RT-PCR und RT-qPCR

Warum Sie die Challenger Hotstart RT wählen sollten:Ultraschnelle cDNA-Synthese – Bereits in nur 2 Minuten möglich. Erweiterte Stabilität – In All-in-One-Reaktionsmischungen behält die Challenger Hotstart RT ihre volle Leistungsfähigkeit selbst nach 7 Tagen bei 37 °C.Setup bei Raumtemperatur – Pipettieren ohne Kühlung, spart Zeit und reduziert Fehler. Warm-Start Reverse Transkriptase – Erst bei hoher Temperatur aktiviert, verhindert unspezifische cDNA-Synthese vor Reaktionsbeginn. Hervorragende Thermostabilität – Über 99 % der Enzymaktivität bleiben bei 42 °C inhibiert für kontrollierten, zuverlässigen Start. Vielseitige Anwendungen – Ideal für schnelle cDNA-Synthese, RT-PCR und RT-qPCR, auch bei schwierigen RNA-Templates.Optimiert für leistungsstarke Reverse-Transkriptions-WorkflowsChallenger Hotstart RT ist für anspruchsvolle Anwendungen entwickelt. Die Warm-Start-Technologie hält das Enzym während der Vorbereitung inaktiv und ermöglicht so die präzise Kontrolle über den Start der cDNA-Synthese. Die verbesserte Thermostabilität sorgt für robuste Leistung: Die Challenger Hotstart RT ist bei 42 °C noch inaktiv und wird erst bei höheren Temperaturen aktiviert. Daher ist eine Standard-RT mit oligo(dT)-Primern oder Random-Hexamer-Primern bei 42 °C mit diesem Enzym nicht möglich.Schnelle und zuverlässige cDNA-SyntheseChallenger Hotstart RT ermöglicht eine effiziente Reverse Transkription selbst bei Templates mit komplexer Sekundärstruktur oder hohem GC-Gehalt. Dank der erhöhten Thermostabilität entsteht die cDNA schnell und präzise, ohne Einbußen bei Spezifität oder Ausbeute.Langzeitstabilität und einfache HandhabungFür den täglichen Laborgebrauch entwickelt, unterstützt Challenger Hotstart RT ein Setup bei Raumtemperatur, vereinfacht den Workflow und reduziert Fehler. Die robuste Formulierung sorgt für zuverlässige Lagerung und Versandstabilität – ideal für Routine- und Hochdurchsatzanwendungen.Typische AnwendungencDNA-Synthese aus Total RNA oder mRNA, auch bei schwierigen Templates. One-Step- oder Two-Step-RT-qPCR mit hoher Sensitivität, selbst bei geringem RNA Input. Forschungs- und Diagnostik-Workflows mit hohen Anforderungen an Reproduzierbarkeit. Hochdurchsatz-Anwendungen, einschließlich Multiplex-Panels oder Screening-AssaysWichtige Merkmale im ÜberblickUltraschnelle cDNA-Synthese – bereits in 2 Minuten. Erweiterte Stabilität – volle Leistung nach 7 Tagen bei 37 °C in vorkomplettierten Reaktionsmischungen.Warm-Start Reverse Transkriptase – verzögerte Aktivierung für erhöhte Spezifität. Hohe Thermostabilität – unterstützt schwierige RNA-Templates. Setup bei Raumtemperatur – einfacher Workflow, weniger Fehler. Robuste Leistung – geeignet für Routine- und Hochdurchsatzanwendungen.

