PureIT ExoZAP - PCR Clean-Up Reagenz

Das PureIT ExoZAP - PCR Clean-Up Reagenz von Ampliqon kann zur enzymatischen Aufreinigung von PCR-Reaktionen verwendet werden, ohne dass DNA-Reinigungssäulchen benötigt werden. Mit PureIT ExoZAP gereinigte Proben sind sofort nach einer einfachen 5-minütigen Inkubationszeit bereit für den Einsatz in nachgeschalteten Anwendungen wie DNA-Sequenzierung oder SNP-Analyse (Einzelnukleotid-Polymorphismus).

Mit PureIT ExoZAP können PCR-Produkte von <100bp bis 20kbp von Primern und überschüssigen dNTPs befreit werden - ganz ohne Probenverlust! Die Kombination aus HL-ExoI und rekombinanter Shrimp Alkalischer Phosphatase (rSAP) hydrolysiert überschüssige Primer und Nukleotide in einem einzigen Schritt und lässt nur die amplifizierte DNA übrig.

Vorteile:
• Schnell. 5-Minuten-Protokoll
• Einschrittprotokoll ohne Zentrifugation
• Nur ein Pipettierschritt für saubere DNA-Sequenzierungsproben
• Einfaches Entfernen von überschüssigen Primern und nicht eingebauten Nukleotiden
• Minimierung des Probenverlusts. Bis zu 100% Rückgewinnung des Probenmaterials

Das innovative PureIT ExoZAP bietet die einfachste Möglichkeit zur schnellen Reinigung von PCR-Reaktionen. Nur ein Pipettierschritt, gefolgt von einem Inkubationsschritt bei 37°C für mind. 2 Minuten (Verdau), gefolgt von einem Inkubationsschritt bei 80°C für ca. 3 (-10) Minuten (Deaktivierung der Enzyme). Sie können Ihren PCR-Cycler direkt nach der PCR entsprechend programmieren, die PureIT ExoZAP Reaktionslösung in die Tubes pipettieren, den Cycler neu starten und nach nur 5 Minuten sind Ihre gereinigten Proben fertig für die Sequenzierung oder SNP-Analytik, zum Beispiel mit unserer SNP Pol DNA-Polymerase >!

Mit PureIT ExoZAP besteht die Möglichkeit, nach der BigDye™ Cycle Sequencing-Reaktion praktisch direkt zu sequenzieren, ohne dass zusätzliche, zeitaufwändigere Reinigungschritte mit, z.B. Dye Terminatore Purification kits durchgeführt werden müssen.

PureIT ExoZAP PCR CleanUp verbessert die Qualität der DNA-Sequenzierung signifikant

Ein PCR-Produkt von 866 bp Länge wurde mittels der Ampliqon TEMPase-DNA-Polymerase in Ammoniumpuffer amplifiziert.
Das PCR-Produkt wurde mit dNTPs und Primern versetzt und dann (A) ohne PureIT ExoZAP PCR CleanUp (B) mit
PureIT ExoZAP PCR CleanUp (2 +3 min) und (C) mit einem enzymatischen PCR-Reinigungsreagenz eines
Konkurrenzprodukts behandelt (1+ 4 min) vor der Sanger-Sequenzierung. Alle Proben wurden dreifach und gemäß den
Empfehlungen des Herstellers analysiert. Das Ergebnis der Sanger-Sequenzierung wurde durch grafische Darstellung der
Anzahl der Basenaufrufe mit bestimmten Qualitätswerten (Phred-Score) verglichen.
Die Behandlung von PCR-Produkten mit PureIT ExoZAP verbessert die Qualität der DNA-Sequenzierung signifikant.
Darüber hinaus zeigte PureIT ExoZAP PCR CleanUp PCR-Reinigungsergebnisse, die dem konkurrierenden PCR-Reinigungsreagenz entsprechen.
* Daten mit Qualitätswerten unter 10 sind nicht enthalten.

Ergebnisse der Sanger-Sequenzierung des 866-bp-PCR-Produkts. Die abgebildeten Elektropherogramme sind entweder
nach Behandlung mit PureIT ExoZAP PCR CleanUp (oben) oder unbehandelt (unten). Die gezeigte Sequenz liegt bei
ungefähr 250 - 300 Basen. Die Behandlung eines mit Spikes versehenen PCR-Produkts mit PureIT ExoZAP PCR CleanUp
verbessert die Qualität der Sanger-Sequenzierung erheblich. Die Behandlung erhöht die Signalintensität und beseitigt
Hintergrundstörungen und Basen-Miscalls.