ IV wird meist zusammen mit anderen Enzymen wie Trypsin >, Elastase oder Hyaluronidase > eingesetzt. Das üblicherweise in der Zellkultur verwendete Trypsin bzw. Trypsin/EDTA greift die Matrix nur langsam an und kann darüber hinaus irreversible Schädigungen der freigesetzten Zellen bewirken. Daher empfehlen wir statt Trypsin oder Trypsin/EDTA besser den Einsatz von Accutase >. Clostridium Collagenasen gehören zur großen Gruppe der Metalloproteasen, einer Proteasenfamilie, die als Gemeinsamkeit ein Zinkion enthaltenes Motiv im aktiven Zentrum besitzen (Gonzales and Robert-Baudouy 1996). Collagenase wird reversibel durch hohen pH und irreversibel durch niedrigen pH inaktiviert.  Folgende Verbindungen inhibieren: Cystein, EDTA, o-Phenanthrolin, 8-Hydroxyquinolin-5-sulfonat, Bipyridyl, 2,3-Dimercaptopropanol oder Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+. Collagenase wird NICHT durch Diisopropylphosphorofluoridat (DFP) oder Serum inhibiert. Lyphilisierte Collagenase sollte bei +2°C bis +8°C gelagert werden und ist dann mind. 3 Jahre stabil. Gelöste Collagenase kann bei -20°C gelagert werden und ist dann ungefähr für 1 Jahr stabil. Umrechnungsfaktoren für Collagenase-Aktivitätseinheiten: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg - 1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl oder CDU U/mg - 1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg (PZ-Einheiten entsprechen Wünsch-Einheiten).

Collagenase aus Clostridium histolyticumist ein Enzymgemisch aus Collagenase, Clostripain sowie tryptischen und proteolytischen Aktivitäten. Collagenase Typ IV weißt eine geringe tryptische, hohe Collagenase- und normale Clostripain-Aktivität auf. Typ IV Collagenase wird für die Isolierung von Langerhans’schen Inselzellen empfohlen und weist eine spezifische Aktivität von >900 Mandl-Einheiten pro mg Trockensubstanz auf. Collagenase wird in Clostridium histolyticum von zwei unterschiedlichen Genencodiert. Beide Gene wurden kloniert und sequenziert (Yoshihara 1994). Das colG-Gen kodiert für Collagenase Typ I, ein Protein mit 936 Aminosäuren. Das colH-Gen kodiert für Typ IICollagenase, ein Protein mit 1021 Aminosäuren. Die Gene sind zu 72% identisch, während die Proteine nur zu 43% Identität zeigen. Beide Genprodukte können als zwei oder mehr Isoformen vorliegen und unterscheiden sich im Molekulargewicht. Nicht gereinigte Collagenasemischungen können daher sechs bis acht verschiedene Proteine mit Molekulargewichten im Bereich von 68 bis 130 kDa beinhalten. Studien zur Substratspezifität haben gezeigt, dass das colG-Genprodukt natürliche Substrate, wie intaktes Collagen bevorzugt, verglichen mit dem colH-Genprodukt, das kurze, synthetische Substrate (z.B. FALGPA) bevorzugt (Eckhard et al. 2009 und Matsushita 1999). Allgemeine Beschreibung:Die Behandlung von Geweben mit Collagenase bewirkt den schonenden, selektiven Abbau der interzellulären Matrix und beeinträchtigt die Wachstumsfähigkeit der Zellen nicht. Die von Genaxxon bioscience angebotene Collagenase ist eine Mischung verschiedener proteolytisch wirksamer Enzyme und benötigt Calciumionen sowohl für die katalytische Aktivität, als auch für die Bindung an das Collagenmolekül. Im Gegensatz zur Collagenase aus Wirbeltieren, schneidet die Collagenase aus Clostridium histolyticum natives Tripelhelix-Collagen in kleine Peptidstücke, was der Hauptgrund für die Anwendung der Collagenase in der Zellkultur ist. Für optimale Ergebnisse ist eine genau abgestimmte Mischung proteolytischer Enzyme nötig. Vier verschiedene Collagenasen, Collagenase Typ I >, Collagenase Typ II >, Collagenase Typ III > und Collagenase Typ IV >, stehen dafür zur Verfügung. Typ IV wird meist zusammen mit anderen Enzymen wie Trypsin >, Elastase oder Hyaluronidase > eingesetzt. Das üblicherweise in der Zellkultur verwendete Trypsin bzw. Trypsin/EDTA greift die Matrix nur langsam an und kann darüber hinaus irreversible Schädigungen der freigesetzten Zellen bewirken. Daher empfehlen wir statt Trypsin oder Trypsin/EDTA besser den Einsatz von Accutase >. Clostridium Collagenasen gehören zur großen Gruppe der Metalloproteasen, einer Proteasenfamilie, die als Gemeinsamkeit ein Zinkion enthaltenes Motiv im aktiven Zentrum besitzen (Gonzales and Robert-Baudouy 1996). Collagenase wird reversibel durch hohen pH und irreversibel durch niedrigen pH inaktiviert.  Folgende Verbindungen inhibieren: Cystein, EDTA, o-Phenanthrolin, 8-Hydroxyquinolin-5-sulfonat, Bipyridyl, 2,3-Dimercaptopropanol oder Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+. Collagenase wird NICHT durch Diisopropylphosphorofluoridat (DFP) oder Serum inhibiert. Lyphilisierte Collagenase sollte bei +2°C bis +8°C gelagert werden und ist dann mind. 3 Jahre stabil. Gelöste Collagenase kann bei -20°C gelagert werden und ist dann ungefähr für 1 Jahr stabil. Umrechnungsfaktoren für Collagenase-Aktivitätseinheiten: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg - 1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl oder CDU U/mg - 1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg (PZ-Einheiten entsprechen Wünsch-Einheiten).

