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HiDi 2X PCR Master Mix

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Hersteller Genaxxon bioscience



Artikel-Nr.: M3061.0000

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Produktinformationen "HiDi 2X PCR Master Mix"

Die SNP DNA-Polymerase HiDi im Mastermix erkennt spezifisch Primer mit Fehlpaarung (Mismatch) am 3'-Ende und amplifiziert diese dann nicht. Für die einfache, verlässliche und schnelle allelspezifische Diskriminierung, z. B. von CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, für das Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder zur Validierung von Sequenzierergebnissen. Die HiDi DNA-Polymerase unterscheidet hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert.

Für SNP Nachweise, ASA, HLA Genotypisierung oder die Analyse von methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Die HiDi-Polymerase ist ein probates Mittel zur schnellen und einfachen Kontrolle von CRISPR-/Cas9 off-target-Ergebnissen, besonders bei Punktmutationen und Deletionen.

Einmaliges Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet.

Beschreibung

Die HiDi DNA-Polymerase (High Discrimination of single nucleotides) ist eine hochselektive DNA-Polymerase. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die HiDi DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren. HiDi DNA-Polymerase ist daher ideal geeignet für SNP-Nachweise, ASA, HLA Genotypisierung oder die Analyse von einzelnen CpG Methylierungsstellen.

Bild: Anwendungsbeispiel HiDi DNA-Polymerase

Application Note for HiDi DNA Polymerase

Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich.
Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. HiDi DNA-Polymerase ist geeignet für Real-Time Anwendungen bei Verwendung eines geeigneten Real-Time Farbstoffs.
HiDi für Genotypisierung und SNP Analyse!

Anwendungsbeispiel für die HiDi DNA-Polymerase

As an alternative to ChIP, DNA adenine methyltransferase identification by sequencing (DamID-seq) was recently shown to be able to characterize binding sites in single mammalian cells. Additionally, DamID can be achieved for cell-type specific analysis by expressing Dam fusion proteins under tissue specific promoters in a controlled manner. In this report, we present a user-friendly pipeline to analyse DamID-seq data in C. elegans.

Sharma R, Ritler D, Meister P.
Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925.

Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in:

Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. 
Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129.

Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase

Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640

> häufig gestellte Fragen (FAQs)

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Hidi DNA-Polymerase für die einfache, verlässliche und schnelle allelspezifische Diskriminierung, z. B. von CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, für das Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder zur Validierung von Sequenzierergebnissen. Die HiDi DNA-Polymerase unterscheidet hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert.

 

Applikation:

- CRISPR/Cas9 controls - validation of NGS sequencing results - SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR - allelspezfische primer extension (AS-PEX) - Methylation specific PCR (MSP) - HLA genotyping - Micro-sequencing
 
 

Unser Kommentar zu "HiDi 2X PCR Master Mix"

high single nucleotide discrimination SNP
 

Technische Daten:

2-time master mix. Contains all components necessary for direct PCR or PCR based genotyping.

HiDi DNA polymerase shows no 5’-3’ exonuclease activity! Not applicable for usage together with hydrolysis probes like, e.g. TagMan probes.

Applikation:

- CRISPR/Cas9 controls - validation of NGS sequencing results - SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR - allelspezfische primer extension (AS-PEX) - Methylation specific PCR (MSP) - HLA genotyping - Micro-sequencing

Quelle

rec. from E.coli

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 34-16-04-90

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Hier finden Sie Infos und weiterführende Literatur zu HiDi 2X PCR Master Mix

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