Proteinase K Lösung (20 mg/mL) - SOMMER Aktion



Artikel-Nr.: QM3037.0005

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CAS-Nr: 39450-01-6

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Proteinase K aus dem Pilz Tritirachium album ist eine unspezifische Protease aus der Familie der Serinproteasen. Proteinase K wird für die Aufspaltung von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet, da Proteinase K ein sehr breites und unspezifisches Erkennungsspektrum (schneidet die Carboxylenden von aromatischen, hydrophilen und aliphatischen Aminosäuren) besitzt und somit zuverlässig die verschiedensten Proteine verdauen kann. Damit ist das Enzym ein hervorragendes Werkzeug zur vollständigen hydrolytischen Spaltung von Proteinen (Ebeling W. et al. (1974) Eur. J. Biochem., 47, 91).

Proteinase K wird hauptsächlich in der Nukleinsäurereinigung oder zur Entfernung von Nukleasen eingesetzt.

Anwendungsbeispiele:

  • Präparation chromosomaler DNA für die PFGE
  • Abbau von Nukleasen (DNase, RNase) bei der Präparation von Nukleinsäuren, einschließlich der Gewinnung nativer RNA
  • Isolierung genomischer DNA aus Gewebe von Mausschwänzen
  • Isolierung genomischer DNA aus Zellkulturen

Aktivität: (Hämoglobin, pH7,5, 25°C) 30 mAnsonU/mg. Fremdaktivität: RNase und DNase nicht nachweisbar. Temperatur-Optimum: +65°C (Die Aktivität ist bei +65°C ca. 12x höher als bei +25°C). Über +65°C erfolgt Inaktivierung durch Denaturierung. Stabil von pH4,0-12,5. Aktivatoren: Denaturierende Agenzien wie SDS (M3292) und Harnstoff (M3310). Inhibitoren: Hg2+, DFP, PMSF (M3194), AEBSF (M6360) und Phenol. Keine Inhibition durch EDTA (M3191), Sulfhydryl-Reagenzien und Trypsin- bzw. Chymotrypsininhibitoren. Stabilisatoren wie Ca2+ (1-5mM) verhindern die Autolyse.

Anwendungshinweise: Reaktionspuffer: 50mM Tris-HCl, pH7,5, 5mM CaCl2, 0,5% SDS. Übliche Stammlösung: 20mg/mL in Wasser. Lagertemperatur der Stammlösung: -20°C. Übliche Arbeitskonzentration: 50µg/mL. Durch Zugabe von 25mL Puffer oder Wasser kann direkt eine Stammlösung mit einer Konzentration von 20mg/mL angesetzt werden.
Proteinase K erhalten Sie von Genaxxon als Lösung oder als Pulver (M3036).

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Activity: min. 600 mAnsonU/mL; 20mg/mL proteinase K, 1mM CaCl2 x 2H2O, 10mM Tris-HCl (pH 7.5). mehr
 

Technische Daten:

Activity: min. 600 mAnsonU/mL; 20mg/mL proteinase K, 1mM CaCl2 x 2H2O, 10mM Tris-HCl (pH 7.5).

Applikation:

Protein digest in DNA samples for example: Purification of genomic DNA from bacteria (miniprep): Bacteria from a saturated liquid culture are lysed and proteins are removed by a digest with 100μg/mL Proteinase K for 1 h at 37°C. Whole-Mount in situ hybridization and determination of RNAs in vertebrate embryos and isolated organs: Digest of the sample with e. g. 10μg/mL Proteinase K for 15 minutes at room temperature. The period of the treatment and/or the concentration of the enzyme has to be optimized. Prepration of DNA from cells or tissue for PCR: Cells or tissue are incubated over night at 50°C with 100μg/mL Proteinase K. Isolation of vaccinia virus DNA: Digest the virus in a suspension with 2mg/mL Proteinase K for 4 h at 37°C.

Einheitendefinition:

Concentration: 20mg/mL, Activity: >30 U/mg (>600U/mL). 1 unit is definded as the enzyme acitivity which liberates folin-positive amino acids and peptides corresponding to 1 µmol tyrosine in 1 minute at 37°C using haemoglobin as substrate.

Quelle

Tritirachium album

Sicherheits Hinweise / Safety

H-Sätze: H315, H319, H335
GHS-Symbole: GHS07, GHS08
R-Sätze: R.36/37/38-42
Gefahrstoffkürzel: Xn

Klassifizierungen / Classification

EC-Nr: 254-457-8
CAS-Nr: 39450-01-6
eclass-Nr: 32-16-04-10
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