Die wichtigsten Gründe für den Challenger Hotstart RT-qPCR 4x MastermixSetup bei Raumtemperatur – Einfaches Pipettieren ohne Kühlung, spart Zeit und reduziert Fehler.warm-start Reverse-Transkriptase – Verhindert unspezifische Amplifikationen und ermöglicht Primer/Probe-Premixing.Überragende Kontaminationskontrolle – Das UDG/dUTP-System beseitigt Carryover-Kontaminationen für zuverlässige qPCR-Ergebnisse.Schnelle RT-qPCR-Protokolle – Komplette Assays in nur 30 Minuten mit einem 5-minütigen Reverse-Transkriptionsschritt.Hochsensitive RT-qPCR – Nachweis von nur 1–10 RNA-Kopien.Flexible Anwendungen – Single- und Multiplex-RT-qPCR für Virusnachweis, Genexpressionsanalysen und Diagnostik.Optimiert für High-Performance-qPCR-WorkflowsDie 4× konzentrierte Formulierung ermöglicht High-Throughput-Analysen und Multiplexing bei gleichzeitig hoher Reaktionseffizienz. Die Kombination aus warm-start RTase, antikörpermodifizierter Taq-DNA-Polymerase und RNase-Inhibitor sorgt für präzise Kontrolle – Ihre Reaktionen starten erst dann, wenn Sie es wollen.Kontaminationsfreie One-Step RT-qPCRDas integrierte dUTP/UDG-Schutzsystem verhindert falsch-positive Ergebnisse durch Carryover-Kontamination. In Kombination mit einem RNase-Inhibitor ist dies entscheidend für Labore, die hochsensitive Virus-RNA-Detektion und die Entwicklung diagnostischer Assays durchführen.Schnelle RT-qPCR-Protokolle ohne GenauigkeitsverlustMit Challenger beschleunigen Sie die Detektion, ohne an Sensitivität einzubüßen:Standardprogramm: 55 °C für 15 min RT, ~1 h GesamtzeitFAST-Programm: 55 °C für 5 min RT, ~30 min GesamtzeitVergleichsstudien mit HBV-/HCV-RNA-Proben bestätigten eine überlegene Stabilität und konsistente Ct-Werte im Vergleich zu Konkurrenzprodukten.Langzeitstabilität, auf die Sie sich verlassen könnenIm Gegensatz zu herkömmlichen RT-qPCR-Mixen wurde der Challenger Hotstart RT-qPCR 4x Mastermix speziell für eine lange Haltbarkeit entwickelt. Selbst unter Testbedingungen bei 37 °C über 10 Tage hinweg blieb die Multiplex-Detektion stabil – und gewährleistet damit eine verlässliche Leistung während Lagerung und Transport.BeispielanwendungenVirus-RNA-Detektion: HBV, HCV, Influenza, RSV, SARS-CoV-2, hMPV, PIV1 u. v. m.Genexpressionsanalyse: präziser Nachweis von RNA Targets mit hoher und niedriger KopienzahlKlinische Forschung & Diagnostik: robuste, reproduzierbare DatenHigh-Throughput-Tests: Multiplex-RT-qPCR-Panels für respiratorische, gastrointestinale und HepatitisvirenUnd viele weitere…Wichtige Eigenschaften im ÜberblickOne-Step RT-qPCR Master Mix mit warm-start RTaseHochsensitive qPCR – Nachweis einzelner RNA-KopienSchnelles RT-qPCR-Protokoll – 5 min RT, 30 min GesamtzeitStabilität der RT-Enzyme – stabil bei 37 °C für 10 TageUDG/dUTP-Kontaminationskontrolle – eliminiert Carryover-Risiko4× konzentriertes Format – unterstützt MultiplexingHohe Sensitivität und stabile DetektionStabiler Nachweis einzelner RNA-Kopien mit dem Challenger Hotstart RT-qPCR 4X Mastermix:

Der One-Step RT-qPCR 2X Mastermix von Genaxxon wurde für quantitative real-time-Analysen von RNA-Templates mit SybrGreen® entwickelt. Der gebrauchsfertige Mix basiert auf einer gentechnisch veränderten reversen Transkriptase mit verbesserter thermischer Stabilität, die eine erhöhte Spezifität, eine hohe cDNA-Ausbeute und eine verbesserte Effizienz für hochstrukturierte und lange cDNA-Fragmente bietet.Um eine schnelle und einfache Handhabung mit einem Minimum an Pipettierschritten zu gewährleisten, enthält der 2X Mastermix bereits alle für die RT-qPCR erforderlichen Reagenzien (außer Template und Primer). Die hochwertigen Enzyme und der optimierte Reaktionspuffer mit hochreinen dNTPs gewährleisten überlegene real-time PCR-Ergebnisse. Dieser