DNase I (EC 3.1.21.1)

DNase I ist eine Endonuklease aus Rinderpankreas, die Doppel- und Einzelstrang-DNA in Oligo- und Mononukleotide hydrolisiert.

DNAse I wird unter anderem dazu verwendet unerwünschte Verklumpung bei der Gewebedisaggregation zu vermeiden, die eine Dispersion einzelner Zellen erschwert. Da die Disaggregation von Gewebe und die nachfolgende Isolierung einzelner Zellen immer mit der Ruptur und Lyse einiger Zellen einhergeht, wird DNA aus diesen Zellen in das umgebende Medium abgegeben. Die freigesetzte DNA im Medium wird für die unerwünschte Zellverklumpung bei Gewebedissoziationsverfahren verantwortlich gemacht. Dieser Verklumpungseffekt kann durch Zugabe von Desoxyribonuklease (DNase) zum Dissoziationsmedium vermieden werden und wurde für eine Vielzahl von verschiedenen Zell- und Gewebetypen beschrieben.

DNase kann auch eingesetzt werden, um, vor wichtigen Experimenten (wie RT-PCR), DNA aus RNA-Präparationen zu entfernen. Da keine Reinigungsmethode für RNA zu 100% die DNA entfernt, ist es angeraten, vor jeder RT-PCR, die DNA mittels DNAse I zu entfernen. Ein einfacher 15-minütiger Verdau bei Raumtemperatur beseitigt zuverlässig alle kontaminierende DNA. DNase I wird inaktiviert, indem man die Stopplösung zugibt und erhitzt. Da Hitze auch die RNA denaturiert, kann der Ansatz dann sofort für die reverse Transkription benutzt werden.

Diese DNAse I aus Rinderpankreas ist nicht RNase frei und muss vor Einsatz für die Isolation von RNA entsprechend chemisch behandelt werden.