1%-ige EDTA -Lösung in PBS ohne Calcium und Magnesium. Die 1%ige Lösung ist eine 5-fach konzentrierte Lösung. Im normalen Gebrauch wird eine Lösung mit 0,05% EDTA in PBS benutzt. PBS mit EDTA kann für verschiedene Anwendungen eingesetzt werden. - zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen.- zur Gewinnung dendritischer Zellen aus Monozyten.- PBS+EDTA sorgt für eine bessere Zellsortierung. - PBS/EDTA kann auch direkt, ohne Zugabe von Trypsin, für eine sehr schonende Zelldissoziation verwendet werden.

Trypsin aus Rinderpankreas, min. 2500 U/mg (nach BAEE) lyophilisiert. Enthält ca. 0.1% Chymotrypsin, Elastase und nichtproteolytische Aktivitäten. Einheiten-Definition: Die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,003 pro Minute bei 25°C durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit).

Trypsin 1:250 aus Schweinepankreas (240 - 260 USP U/mg). Enthält Chymotrypsin, Elastase und nichtproteolytische Aktivitäten. Die native Form von Trypsin besteht aus einem einkettigen Polypeptid von 223 Aminosäureresten, das durch entfernen eines N-terminalen Hexapeptids aus Trypsinogen entsteht. Die Polypeptidkette wird durch 6 Disulfidbrücken vernetzt und dadurch stabilisiert. Trypsin ist ein Mitglied der Serinprotease-Familie. AnwendungenTrypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininresten. Die Geschwindigkeit der Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn in der direkten Nachbarschaft von Lysin oder Arginin eine saure Aminosäure vorliegt. Ein benachbartes Prolin an der C-terminalen Seite von Lysin oder Arginin führt dazu, dass Trypsin an dieser Stelle nicht spalten kann. Der optimale pH-Wert für die Trypsin-Aktivität beträgt 7-9. Trypsin spaltet auch Ester- und Amidbindungen von synthetischen Aminosäurenderivaten. EDTA wird als Chelatbildner zu Trypsinlösungen hinzugesetzt um vorhandene Calcium- und Magnesiumionen zu entfernen. Sowohl Ca- als auch Mg-Ionen werden von Lysin und Arginin gebunden und verhindern damit, dass Trypsin an diesen Stellen schneiden kann. Das Entfernen dieser Ionen erhöht die enzymatische Aktivität. Trypsin wird durch Serin-Protease-Inhibitoren, einschließlich DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin, inhibiert. Herstellungshinweis für TrypsinlösungenDas Produkt ist ein lyophilisiertes Pulver das in wässrigen Lösungen löslich ist. Das Pulver wird in der Zellkultur in Hank′s Balanced Salt Solution mit 25mg/mL gelöst. Für Anwendungen die freies EDTA benötigen, sollte Trypsin in einer Pufferlösung gelöst werden, die kein Ca2+ oder Mg2+ enthält. Achtung: Lösungen von Trypsin in 1mM HCl sind für 1 Jahr bei -20°C stabil.  Die Anwesenheit von Ca2+ reduziert die Autolyse (Eigenverdau) und sorgt somit für eine höhere Stabilität der Lösung. Trypsin behält auch in 2,0M Harnstoff, 2,0M Guanidin-HCl, oder 0,1% (w/v) SDS einen Großteil seiner Aktivität. Einheiten-Definition: Eine BAEE-Einheit ist die Enzymmenge, die einen Anstieg der Absorption bei 253 nm von 0,001 pro Minute bei 25°C (pH7,6) durch die Hydrolyse von BAEE bewirkt. (NF/USP Einheit). Eine BTEE-Einheit entspricht 320 ATEE-Einheinten. Reaktionsvolumen: 3,2mL (1cm Lichtweg).

