Co-NTA-Agarose for His-tagged proteins
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Product information "Co-NTA-Agarose for His-tagged proteins"
NTA-Agarose consists of the tetradentate chelating agent, nitrilotriacetic acid (NTA), covalently coupled agarose beads, and is loaded with Co2+ ions. In processing recombinant fusion proteins from eukaryotes or in the case of special protein complexes, Genaxxon Co-NTA Agarose should always be used offering the possibility of higher protein purity levels. Both metal ions feature differing spatial properties and electronic binding potentials. While Co2+ binds only domains adjacent to residual histidine and is thus highly selective for 6×histidine-tagged fusion proteins, Ni2+ ions are less specific and can bind residual histidine outside the polyhistidine tag, which may result in higher contamination with foreign proteins. The unique production process yields a Co-NTA Agarose that exhibits a higher protein binding capacity than that of leading competitor products. Genaxxon Co-NTA Agarose is very robust in the presence of DTT and EDTA. In a stability test, Genaxxon Co-NTA Agarose was exposed to increasing concentrations of DTT or EDTA for 1h. Thereafter, the resins were used to purify E. coli-expressed GFP-His in gravity columns. The binding capacity of the resin decreased in the presence of both DTT and EDTA but the decay rate was shallow. Genaxxon NTA Agarose is supplied as a 50% buffered suspension in 20% Ethanol.
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ProtocolsManuals
General Data 2
Die Reinigung von His-getaggten Proteinen erfolgt typischerweise über Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC), bei der Metallionen wie Ni²⁺ (Nickel) oder Co²⁺ (Cobalt) an eine Matrix (z. B. NTA oder IDA) gebunden sind. Die Unterschiede zwischen Ni-Agarose und Co-Agarose bei der Reinigung ergeben sich hauptsächlich aus:
1. Bindungsspezifität
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Ni²⁺ (Nickel-Agarose):
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Geringere Spezifität: Nickel bindet auch Proteine mit nur wenigen Histidinen oder anderen Seitenketten (z. B. Cystein, Tryptophan).
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Mehr unspezifische Bindung, daher höhere Ausbeute, aber auch mehr Kontamination.
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-
Co²⁺ (Cobalt-Agarose):
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Höhere Spezifität: Bindet bevorzugt an vollständige His-Tags (z. B. 6xHis).
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Weniger unspezifische Bindung, daher reineres Eluat, aber tendenziell niedrigere Ausbeute.
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2. Ausbeute vs. Reinheit
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Ni-Agarose: Höhere Ausbeute, geringere Reinheit.
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Co-Agarose: Geringere Ausbeute, höhere Reinheit.
3. Elutionsverhalten
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Beide Systeme verwenden imidazolhaltige Puffer zur Elution, aber:
-
Co²⁺-Säulen benötigen oft niedrigere Imidazolkonzentrationen zur Elution des Zielproteins.
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Dies kann empfindlicheren Proteinen zugutekommen.
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4. Empfindlichkeit gegenüber Imidazol im Waschpuffer
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Co²⁺-Säulen reagieren empfindlicher auf Imidazol in der Waschphase und verlieren bei zu hoher Konzentration schneller das Zielprotein.
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Ni²⁺-Säulen sind toleranter und ermöglichen aggressiveres Waschen zur Entfernung von Kontaminanten.
Zusammenfassung als Tabelle:
| Eigenschaft | Ni-Agarose | Co-Agarose |
|---|---|---|
| Spezifität | Mittel | Hoch |
| Ausbeute | Hoch | Mittel bis gering |
| Reinheit | Mittel | Hoch |
| Imidazol-Toleranz (Waschen) | Hoch | Gering |
| Elution (Imidazol) | Höher nötig | Geringere Konzentration |
| Typischer Einsatz | Routine-Purifikation | Hohe Reinheit erforderlich |