Mastermix enthält kein ROX - bitte achten Sie auf die korrekten Einstellungen Ihres qPCR-Cyclers. Eine Liste der gängigsten Thermocyclern und ihrer ROX-Kompatibilität finden Sie im Reiter "Tipps". Allgemeine Beschreibung: RT-qPCR wird verwendet, um doppelsträngige DNA aus einzelsträngigen RNA-Templates zu amplifizieren, bzw. um eine schnelle real-time-Quantifizierung von RNA-Targets zu ermöglichen. Im reversen Transkriptionsschritt synthetisiert die reverse Transkriptase einzelsträngige DNA-Moleküle (cDNA), die zur RNA-Matrize komplementär sind. Die so synthetisierten cDNA-Moleküle werden von einer HotStart-DNA-Polymerase in der nachfolgenden PCR amplifiziert und detektiert. Die HotStart-Polymeraseaktivität wird bei Umgebungstemperatur blockiert und zu Beginn der anfänglichen Denaturierung automatisch aktiviert. Die thermische Aktivierung verhindert die Extension von nicht spezifisch annealten Primern und Primer-Dimer-Formationen bei niedrigen Temperaturen während des PCR-Setups. Somit bietet die One-Step RT-qPCR enormen Komfort bei der Analyse von Targets aus mehreren RNA-Proben und minimiert das Risiko von Kontaminationen.  Für RNA, die einen hohen Grad an Sekundärstrukturen zeigt, bzw. für komplementäre Primer eignet sich besonders der Challenger Hotstart RT-qPCR 4x Mastermix (M3060 >)! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

Der One-Step RT-qPCR 2X Mastermix - Probe ohne ROX® von Genaxxon wurde für quantitative real-time-Analysen von RNA-Templates mit doppelt markierten Fluoreszenz-Probes entwickelt. Der gebrauchsfertige Mix basiert auf einer gentechnisch veränderten reversen Transkriptase mit verbesserter thermischer Stabilität, die eine erhöhte Spezifität, eine hohe cDNA-Ausbeute und eine verbesserte Effizienz für hochstrukturierte und lange cDNA-Fragmente bietet. Um eine schnelle und einfache Handhabung mit einem Minimum an Pipettierschritten zu gewährleisten, enthält der 2X Mastermix bereits alle für die RT-qPCR erforderlichen Reagenzien (außer Template, Primer und Sonden). Die hochwertigen Enzyme und der optimierte Reaktionspuffer mit hochreinen dNTPs gewährleisten überlegene real-time PCR-Ergebnisse. Der optimierte Puffer sorgt für eine schnelle Kinetik, eine RNA-Sensitivität von <10 fg und eine zuverlässige Zielamplifikation – selbst für schwierige Templates und Multiplex-Anwendungen mit mehr als 6 Targets.Dieser Mastermix enthält kein ROX - bitte achten Sie auf die korrekten Einstellungen Ihres qPCR-Cyclers. Eine Liste der gängigsten Thermocyclern und ihrer ROX-Kompatibilität finden Sie im Reiter "Tipps". Allgemeine Beschreibung:RT-qPCR wird verwendet, um doppelsträngige DNA aus einzelsträngigen RNA-Templates zu amplifizieren, bzw. um eine schnelle real-time-Quantifizierung von RNA-Targets zu ermöglichen. Im reversen Transkriptionsschritt synthetisiert die reverse Transkriptase einzelsträngige DNA-Moleküle (cDNA), die zur RNA-Matrize komplementär sind. Die so synthetisierten cDNA-Moleküle werden von einer HotStart-DNA-Polymerase in der nachfolgenden PCR amplifiziert und detektiert. Die HotStart-Polymeraseaktivität wird bei Umgebungstemperatur blockiert und zu Beginn der anfänglichen Denaturierung automatisch aktiviert. Die thermische Aktivierung verhindert die Extension von nicht spezifisch annealten Primern und Primer-Dimer-Formationen bei niedrigen Temperaturen während des PCR-Setups. Somit bietet die One-Step RT-qPCR enormen Komfort bei der Analyse von Targets aus mehreren RNA-Proben und minimiert das Risiko von Kontaminationen. Für RNA, die einen hohen Grad an Sekundärstrukturen zeigt, bzw. für komplementäre Primer eignet sich besonders der Challenger Hotstart RT-qPCR 4x Mastermix (M3060 >)! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