Zymolyase®, produced by a submerged culture of Arthrobacter luteus, has strong lytic activity against living yeast cell walls to produce protoplast or spheroplast of various strains of yeast cells. An essential enzyme for the lytic activity of Zymolyase® is β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase. It hydrolyzes linear glucose polymers with β-1,3-linkages and releases specifically laminaripentaose as the main and minimum product unit. Reported to be useful for lysis of Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomyces species. There are two preparations of Zymolyase®, Zymolyase®-20T (C4352) and Zymolyase®-100T (C4366) , having lytic activity of 20,000 units/g and 100,000 units/g respectively. The activity was tested towards brewer’s yeast cells (Saccharomyces cerevisiae, resting stage) or towar yeast cells of Saccharomyces uvarum (IFO 0565) cultured statically in malt extract medium. Zymolyase®-20T is ammonium sulfate precipitate while Zymolyase®-100T is a further purified preparation by affinity chromatography. Lytic activity varies depending on yeast strain, growth stage of yeast, or cultural conditions. Further informations related to Zymolyase® can be obtained from the data sheet and the references given there.

Zymolyase®, produced by a submerged culture of Arthrobacter luteus, has strong lytic activity against living yeast cell walls to produce protoplast or spheroplast of various strains of yeast cells. An essential enzyme for the lytic activity of Zymolyase® is β-1,3-glucan laminaripentaohydrolase. It hydrolyzes linear glucose polymers with β-1,3-linkages and releases specifically laminaripentaose as the main and minimum product unit. Reported to be useful for lysis of Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, and Schwanniomyces species. There are two preparations of Zymolyase®, Zymolyase®-20T (C4352) and Zymolyase®-100T (C4366) , having lytic activity of 20,000 units/g and 100,000 units/g respectively. The activity was tested towards brewer’s yeast cells (Saccharomyces cerevisiae, resting stage) or towar yeast cells of Saccharomyces uvarum (IFO 0565) cultured statically in malt extract medium. Zymolyase®-20T is ammonium sulfate precipitate while Zymolyase®-100T is a further purified preparation by affinity chromatography. Lytic activity varies depending on yeast strain, growth stage of yeast, or cultural conditions. Further informations related to Zymolyase® can be obtained from the data sheet and the references given there.