ProbeMasterMix FAST High ROX für die qPCR
Vorteile im Überblick
- Enthält 500nM ROX für sondenbasierte qPCR
- Hohe Thermostabilität, Fluoreszenz und Sensitivität
- Kurze Denaturierungszeit von max. 2 Minuten
- Optimierung auf 2-Schritt PCR Protokoll
- Hotstarttechnologie verhindert Primerdimer-Bildung, erfordert kein Pipettieren auf Eis und kein sofortiges Weiterverarbeiten
Lieferzeit: 3 - 8 Werktage
Für genaue Informationen zum Liefertermin wenden Sie sich bitte an Genaxxon.
Shipment: on wet ice. Store at -20°C. For laboratory usage only!
ProbeMasterMix FAST mit 500nM ROX für die realtime PCR in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle PCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt.
Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten Hotstart Taq-Polymerase:
- Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur
- kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten
- optimiert auf 2-step PCR Protokolle
- Kein Pipettieren auf Eis notwendig
- Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden.
- Amplifikation auch von GC-reichen Templates
- Hohe Ausbeute
- Keine Primerdimerbildung
Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:
1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden.
2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben).
Der Probe qPCR Mastermix FAST mit 500nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen.
- Hotstart Taq DNA Polymerase
- dATP, dCTP, dGTP, dTTP
- optimierter Reaktionspuffer
- 500nM ROX als interner Standardfarbstoff
- Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen
- Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot).
Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™.
Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >).
Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern.
Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
- No-Template Control (NTC): Für jedes zu analysierende Gen ist es wichtig, eine NTC zu verwenden (einfach Wasser anstelle eines Templates). NTCs spielen eine entscheidende Rolle bei der Erkennung von Kreuzkontaminationen und sollten ein Standardbestandteil jeder qPCR sein.
- Referenzgene (früher bekannt als Housekeeping-Gene): Um eine robuste Genexpressionsanalyse zu gewährleisten, ist es eine gute Praxis, mehrere Referenzgene für jede Probe zu verwenden. Diese Referenzgene sollten unabhängig von der Behandlung eine stabile Expression aufweisen und als Referenzpunkte für die anschließende relative Quantifizierung dienen.
- Alternative Positivkontrolle: In Fällen, in denen Sie absolute Quantifizierungen durchführen und keine Referenzgene verwenden, wird die Einbeziehung einer alternativen Positivkontrolle empfohlen. Diese Kontrolle sollte in allen Szenarien stets ein bekanntes Ergebnis liefern.
- noRT-Kontrolle: Wenn Sie die reverse Transkription (RT) von mRNA als Vorlage verwenden, ist es ratsam, eine noRT-Kontrolle mit einer Probe ohne das Enzym durchzuführen.
- Reduzieren Sie die Primerkonzentration.
- Erhöhen Sie die Annealing-Temperatur (und achten Sie darauf, dass sie die Schmelztemperatur der Primer nicht überschreitet).
- Verkürzen Sie die Annealing-Zeit.
Specifications:
This ProbeMastermix is a ready-to-use 2-time master mix that contains 500nM ROX™
short initial denaturation times
optimized for 2-step qPCR
Aliquot size: 1mL.
Sicherheits Hinweise / Safety
Klassifizierungen / Classification
eclass-Nr: 32-16-05-02
Dokumente:
DatenblätterSpez. Produktbeschreibung
Allg. Daten 2
Allg. Daten 3
Kategorienliste
Quelle: NCBI PubMed
Fast PCR:
When performing fast real-time PCR, it is of high importance to consider primer design and target size. For efficient amplification during fast cycling conditions, target size between 70 bp and 200 bp is recommended. The shorter the target length, the faster the total run time. For other targets and other primer sets, the annealing step has to be determined experimentally.
Please use the following protocol for inspiration as you need to optimize instruments settings according to yourr target size and applied instruments.
Fast real-time PCR results using Genaxxon Master Mixes (without ROX) on LightCycler® 96
GreenMasterMix (2X) without ROX or ProbeMasterMix (2X) without ROX was tested on LighCycler96 (Roche) using fast cycling real-time 2-step protocols; Fast PAH12 Green LC and Fast Pthr Probe LC, respectively.
qPCR Setup: GreenMasterMix (2X) (without ROX) or ProbeMasterMix (2X) (without ROX), primers targeting either PAH12 (203 bp) or Pthr (75 bp) and 4 concentrations of gDNA (40 ng, 20 ng, 10 ng and 5 ng) were used. All DNA concentrations were tested in quadruple replicates. See fig. 1 and 2. The PCR reaction mix was run on LightCycler® 96 (No requirements for ROX). Instrument settings, run times and quality criteria for the applied fast protocols; Fast PAH12 Green LC and Fast Pthr Probe LC, were compared to the standard protocol; Standard Pthr LC. See table 1.
Results: The standard Fast Pthr Probe LC protocol has a run time of 80.8 minutes. Fast PAH12 Green LC and Fast Pthr Probe LC protocols, resulted in run times of 47.5 and 40.8 minutes, respectively. All protocol times are inclusive ramping time and a15 minutes hot start. The determined criteria, as shown in table 1, for Fast PAH12 Green LC and Fast Pthr Probe LC protocols were satisfying. Furthermore, the melt curve analysis using Green 2x Master Mix without ROX the Fast PAH12 Green LC protocol confirmed high specificity.