Produkte für die RT-PCR
Die reverse Transkriptase-PCR (RT-PCR / RNA PCR) gilt immer noch als das spezifischste und empfindlichste Verfahren zum Nachweis und zur Quantifizierung von mRNA. Hierfür bietet Genaxxon die speziell entwickelte Volcano2G DNA-Polymerase an. Diese besitzt eine einzigartige, kombinierte RT-PCR- und DNA-Polymerasenfunktion: Die reverse Transkription und die DNA-Amplifikation erfolgen gleichzeitig während des Elongationsschritts bei der PCR, so dass kein zeitaufwendiger und teurer isothermaler RT-Zwischenschritt mehr benötigt wird. Die Volcano2G DNA-Polymerase zeichnet sich zudem durch extreme Thermostabilität aus. Bei entsprechender Gestaltung der spezifischen Primer gehören Sekundärstrukturprobleme bei der eingesetzten RNA somit der Vergangenheit an. Die empfohlene Amplicongröße beträgt 60 - 400 bp!
Im Laufe der letzten Jahre hat die Entwicklung von neuartigen Chemikalien und Instrumenten für die realtime PCR / qPCR dazu geführt, dass sich die realtime RT-PCR (RT-qPCR) als Methode der Wahl zur Quantifizierung von Veränderungen in der Genexpression durchgesetzt hat. Auch ist die realtime RT-PCR die bevorzugte Methode für die Validierung der Ergebnisse aus Feldanalysen und anderen Techniken, um Änderungen in der Genexpression zu verfolgen.
Im Vergleich zu anderen herkömmlichen Techniken zur Quantifizierung von mRNA - Northern Blot-Analysen und RNase-Protection-Assays - reichen bei der RT-PCR sehr viel geringere Mengen an Probe aus. Dieses Verfahren ist sogar empfindlich genug, um die Quantifizierung von RNA aus einer einzigen Zelle zu ermöglichen.
Ein weiteres Enzym zur Synthese von cDNA ist die Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV, MMLV) Reverse Transkriptase. M-MuLV Reverse Transkriptase besitzt keine 3´ → 5´ Exonukleaseaktivität.
Für die cDNA-Synthese bietet Genaxxon weiterhin den cDNA One-Step RT-PCR Kit an.
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