Flu-12-dUTP, min. 96% (1mM)

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TAMRA-dUTP auch Flu-12-dUTP genannt wird für die Fluoreszenzmarkierung von DNA mittels... mehr
Produktinformationen "Flu-12-dUTP, min. 96% (1mM)"

TAMRA-dUTP auch Flu-12-dUTP genannt wird für die Fluoreszenzmarkierung von DNA mittels terminaler Deoxynukleosidtransferase oder DNA-Polymerase eingesetzt. Für die DNA-Modifikation mittels PCR mit Flu-12-dUTP werden die 4 "normalen" dNTPs in normaler Konzentration eingesetzt. Das molare Verhältnis zwischen dTTP (dUTP) und Flu-12-dUTP kann zwischen 1:3 und 1:1 liegen.

Die Einbaurate hängt hauptsächlich vom Gebrauch von dTTP oder dUTP (dabei ist die Einbaurate von dTTP etwas besser als die von dUTP) und von der benutzten DNA Polymerase ab. Eine Standard Taq DNA Polymerase baut dUTP und besonders modifiziertes dUTP weitaus schlechter ein, als unsere HotScriptase RT (M3056).

Manchmal, bei ganz speziellen Anwendungen, wird dTTP komplett durch TAMRA-dUTP ersetzt, was zu einem Ersatz aller "Ts" in der DNA führt. DNA mit entsprechender Veränderung verhält sich komplett anders als native DNA. So sind die hydrophobizitäten Eigenschaften, die Denaturierungseigenschaften, die elektromobilität, etc. komplett anders. Dies muss einem bewusst sein, wenn man alle "Ts" durch TAMRA-dUTP ersetzt. Technisch ist es jedoch möglich.

Flu-12-dUTP wird als wässrige Lösung mit der Konzentration von 1mM geliefert.

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Specifications: Purity: >96% (HPLC) MW = 994 g/mol (free acid) Concentration: 1mM... mehr
 

Technische Daten:

Specifications:
Purity: >96% (HPLC)
MW = 994 g/mol (free acid)

Concentration: 1mM

Regular protocol for labelling of DNA with Flu-12-dUTP by PCR:
(ratio of labeled dUTP/nonlabeled:dTTP is 1:2)

Reagent Final concentration Quantity, for 50 µl of reaction mixture
Sterile deionized water  - - - variable
10X PCR buffer  1x 5µL
10 mM dNTP Mix  0.2mM each 1µL
Flu-12-dUTP, 1mM  0.1mM 5µL
Primer I  0.1 - 1µM variable
Primer II  0.1 - 1µM variable
HotScriptase  1.25 - 2.5 units/50µL 1.25 - 2.5 units
100mM MgCl2  1 - 4 mM variable
Template DNA 10pg - 1µg variable

PCR should be performed as optimized on the regular dNTPs – with the same MgCl2 concentration, with the temperatures and cycles optimized for the particular template and primers.

Applikation:

Fluorescent labelling of DNA by terminal deoxynucleotidyl transferase or DNA-polymerases.

Quelle

synthetic

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 34-16-08-06
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