Wir haben die Leistung unserer Genaxxon Real-Time-Mastermixe unter Fast-Bedingungen getestet:
Zwei verschiedene 2-Schritt-Protokolle wurden an jeweils drei qPCR-Instrumenten unter Verwendung von zwei Targets unterschiedlicher Länge getestet: PAH12 (203 bp) und Pthr (75 bp). Alle sechs getesteten Fast-Protokolle zeigen hohe Präzision und Effizienz. Die erhaltenen R2- und Cq-Werte für die getesteten Fast-Protokolle liegen innerhalb der Kriterien, die normalerweise für das qPCR-Master-Mix-Standardprotokoll von Genaxxon festgelegt wurden.
Wir konnten feststellen, dass die qPCR-Laufzeiten mit Genaxxons qPCR-Mastermixen durch Ändern der Einstellungen von qPCR-Instrumenten um 30 bis 50 % reduziert werden. Fast 2-Schritt-Protokolle wurden erhalten, indem die Einstellungen an den drei angewendeten Standard-qPCR-Cyclern geändert wurden; LightCycler® 96, Mx3500P und StepOnePlus ™. Jedes Instrument stellt unterschiedliche Anforderungen an die ROX-Referenzfarbstoffe. Man erhält eine auf 41 Minuten verkürzte PCR-Laufzeit.
Eigenschaften unserer qPCR-Mastermixe:
• Hotstart-Eigenschafte für Set-up bei Raumtemperatur
• All-in-One-optimierter Mastermix mit oder ohne ROX
• Hohe Effizienz und Spezifität
• Hohe Stabilität und Reproduzierbarkeit
• Experimente können mit Standard-qPCR-Cyclern durchgeführt werden
qPCR (2x) -Mastermischungen von Genaxxon sind einfach zu verwendende All-in-One-Mastermischungen auf Dye- oder Probe-Basis. Die Mastermixe sind mit drei verschiedenen Mengen an ROX-Referenzfarbstoff erhältlich, z.B.:
ProbeMasterMix Low ROX > , GreenMastermix No ROX > oder GreenMasterMix High ROX >.
Fast real-time PCR results using Genaxxon Master Mixes on Mx3005P
GreenMasterMix Low ROXTM and ProbeMasterMix Low ROXTM were tested on Mx3005P (Agilent Technologies) using fast cycling real-time 2-step protocols; Fast Pthr Green Mx and Fast Pthr Probe Mx, respectively.
qPCR Setup: For GreenMasterMix Low ROXTM and ProbeMasterMix Low ROXTM, primers targeting Pthr (75 bp) and 4 concentrations of gDNA (40 ng, 20 ng, 10 ng and 5 ng) were used. All DNA concentrations were tested in quadruple replicates. See fig. 3 and 4. The PCR reaction mix was run on MX3005P (Requiring Low ROX). Instrument settings, run times and quality criteria for the applied fast protocols; Fast Pthr Green Mx and Fast Pthr Probe Mx, were compared to the standard protocol; Standard Pthr Mx. See table 2.
Results: The standard Fast Pthr Probe Mx protocol has a run time of 83.4 minutes. Fast Pthr Green Mx and Fast Pthr Probe Mx protocols, resulted in run times of 50.1 and 46.8 minutes, respectively. All protocol times are inclusive ramping time and a15 minutes hot start. The determined criteria, as shown in table 2, for Fast Pthr Green Mx and Fast Pthr Probe Mx protocols were acceptable. Furthermore, the melt curve analysis using GreenMasterMix Low ROXTM with Fast Pthr Green Mx protocol, confirmed high specificity.
Figure 3. Amplification plot, standard curve and melt curve for GreenMasterMix run on Mx3005P using Fast Pthr Green Mx protocol. Primers targeting Pthr (75 bp) and 4 concentrations of gDNA (40 ng, 20 ng, 10 ng and 5 ng) were used. All DNA concentrations were tested in quadruple replicates.
Figure 4. Amplification plot and standard curve for ProbeMasterMix run on Mx3005P using Fast Pthr Probe Mx protocol. Primers targeting Pthr (75 bp) and 4 concentrations of gDNA (40 ng, 20 ng, 10 ng and 5 ng) were used.