Ready to use One-Step RT-PCR  MasterMix - Standard Unser One-Step RT-PCR Kit ist speziell für hochsensitive und spezifische RT-PCR geeignet. Der Kit enthält eine genetisch veränderte Reverse Transkriptase mit erhöhter Thermostabilität, was zu einer verbesserten Spezifität, hoher cDNA-Ausbeute und einer verbesserten Effizienz besonders bei langen cDNA-Fragmenten führt. Der Kit enthält alle Bestandteile, die für die RT-PCR (mit Ausnahme des Templates und der Primer) benötigt werden und verbindet so eine einfache Handhabung mit hoher Flexibilität. Die im Kit enthaltene Reverse Transkriptase, DNA-Polymerase, ultrareine dNTPs und der optimierte Reaktionspuffer garantieren hervorragende Amplifikationsergebnisse. RT-PCR wird eingesetzt, um einzelsträngige RNA in doppelsträngige DNA umzuschreiben. Dabei wird im RT-Schritt durch die Reverse Transkriptase einzelsträngige DNA synthetisiert, die komplementär zum vorliegenden RNA-Strang ist. Anschließend wird im ersten PCR-Schritt aus der einzelsträngigen DNA doppelsträngige DNA synthetisiert, die dann in den folgenden PCR-Schritten durch die DNA-Polymerase amplifiziert wird. Bei der One-Step RT-PCR sind alle Komponenten für die reverse Transkription und auch für die nachfolgende PCR vorgemischt in einem Reaktionsgefäß vorhanden, so dass die reverse Transkription sowie die nachfolgende PCR nacheinander ausgeführt werden, ohne dass dazwischen das Reaktionsgefäß nochmals geöffnet werden muss. Dies bietet einen gewaltigen Vorteil, wenn die Analyse eines einzigen Targets in vielen verschiedenen RNA-Proben analysiert werden soll und minimiert gleichzeitig das Risiko einer Kontamination. Für RNA, die einen hohen Grad an Sekundärstrukturen zeigt, bzw. für komplementäre Primer eignet sich besonders der Challenger Hotstart RT-qPCR 4x Mastermix (M3060 >)! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

Die Genaxxon bioscience M-MuLV Reverse Transkriptase, codiert durch den Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV RT) und in E.coli exprimiert ist eine RNA-abhängige DNA Polymerase ohne RNase H Aktivität. Das Enzym synthetisiert den cDNA Erststrang von einem RNA Template an das ein entsprechender Primer gebunden hat. M-MuLV RT wird aber auch Primer verlängern die an Einzelstrand-DNA gebunden haben! Es ist daher darauf zu achten, dass bei der cDNA-Synthese keine DNA mehr vorhanden ist. Das Enzym kann für die Synthese von cDNA von 100 bp bis zu 10 kb Länge benutzt werden. Die Synthese von Zweitstrang-cDNA kann mit einigen RNA Termplates erzielt werden, ohne dass eine weitere Polymerase hinzu gegeben werden muss. Von Genaxxon gibt es das Enzym HotScriptase (M3056) > oder den HotScriptase master mix (M3062 >; M3064 >) mit dem direkt, ohne den zeitaufwendigen isothermalen Transkriptionsschrit, doppelsträngige DNA synthetisiert wird: Zeitersparnis: bis zu 50%. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Die Genaxxon bioscience Scriptase RT ist eine proprietäre Reverse Transkriptase mit verminderter RNase-H Aktivität und erhöhter Thermostabillität die eine hohe Spezifität, längere cDNAs und auch bei GC-reichen Ziel-RNAs eine höhere Ausbeute garantiert. Mit Hilfe der mitgelieferten Oligo(dT) und Random Hexamer Primer können Sie das Protokoll sehr einfach entsprechend Ihren Erfordernissen optimieren. Wir empfehlen die Scriptase RT für die Synthese von cDNA von 100 bp bis zu 10 kb Länge.EigenschaftenReady-to-use Kit inkl. Primer und DNaseGeeignet für Templates bis 17 kbHohe Ausbeute durch reduzierte RNase-H AktivitätKomplette Reverse Transkription in unter 15 MinutenFür spezifische Primer, Random Hexamere oder Oligo(dT) PrimerFür komplexe Transkripte RT bis 65°C möglichVorteileHohe Sensitivität cDNA