3,3'-Diaminobenzidin Tetrahydrochlorid

3,3'-Diaminobenzidin (DAB) ist zu einem der verbreitetsten Farbstoffe in der Immunhistochemie geworden. Der Farbstoff, der ursprünglich als Substrat der Meerrettichperoxidase diente, bildet durch Oxidation ein braunes, in wässrigen oder organischen Lösungsmitteln, unlösliches Präzipitat. Mit diesem Enzymsubstrat kann aber auch die Aktivität von endogenen Peroxidasen in Peroxisomen (Katalase-Aktivität), in Mitochondrien (Cytochromoxidase) und im Endoplasmatischen Retikulum von Kupffer-Zellen (Peroxidase) nachgewiesen werden. Die optimalen Bedingungen für den Nachweis peroxisomaler Katalase mit DAB sind die Gewebefixierung mit einem Aldehyd, Inkubation mit 1 - 2 % DAB in hochalkalischem Puffer (pH 10,5) bei 37°C oder 45°C und einer hohen Wasserstoffperoxid-Konzentration (0,15 %, Ref. 2). Die Sensitivität und Intensität der Farbreaktion im Westernblot (Immunoblotting) wird durch Imidazol, Metallionen (Nickel, Kupfer, Kobalt, Silber) und niedrigere pH-Werte erhöht. Das verwendete Metallion beeinflusst die Farbe des Präzipitates.