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Science
Exosome Isolation and Purification
Von Herausforderungen zu Lösungen: Optimieren Sie Ihre Exosomen-Isolation
Die Isolation von Exosomen kann eine anspruchsvolle Aufgabe sein, da häufige Probleme wie geringe Ausbeute, Kontamination und Verlust der Integrität die Forschung erschweren. Während die Ultrazentrifugation lange Zeit als Goldstandard galt, eröffnen moderne Methoden wie Membranaffinität, Solid-Phase-Binding und Magnetic Beads neue Möglichkeiten für eine präzisere und effizientere Exosomen-Isolation. Genau hier kommt Genaxxon ins Spiel! Unsere exklusiven Isolationskits, die auf der innovativen Magnetic Bead-Technologie basieren, bieten Ihnen die ultimative Lösung für Ihre Exosomen-Isolation.
Entwickelt, um höchste Effizienz und Reinheit zu gewährleisten, ermöglichen unsere Kits eine präzise und zuverlässige Isolation von Exosomen, die Ihre Forschung auf das nächste Level hebt.
Exosomen: Schlüsselakteure in Zellkommunikation und Krankheitsforschung
Diese kleinen Vesikel, die reich an miRNA und anderen kurzfragmentierten RNA-Sequenzen sind, spielen eine zentrale Rolle in der Zellkommunikation. Trotz ihrer geringen Anzahl und empfindlichen Natur können Exosomen aus einer Vielzahl von biologischen Proben, darunter Plasma, Serum, Urin, Liquor und Speichel isoliert werden. Die Isolation von Exosomen ist mit der entscheidende Schritt, der über den Erfolg weiterer Anwendungen entscheidet. Doch bei diesem kritischen Schritt treten häufig Probleme auf, wie beispielsweise niedrige Ausbeute, Kontaminationen und Verlust der Integrität der Exosomen. Entscheidend ist hierbei oft auch die Isolationstechnik.
• Keine chemischen Reagenzien erforderlich, die ggf. Downstream-Applikationen beeinflussen könnten
• Zeitaufwändig
• Kontaminationen mit anderen EVs und Proteinen
• Beschädigung der Exosomen durch hohe Zentrifugalkraft
• Skalierbar für große Probenvolumina und kombinierbar mit weiteren Isolationsmethoden, um höhere Ausbeute zu erreichen
• Relativ kostengünstig Nachteile:
• Geringe Reinheit, wenig spezifisch
• Höhere Ausbeute im Vergleich zur Ultrazentrifugation
• Geeignet für große Probenvolumina
• Weniger Kontaminationen
• Höhere Ausbeute im Vergleich zur Ultrazentrifugation
• Weniger Kontaminationen
• Höhere Ausbeute im Vergleich zur Ultrazentrifugation
• Geeignet für große Probenvolumina
• Präzisere Isolierung dank spezifischer Bindung, daher hohe Reinheit
o Verwenden Sie größere Probenvolumina
o Konzentrieren Sie Ihre Proben durch Techniken wie Ultrafiltration
• Optimale Lagerung: Exosomen sind äußerst empfindlich gegenüber wiederholten Einfrier- und Auftauzyklen sowie hohen Lagertemperaturen
o Bewahren Sie Exosomen stets bei -80°C für eine langfristige Lagerung auf
o Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.
• Verwenden Sie spezialisierte Kits: Kommerzielle Kits sind oft auf maximale Ausbeute und Reinheit optimiert. Sie enthalten speziell formulierte Puffer und Reagenzien, die die Effizienz der Exosomen-Isolation erhöhen.
• Folgen Sie den im Kit-Protokoll beschriebenen Schritten sorgfältig:
o Filtern Sie die Proben nicht.
o Verwenden Sie die Reagenzien innerhalb der angegebenen Haltbarkeit.
o Frieren Sie MagBeads nicht ein – diese werden sonst unbrauchbar.
o Halten Sie sich bei MagBeads oder Reagenzien an die im Protokoll angegebenen Mengen
o Magnetic Bead Technologie: Durch die Wahl von Beads, die an spezifische Oberflächenproteine der Exosomen binden, kann die Reinheit erheblich verbessert werden.
o Immunocapture: Antikörper, die spezifisch an Exosomenoberflächenproteine binden, können verwendet werden, um Exosomen selektiv zu isolieren und andere Vesikel zu eliminieren.
• Kombinieren Sie mehrere Isolationsmethoden: Mithilfe mehrstufiger Reinigungsprozesse können Sie die Reinheit maximieren.
o Verwenden Sie niedrige Temperaturen
o Verwenden Sie milde Zentrifugalkräfte o Vermeiden Sie Hochgeschwindigkeitszentrifugation
• Puffer optimieren:
o Verwenden Sie Pufferlösungen, die die strukturelle Integrität der Exosomen schützen, wie z.B. Phosphat-gepufferte Salzlösung (PBS) oder Tris-gepufferte Salzlösung (TBS).
o Stellen Sie sicher, dass pH-Wert und Osmolarität der Puffer für die Stabilität der Exosomen geeignet sind. • Qualitätskontrollen:
o Führen Sie regelmäßig Qualitätskontrollen durch, wie Transmissionselektronenmikroskopie (TEM), Nanopartikel-Tracking-Analyse (NTA) und Western
o Sorgen Sie für ein steriles Arbeitsumfeld.
o Verwenden Sie sterile Techniken, um Kreuzkontaminationen während des Prozesses zu vermeiden.
o Nutzen Sie Einweg-Zentrifugenröhrchen und -Filter.
• Kontamination mit Fremd-Proteinen
o Verkürzen Sie die Inkubationszeit zwischen Proben und Magnetperlen, um unspezifische Adsorption zu vermeiden
o Reduzieren Sie die Menge der für die Exosomenreinigung verwendeten Probe oder verwenden Sie unkonzentrierte Proben.
• Die Proteinkonzentration nach Extraktion aus Exosomen ist gering
o Erhöhen Sie die Exosomenkonzentration (s. Punkt 1: Niedrige Ausbeute)
o Wählen Sie einen Lysepuffer mit starkem Protein-Denaturierungsmittel
• Die miRNA Konzentration nach Extraktion aus Exosomen ist gering
o Erhöhen Sie die Exosomenkonzentration (s. Punkt 1: Niedrige Ausbeute)
o Wählen Sie ein geeignetes Set zur Isolation von miRNA aus Exosomen.
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