Ni-NTA Agarose für His-tagged Proteine
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Produktinformationen "Ni-NTA Agarose für His-tagged Proteine"
Ni-NTA-Agarose wurde für die Affinitätsreinigung von Proteinen entwickelt, die eine Polyhistidin-Markierung tragen. Diese Affinitätschromatographie-Matrix basiert auf BioWorks-Workbeads, die aus 7,5% vernetzter Agarose bestehen. Das Material ist hochporös, um eine optimale Proteininteraktion zu ermöglichen. Vernetzte Agarose ist auch physikalisch sehr stabil und eignet sich für Reinigungsprozesse unter niedrigem Druck mit Flussraten von bis zu 6mL/min (optimal 0,5 - 2mL/min).
Unsere Ni-NTA-Agarose hat eine sehr homogene Größe mit einem mittleren Partikeldurchmesser von 40μm, was zu einem hohen Grad an Reproduzierbarkeit zwischen einzelnen Reinigungsdurchläufen führt.
Ni-NTA-Agarose besteht aus quervernetzter Agarose, an die mit Ni2+-Ionen beladene tetradendritische Nitrilotriessigsäure (NTA) kovalent gebunden ist. Die Bindungskapazität variiert mit den unterschiedlichen Proteinen aufgrund deren spezifischen Eigenschaften, wobei sie aber mindestens bei 50mg Zielprotein pro mL Agarose-Gel liegt. Das Harz ist bestens geeignet für die Einsatzbereiche Batch-, Spin- und Säulenverfahren jeglichen Maßstabs und bietet mit einer sehr homogenen Größenverteilung um einen mittleren Partikeldurchmesser von 40µm einen hohen Grad an Reproduzierbarkeit zwischen einzelnen Reinigungsansätzen.
Die Ni-NTA Agarose wird als gepufferte Suspension in 50% Ethanol geliefert. So entsprechen, z.B. 1x S5377.0010 20mL einer Suspension aus 10mL Resin und 10mL Wasser mit 20% EtOH.
Specifications
cross-linked Agarose
particle size: 32-60µm
binding capacity: 50mg/mL resin
max pressure: 3 bar (43 psi)
pH-stability: 2-14 (short term)
pH-stability: 3–12 (long term)
flow rates: 0.5-2.0mL/min (normally) up to 6.0mL/min possible
stable against: 100% MeOH, 100% EtOH, 8M Urea, 6M Guanidinium hydrochloride, 30% (v/v) Acetonitrile
Applikation / Application:
for purification of recombinant proteins for purification of His-tagged proteinsQuelle / Source:
syntheticKlassifizierungen / Classification
Dokumente:
SicherheitsdatenblätterProtokolle
Zertifikate
Datenblätter
Produktbeschreibung
Allg. Daten 1
Die Reinigung von His-getaggten Proteinen erfolgt typischerweise über Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC), bei der Metallionen wie Ni²⁺ (Nickel) oder Co²⁺ (Cobalt) an eine Matrix (z. B. NTA oder IDA) gebunden sind. Die Unterschiede zwischen Ni-Agarose und Co-Agarose bei der Reinigung ergeben sich hauptsächlich aus:
1. Bindungsspezifität
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Ni²⁺ (Nickel-Agarose):
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Geringere Spezifität: Nickel bindet auch Proteine mit nur wenigen Histidinen oder anderen Seitenketten (z. B. Cystein, Tryptophan).
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Mehr unspezifische Bindung, daher höhere Ausbeute, aber auch mehr Kontamination.
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Co²⁺ (Cobalt-Agarose):
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Höhere Spezifität: Bindet bevorzugt an vollständige His-Tags (z. B. 6xHis).
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Weniger unspezifische Bindung, daher reineres Eluat, aber tendenziell niedrigere Ausbeute.
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2. Ausbeute vs. Reinheit
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Ni-Agarose: Höhere Ausbeute, geringere Reinheit.
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Co-Agarose: Geringere Ausbeute, höhere Reinheit.
3. Elutionsverhalten
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Beide Systeme verwenden imidazolhaltige Puffer zur Elution, aber:
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Co²⁺-Säulen benötigen oft niedrigere Imidazolkonzentrationen zur Elution des Zielproteins.
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Dies kann empfindlicheren Proteinen zugutekommen.
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4. Empfindlichkeit gegenüber Imidazol im Waschpuffer
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Co²⁺-Säulen reagieren empfindlicher auf Imidazol in der Waschphase und verlieren bei zu hoher Konzentration schneller das Zielprotein.
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Ni²⁺-Säulen sind toleranter und ermöglichen aggressiveres Waschen zur Entfernung von Kontaminanten.
Quelle: NCBI PubMed
The UHRF1 Protein Stimulates the Activity and Specificity of the Maintenance DNA Methyltransferase DNMT1 by an Allosteric Mechanism
avel Bashtrykov, Gytis Jankevicius, Renata Z. Jurkowska, Sergey Ragozin, Albert Jeltsch
J Biol Chem. 2014 Feb 14; 289(7): 4106–4115.
doi: 10.1074/jbc.M113.528893
PMCID: PMC3924276
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