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Proteinase K Pulver - PCR tauglich

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Produktnummer: M3036.0100
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Produktinformationen "Proteinase K Pulver - PCR tauglich"

Proteinase K aus dem Pilz Tritirachium album ist eine unspezifische Protease aus der Familie der Serinproteasen. Proteinase K wird für die Aufspaltung von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet, da Proteinase K ein sehr breites und unspezifisches Erkennungsspektrum (schneidet die Carboxylenden von aromatischen, hydrophilen und aliphatischen Aminosäuren) besitzt und somit zuverlässig die verschiedensten Proteine verdauen kann. Damit ist das Enzym ein hervorragendes Werkzeug zur vollständigen hydrolytischen Spaltung von Proteinen (Ebeling W. et al. (1974) Eur. J. Biochem., 47, 91).

Proteinase K wird hauptsächlich in der Nukleinsäurereinigung oder zur Entfernung von Nukleasen eingesetzt.

Anwendungsbeispiele:

  • Präparation chromosomaler DNA für die PFGE
  • Abbau von Nukleasen (DNase, RNase) bei der Präparation von Nukleinsäuren, einschließlich der Gewinnung nativer RNA
  • Isolierung genomischer DNA aus Gewebe von Mausschwänzen
  • Isolierung genomischer DNA aus Zellkulturen

Aktivität: (Hämoglobin, pH7,5, 25°C) 30 mAnsonU/mg. Fremdaktivität: RNase und DNase nicht nachweisbar. Temperatur-Optimum: +65°C (Die Aktivität ist bei +65°C ca. 12x höher als bei +25°C). Über +65°C erfolgt Inaktivierung durch Denaturierung. Stabil von pH4,0-12,5. Aktivatoren: Denaturierende Agenzien wie SDS und Harnstoff. Inhibitoren: Hg2+, DFP, PMSF, AEBSF (M6360) > und Phenol. Keine Inhibition durch EDTA, Sulfhydryl-Reagenzien und Trypsin- bzw. Chymotrypsininhibitoren. Stabilisatoren wie Ca2+ (1-5mM) verhindern die Autolyse.

Anwendungshinweise: Reaktionspuffer: 50mM Tris-HCl, pH7,5, 5mM CaCl2, 0,5% SDS. Übliche Stammlösung: 20mg/mL in Wasser. Lagertemperatur der Stammlösung: -20°C. Übliche Arbeitskonzentration: 50µg/mL.

Proteinase K erhalten Sie von Genaxxon als Pulver (M3036) > oder als Lösung (20mg/mL, M3037) >.

Specifications:
Appearance: white lyophilisate
Activity: >30 AnsonU/mg protein (>30 units/mg)
DNAses and RNAses: not detectable
Solubility: easily soluble in water
pH (1% H2O, 20°C): 6.2 - 6.8
MW = ca. 27,000 g/mol.


Applikation / Application:
Protein digest in DNA samples Isolation of genomic DNA from mouse tails Isolation of genomic DNA from cell cultures

Einheiten / Units:
Activity: >30 U/mg lyophilizate. Specific activity: >40 U/mg protein. One unit is definded as the enzyme acitivity which liberates folin-positive amino acids and peptides corresponding to 1 µmol tyrosine in 1 minute at 37°C using haemoglobin as substrate.

Quelle / Source:
Tritirachium album


Sicherheits Hinweise / Safety

H-Sätze: H315, H319 ,H334, H335
GHS-Symbole: GHS07, GHS08
H-Sätze: R36/37/38-42
Gefahrstoffkürzel: Xn


Klassifizierungen / Classification

EC-Nr: 254-457-8
CAS-Nr: 39450-01-6
eclass-Nr: 32-16-04-10
Dokumente - Protokolle - Downloads :
Hier finden Sie Informationen und weiterführende Literatur. Für weitere Dokumente (Zertifikate mit weiteren Lotnummern, Sicherheitsdatenblätter in anderer Sprache, weitere Produktinformationen) wenden Sie sich bitte an Genaxxon biosience unter: info@genaxxon.com oder Tel.: +49 731 3608 123.


Dokumente:

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Zertifikate
Produktbeschreibung
Allg. Daten 1
Hier finden Sie Artikel und Literaturzitate, in denen die Autoren auf die hohe Qualität dieses Genaxxonprodukts vertrauen.
Quelle: NCBI PubMed

Quelle/Source: NCBI PubMed >

Decreased Enhancer-Promoter Proximity Accompanying Enhancer Activation
Nezha S. Benabdallah, Iain Williamson, Robert S. Illingworth, Lauren Kane, Shelagh Boyle, Dipta Sengupta, Graeme R. Grimes, Pierre Therizols, Wendy A. Bickmore
Mol Cell. 2019 Nov 7; 76(3): 473–484.e7. doi: 10.1016/j.molcel.2019.07.038
PMCID: PMC6838673