in <15 Minuten Primer inklusive gDNA Removal Temperaturstabilität AnwendungencDNA-SyntheseSchnelle und einfache cDNA-Synthese mit nur einem Kit. Der Scriptase RT-Kit bietet eine hohe Sensitivität und Spezifität. Zudem ist es sehr flexibel und liefert sowohl mit Oligo(dT) als auch Random Hexameren oder genspezifischen Primern hohe Ausbeuten.GenexpressionsanalyseGenexpressionslevels in Geweben oder unterschiedlichen Zelltypen lassen sich über die Detektion von spezifischer mRNA bestimmen. Dazu wird die Gesamt-RNA zuerst in cDNA umgeschrieben. In der nachfolgenden qPCR mit genspezifischen Primern bestimmt man das jeweilige Expressionslevel.cDNA Sequencing (Diagnostik)Im Rahmen der Diagnostik von RNA-Viren wird eine Reverse Transcription der Sequenzierung vorgeschaltet, um eine cDNA Library zu erstellen. Neben der Pathogendetektion selbst lassen sich damit auch Mutationsprofile von Pathogenen erstellen.RNA-seqAls Teil eines RNA-seq Workflows kann die mRNA-Anreicherung mittels Reverser Transkription in Verbindung mit Oligo(dT) Primern durchgeführt werden. Dadurch können sowohl mRNA Selektion und RT in einem Schritt durchgeführt werden, was insbesondere bei geringen RNA Mengen sinnvoll ist. Zu beachten ist, dass hierbei ein 3′-Bias bei der späteren Sequenzierung auftreten kann. Die Folge wäre eine erhöhte Anzahl an Reads für das 3′ Ende der RNAs.

The Genaxxon RNase Inhibitor is a recombinant (E.coli) murine protein which inhibits ribonucleases (RNases) A, B and C. It does not inhibit RNase 1, RNase H, RNase T1, S1 Nuclease. Native RNase-Inhibitor from murine placenta exerts its inhibitory effect by binding non-covalently to RNases in a 1:1 ratio with high affinity. There is no inhibition of polymerase activity when this RNase Inhibitor is used with AMV Reverse Transcriptase, M-MuLV Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase or Phage RNA Polymerase (SP6, T7, or T3).The enzyme is active over a broad pH range between 5 and 9, with a maximum activity at pH7 – pH8. The inhibition of RNases is a reversible process. Reagents as urea or thiol reagents will lead to the dissociation of the Inhibitor-RNase-complex, resulting in re-natured and functional RNase and irreversibly deactivated RNase inhibitor.Applications: RT-PCRcDNA synthesisIn vitro transcription/translationEnzymatic RNA labelling reactionsIn vitro virus detection. Improvement of RNA translation in homologous systems.Preparations of RNase-free antibodies. Any application where eukaryotic RNase contamination is a potential problem.  Advantages:  The recombinant murine RNase inhibitor does not contain the cysteine pair that was identified to cause the high sensitivity against oxidation resulting in the inactivation of the human RNase inhibitor (1). As a result, the murine RNase inhibitor has significantly improved oxidation resistance compared to the human and porcine RNase inhibitors. In addition, murine RNase inhibitor is much more stable at low low DTT concentrations (less than 1 mM), what makes it ideal for reactions where high DTT concentrations interfere with the reaction (e.g. real-time RT-PCR). Product does not contain glycerol => lyo-ready product (ready for preparations of freeze-dried products).Recommendations: Since the RNase inhibitor protein is sensitive to denaturing agents and conditions, whereas RNases are not, care must be taken to avoid high concentrations of urea or other denaturing agents and temperatures above 50-55°C. The recommended concentration of the RNase inhibitor is 1 unit/µL. During set-up of a reaction, RNase inhibitor should be added before other components are added (enzymes, plasmids from mini preps, etc.).References1. Kim, B.M. et al. Protein Science. 8, 430-434.

