Vorteile im Überblick
- Keine DNA-Extraktion erforderlich – Direkt PCR aus Proben.
- Real-time Genotypisierung – Schneller und effizienter Workflow.
- Hot-Start-Formulierung – Reaktionsansatz bei Raumtemperatur.
- Plattformunabhängig – Kompatibel mit allen PCR-Cyclern.
- Zuverlässige FAM-Fluoreszenz – Präzise Genotyp-Bestimmung.
- Umweltfreundlicher Versand – Stabil bei Raumtemperatur.
- Kostenloser Versand
- Versand innerhalb von 24h
- 30 Tage Geld-Zurück-Garantie
- Bequemer Kauf auf Rechnung
Produktinformationen "Direct HLA-B27 Genotyping PCR Kit"
Schnelle, Real-time Genotypisierung von HLA-B27 ohne DNA-Isolation
Anwendungsbereiche
- Screening auf HLA-B27 bei Verdacht auf ankylosierende Spondylitis
- Molekulargenetische Unterstützung der Diagnostik bei Spondyloarthritiden
- Anwendungen im klinischen Labor
- Forschungsanwendungen im Bereich Immunogenetik
Wichtige Merkmale & Vorteile
- Keine DNA-Extraktion erforderlich – Direkte Verwendung von EDTA-Vollblut möglich.
- Genotypisierung in Real-time – Schneller und effizienter Workflow ohne zeitaufwändige DNA-Isolation.
- Hot-Start-Formulierung – Ermöglicht eine einfache Reaktionsansetzung bei Raumtemperatur.
- Plattformunabhängig – Kompatibel mit allen modernen real-time PCR-Cyclern.
- Hydrolysis-Probe basierte Detektion (TaqMan-Prinzip). Duplex Real-Time PCR (Target + interne Kontrolle).
- Zuverlässige Fluoreszenz-basierte Detektion – Genotyp-Bestimmung über die FAM- und ROX-Kanal.
- Hohe Spezifität durch allele-spezifisches Primer/Probe Design. - Zwei HLA-B27 Targets (Exon 2 und Exon 3) für erhöhte Robustheit.
- Umweltfreundlicher Versand – Stabil bei Raumtemperatur, wodurch auf Kühlketten-Transport verzichtet werden kann.
Prinzip des Assays
Das Kit basiert auf einer allele-spezifischen Real-Time PCR mit Hydrolysis-Probe Technologie. Der Nachweis erfolgt im Duplex-Format mit simultaner Detektion des Zielgens und einer internen Kontrolle. Die HLA-B27 Detektion erfolgt über zwei unabhängige, HLA-B27-spezifische Target-Regionen innerhalb des HLA-B Gens (Exon 2 und Exon 3). Durch die parallele Abfrage beider Target-Regionen wird die Robustheit des Screenings erhöht und das Risiko falsch-negativer Ergebnisse durch seltene Sequenzvarianten reduziert. Das HLA-B27 Signal wird im FAM-Kanal detektiert. Die interne Kontrollsequenz wird im ROX-Kanal detektiert und dient zur sicheren Identifikation von PCR-Inhibition oder unzureichender DNA-Freisetzung. Direct PCR aus Vollblut (ohne DNA-Isolation) Das Kit ist für die direkte Verwendung von EDTA-Vollblut optimiert und ermöglicht einen vereinfachten Workflow ohne zwingend erforderliche DNA-Extraktion. Zur Verbesserung der Robustheit wird eine Verdünnung der Blutprobe empfohlen. Optional ist ein kurzer Hitzevorbehandlungsschritt empfohlen (z. B. 95°C für 10 Minuten), um Leukozyten noch effizienter zu lysieren bzw. die DNA freizusetzen. Alternativ kann das Kit auch mit gereinigter genomischer DNA eingesetzt werden.
Workflow (Übersicht)
-
1. EDTA-Vollblut verdünnen
2. Hitzevorbehandlung (empfohlen)
3. Ansatz der qPCR-Reaktion
4. Real-Time PCR Lauf
5. Qualitative Auswertung anhand der Amplifikationskurven
Ergebnisauswertung
Positiv: Amplifikation im FAM-Kanal (HLA-B27) bei gleichzeitig positivem Signal der internen Kontrolle im ROX-Kanal.
Negativ: Kein FAM-Signal, aber positive Amplifikation der internen Kontrolle im ROX-Kanal.
Ungültig: Kein Signal der internen Kontrolle (Hinweis auf PCR-Inhibition oder fehlerhafte Probenvorbereitung).
Cycler-Kompatibilität
Erforderlich ist ein Real-Time PCR Gerät mit mindestens zwei Detektionskanälen:
FAM und ROX
Der Assay ist kompatibel mit gängigen qPCR Plattformen mit entsprechender Kanalbelegung.
Hinweis
Das Kit ist für Screening-Anwendungen ausgelegt. In seltenen Fällen können Sequenzvariationen einzelner HLA-B27 Subtypen die Amplifikation beeinflussen. Bei diskrepanten Ergebnissen oder speziellen Populationen kann eine weiterführende Subtypisierung empfohlen sein.
Kit-Inhalt
- Genotyping PCR Mastermix
- HLA-B27 Primers & Probes Mix
- Protokoll / Anleitung