Glucocorticoid Receptor Binding Induces Rapid and Prolonged Large-Scale Chromatin Decompaction at Multiple Target Loci
Alasdair W. Jubb, Shelagh Boyle, David A. Hume, Wendy A. Bickmore
Cell Rep. 2017 Dec 12; 21(11): 3022–3031. Published online 2017 Dec 12. doi: 10.1016/j.celrep.2017.11.053
PMCID: PMC5745231

Enhancer turnover is associated with a divergent transcriptional response to glucocorticoid in mouse and human macrophages
Alasdair W Jubb, Robert S Young, David A Hume, Wendy A Bickmore
J Immunol. Author manuscript; available in PMC 2016 Jul 15.Published in final edited form as: J Immunol. 2016 Jan 15; 196(2): 813–822. Published online 2015 Dec 9.  doi: 10.4049/jimmunol.1502009
PMCID: PMC4707550

Active promoters give rise to false positive ‘Phantom Peaks’ in ChIP-seq experiments
Dhawal Jain, Sandro Baldi, Angelika Zabel, Tobias Straub, Peter B. Becker
Nucleic Acids Res. 2015 Aug 18; 43(14): 6959–6968.  Published online 2015 Jun 27. doi: 10.1093/nar/gkv637
PMCID: PMC4538825

ISWI Remodelling of Physiological Chromatin Fibres Acetylated at Lysine 16 of Histone H4
Henrike Klinker, Felix Mueller-Planitz, Renliang Yang, Ignasi Forné, Chuan-Fa Liu, Lars Nordenskiöld, Peter B. Becker
PLoS One. 2014; 9(2): e88411.  Published online 2014 Feb 6. doi: 10.1371/journal.pone.0088411
PMCID: PMC3916430

PRC1 and PRC2 Are Not Required for Targeting of H2A.Z to Developmental Genes in Embryonic Stem Cells
Robert S. Illingworth, Catherine H. Botting, Graeme R. Grimes, Wendy A. Bickmore, Ragnhild Eskeland
PLoS One. 2012; 7(4): e34848.  Published online 2012 Apr 9. doi: 10.1371/journal.pone.0034848
PMCID: PMC3322156

HP1 Binding to Chromatin Methylated at H3K9 Is Enhanced by Auxiliary Factors
Ragnhild Eskeland, Anton Eberharter, Axel Imhof
Mol Cell Biol. 2007 Jan; 27(2): 453–465.  Published online 2006 Nov 13. doi: 10.1128/MCB.01576-06
PMCID: PMC1800810


Application tipps
dissolve Proteinase K (20mg/mL) in water or in 50mM Tris/HCl (pH8.0), 1.5mM Ca-Acetate.

Following some application examples based on 20mg/mL concentrations of Proteinase K dissolved in pure water or 50mM Tris, pH8.0.

Standard reaction buffer: 
Cell lysis: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 5 mM CaCl2; 0.5 % SDS.
DNA purification: 100 mM Tris-HCl (pH 8.0); 50 mM EDTA, 500 mM NaCl.

Some Application Protocols:
Isolation of genomic DNA from mammal cells
(3h, 50°C) 10mM Tris/HCl (pH8.0), 100mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5%SDS, 20µg/mL DNase free RNase, 100µg/mL proteinase K.
Isolation of genomic DNA from mice tails
(overnight, 55°C) 20mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
Rapid isolation of genomic DNA as a PCR-template from cell cultures
(1h, 37 °C) 67mM Tris/HCl (pH8.8), 16.6mM ammonium sulfate, 5mM β-mercaptoethanol, 6.7mM MgCl2, 6.7µM EDTA (pH8.0), 1.7µM SDS, 50µg/mL proteinase K.
Preparation of DNA for PFGE, lysis in agarose block
(approx. 20h, 50°C). 100mM EDTA (pH8.0), 1 mM Tris/HCl (pH7.6), 20mM NaCl, 1% sarcosyl, 100µg/mL proteinase K.
Purification of mRNA prior to cDNA synthesis (leads often to an increase in cDNA yield)
(1-2h, 37°C) 100mM Tris/HCl (pH7.5), 10mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.1% SDS, 5µg/mL proteinase K.
Purification of PCR-reactions prior to cloning
(overnight, 55°C) PCR-reaction + 10mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
Purification of plasmid-DNA prior to in vitro transcription
(1h, 37°C) Plasmid-DNA + 21mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5% SDS, 100µg/mL proteinase K.
RNase inactivation in ribonuclease-protection-assays
(30 min, 37°C) 30µL RNA/RNA-hybridisation mix + 300µL RNase digestion mix + 0.6% SDS, 300µg/mL proteinase K.
Inactivation of DNase in transcription-run-on-assays
(30 min, 42°C) Suspension of nuclei in 36mM Tris/HCl (pH7.4), 17mM MgCl2, 0.7mM CaCl2, 170mM NaCl, 13mM EDTA (pH8.0), 0.5% SDS with DNase, 100µg/mL proteinase K.
Denaturation of alkaline phosphatase when cipping vector DNA
(30 min, 56°C) 1 x dephosphorylation buffer + 0.5% SDS, 5mM EDTA (pH8.0), 100µg/mL proteinase K.