Random Hexamere sind kurze Oligodeoxyribonukleotide der zufälligen Sequenz [d(N)6]. Die Primer sind qualitätskontrolliert (MS), gereinigt (HPLC), lyophilisiert und zu einer garantierten Menge von 5OD (ca. 76,1nmol (136,4µg)) aliquotiert. Hexanukleotid-Primer bestehen aus einer Mischung von zufälligen 5'-Hydroxylhexanukleotiden oder Hexameren. Die Primer binden an zufällig komplementäre Bereiche auf einer Ziel-DNA oder -RNA und dienen dann als Primer für die DNA-Synthese mittels einer DNA Polymerase oder Reversen Transkriptase zur reversen Transkription. Die heterogene Natur der Random Primer stellt sicher, dass alle theoretisch möglichen Sequenzen im gelieferten Produkt enthalten sind. Dadurch sind diese Primer gut dazu geeignet, ein möglichst langes (vollständiges) Transkript der RNA zu erstellen, bzw. vor allem bei langen RNA-Templates auch die 5'-Enden zu transkripieren. Als Alternative können auch Oligo(dT)-Primer > für die reverse Transkription benutzt werden. Diese binden an den polyA-Schwanz von RNA, womit die Transkription auf jeden Fall immer am 3'-Ende der RNA beginnt. Die garantierte Liefermenge von 5OD, entsprechend ca. 76,1nmol, bzw. 136,4µg, können in 760µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. ca. 180µg/µL. Wenn man zwischen 50ng und 250ng der Hexamere pro 20µL RT-Reaktion einsetzt, reichen 760μL (100μM) für 460 bis 2280 reverse Transkriptase Reaktionen.

Oligo(dT)20 Primer sind für die Synthese von cDNA mithilfe einer reversen Transkriptase, z. B. der MMuLV (M3042) > geeignet. Der Primer hybridisiert an den poly(A)-Schwanz der mRNA. Er wird am 5´-Ende phosphoryliert, um das Klonieren der cDNA zu erleichtern. Oligo (dT) 20-Primer wurden entwickelt, um die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA in einer reversen Transkriptionsreaktion zu initiieren, wobei die Reverse Transkriptase die Reaktion vom Poly-A-Ende der mRNA startet. Oligo(dT)20 Primer können auch zur Herstellung markierter cDNA zum Screening von Mikroarrays verwendet werden. Die garantierte Liefermenge von 5OD entspricht ca. 27,2nmol, bzw. 163,7µg. Die Primer sind qualitätsgeprüft (MS), gereinigt (reversed phase HPLC), lyophilisiert und aliquotiert. Die 5 OD können in 271,5µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. 600ng/µL. 272µL (100µM / 600ng/µL) ergeben zwischen 325 und bis zu 645 reverse Transkriptionsreaktionen von 20µL (250ng bis 500ng Oligo (dT)20 pro 1µg RNA in 20µL Reaktionsvolumen). Eine Mischung (1:1 Ratio) von random Hexamerprimern (M3038) > und Oligo(dT)-Primer kann die Sensitivität der cDNA-Synthese erhöhen, indem speziell die Synthese von längeren cDNA-Stücken verstärkt wird. Applikationen: cDNA Synthese aus Gesamt-RNA mittels reverser Transkription. optimal zur Erstellung von cDNA-Banken aus eukaryotischer mRNA geeignet. Full length cDNA Klonierung 3’ rapid amplification of cDNA ends (3’ RACE) Herstellung markierter cDNA zum screening von Microarrays.

Der Genaxx1Step RT-qPCR SARS-CoV-2 CDC Probe Assay Kit ist ein Real-Time RT-PCR-basiertes Nachweissystem für die Targets N1 und N2 des Nucleocapsids vom SARS-CoV-2-Corona-Virus (2019-nCoV) sowie für das Kontroll-Target RNASeP. Der Kit wurde optimiert für den qualitativen In-vitro-Nachweis gemäß den US-amerikanischen CDC (Centers for Disease Control and Prevention). Der Genaxx1Step RT-qPCR SARS-CoV-2 CDC Probe Assay Kit besteht aus dem innovativen HotScriptase Covid-19 Mastermix mit thermostabiler Polymerase. Primer und Sonden gemäß CDC-autorisierten Sequenzen für die N1-, N2-Assays sowie für RNASeP können zum Beispiel von der Firma IDT (Integrated DNA Technologies) oder Eurofins erworben werden. Der Test wird nicht durch die hauptsächlich auftretenden Virusvarianten beeinflusst (diese Varianten werden detektiert): BA 2.75, XBB 1.5 . Genaxx1Step Covid-19 Mastermix ermöglicht die Amplifikation von RNA- oder DNA-Zielsequenzen mit schnellen und einfachen PCR-Protokollen, sogar einschließlich 0-Stufen-Amplifikation. Zusätzlich verbessert die hellblaue Farbe die Sichtbarkeit der Mischung während der Pipettierschritte, insbesondere wenn weiße oder transparente PCR-Platten oder PCR-Tubes verwendet werden. Weitere realtime PCR Mastermixe finden Sie hier > Schneller: Kein zeitaufwendiger isothermaler Zwischenschritt mehr notwendig Einfacher: Reverse Transkriptase und DNA-Polymerase in einem Enzym, die reverse Transkription erfolgt zeitgleich mit der DNA-Amplifikation während des PCR-Elongationsschritts, nur noch das PCR-Protokoll wird verwendet Sicherer: Geringeres Kontaminationsrisiko durch weniger Pipettierschritte Extreme Thermostabilität: Sekundärstrukturen sind vernachlässigbar Günstiger: Gleichzeitige reverse Transkription und Amplifikation spart Kosten und Zeit durch Kombination reverse Transkriptase / Polymerase Die Genaxxon bioscience HotScriptase kann als DNA-Polymerase mit 5 units/µL oder als praktischer 2-fach RT Mastermix bezogen werden. Der 2-fach RT Mastermix enthält alle notwendigen Bestandteile für eine RT-PCR außer Primern, Probes oder RNA/DNA. Zusätzlich bietet Genaxxon den HotScriptase RT Cell Mastermix > an, ein 2-fach Mastermix, der speziell für die direkte RT-PCR aus ganzen Zellen optimiert wurde. Mit diesem Mastermix können Sie die zeitaufwendige und teure RNA-Reinigung bzw. einen Zelllyseschritt vergessen und direkt aus den Zellen amplifizieren. Die Genaxxon HotScriptase RT Polymerase > für die reverse Transkription ermöglicht eine "One-Step” RT-PCR direkt aus der Zellsuspension ohne isothermalen reversen Transkriptase-Zwischenschritt. Einfach die Zellen oder Zellsuspension (100 bis <10.000 Zellen) direkt zum Reaktionsgemisch geben, mischen, im Thermocycler plazieren und den PCR-Lauf starten. Da der teure und zeitaufwendige Zelllyseschritt, die isothermale Transkription sowie die RNA-Aufreinigung umgangen wird, ist der Genaxxon HotScriptase Cell RT Mastermix > ideal für High-throughput Anwendungen wie RNAi knockdown, Genexpressionsstudien oder realtime PCR (qPCR) -Experimente geeignet. Der vorgefertigte 2-fach Mastermix gewährleistet reproduzierbare RT-PCR-Ergebnisse bei gleichzeitig stark reduzierten Set-up Zeiten und reduziertem Risiko von Pipettierfehlern. Die empfohlene Amplicongröße beträgt 60-400 bp! Dieser Mastermix enthält weder den grünen Fluoreszenzfarbstoff noch ROX als passiven Referenzfarbstoff! > unsere realtime PCR Mastermixe finden Sie hier