Ni-NTA Agarose für His-tagged Proteine

1,3-Diaza-2,4-cyclopentadien, Glyoxalin

Gewässerte Gelfiltrationssäulchen für die Proteinreinigung und -entsalzung. Geeignet für Produktvolumina von 150µL bis 300µL. CentriPure 2 Gelfiltrationssäulchen sind extra für die schnelle und effiziente Abtrennung kleiner Moleküle (Salzen, Farbstoffen, Ammonium, Haptenen, Biotin, etc.) von Antikörpern, Enzymen oder anderen Proteinen entwickelt worden. Die Gelmatrix von CentriPure besteht aus Zetadex-25, einem kugelförmigen Kompositmaterial das von emp Biotech entwickelt wurde. Das Material zeichnet sich durch hohe Selektivität, hohe Auflösung und chemische Stabilität aus. Die Trennung basiert auf der Trennung duch Größe der Moleküle. Kleinere Moleküle werden wesentlich später eluiert als größere Moleküle. Puffer und pH haben auf die Trennung höchstens einen minimalen Einfluß. Der Größenausschluß bei Zetadex-25 beträgt 5 kDa für Proteine. Proteine mit einem Molgewicht von größer 5 kDa aufgetragen in einem Auftragsvolumen von 150µL bis 300µL können gereinigt werden indem man das Elutionsvolumen von 200µL bis 350µL auffängt.

Diese Tabletten sind für die Aufreinigung von Histidin getaggten oder auch nicht Histidin getaggten rekombinanter oder nativer Proteine gedacht, die mittels IMAC gereinigt werden sollen (der Phosphatpuffer kann auch für andere Affinitätschromatographische Verfahren benutzt werden). IMAC (Immobilized metal ion affinity chromatography) ist ein gebräuchliches Trennverfahren für die Reinigung von Proteinen und Peptiden die eine Affinität zu Metallionen aufweisen, wie z.B. Histidin getaggte Proteine aber auch einige ungetaggte, native Proteine. Genaxxon's IMAC Phosphat- und Elutionspuffertabletten sind eigens nur für diesen Zweck entwickelt worden. IMAC-Puffertabletten werden in einer Flasche (50 Tabletten) oder im Blisterpack (10 Tabletten) geliefert. Eine Tablette des Phosphatpuffers in dionisiertem Wasser gelöst ergibt einen 300mM Natriumchlorid und 50mM Natriumphosphatpuffer mit pH8,0 bei 22°C. Eine Tablette des Elutionspuffers ergibt einen 300mM Natriumchlorid, 300mM Imidazol und 50mM Natriumphosphatpuffer mit pH8,0 bei 22°C. Eigenschaften: Einfach lösen und starten, Genau vorgewogene Tabletten, Einfach Elutionspuffer mit Phosphatpuffer im gewünschten Imidazolkonzentrationsverhältnis mischen, Ultrareines Imidazol mit niedriger UV280nm Absorbtion.

CentriPure P100 Säulchen sind Gelfiltrationssäulchen für die schnelle und effiziente Proteinreinigung und -entsalzung. Geeignet für Auftragsvolumina bis zu 10mL. CentriPure P100 Gelfiltrationssäulchen sind extra für die schnelle und effiziente Abtrennung kleiner Moleküle (Salzen, Farbstoffen, Ammonium, Haptenen, Biotin, etc.) von Antikörpern, Enzymen oder anderen Proteinen entwickelt worden. Die Gelmatrix von CentriPure besteht aus Zetadex-25, einem kugelförmigen Kompositmaterial. Das Material zeichnet sich durch hohe Selektivität, hohe Auflösung und chemische Stabilität aus. Die Trennung basiert auf der Größentrennung der Moleküle. Kleinere Moleküle werden wesentlich später eluiert als größere Moleküle. Puffer und pH haben auf die Trennung höchstens einen minimalen Einfluß. Der Größenausschluß bei Zetadex-25 beträgt 5 kD für Proteine. Proteine mit einem Molgewicht von größer 5 kD können in einem Auftragsvolumen von bis zu 10mL können gereinigt werden indem man die ersten 12mL bis 15mL des Eluats auffängt.

Nickel-beladene Agarosen sind die am häufigsten eingesetzten Produkte zur effizienten Aufreinigung von 6-fach Histidin-getaggten rekombinanten Fusionsproteinen. Die Ni2+-Ionen weisen eine hohe Affinität zu 6-fach Histidin-getagten Fusionsproteinen auf und führen zu sehr hohen Rohausbeuten bei der Aufreinigung dieser Fusionsproteine aus den Lysaten. Wird jedoch aus Lysaten aufgereinigt, die auch Fremdproteine mit wiederkehrenden Histidin- Anteilen in den Ketten enthalten, so nimmt die Selektivität gegenüber den 6-fach Histidin-getagten Fusionsproteinen ab, da zunehmend auch nicht-getagte Histidin-enthaltende Proteine an die Ni-IDA-Agarose binden. In diesem Fall empfiehlt sich die Verwendung von Genaxxon Co-IDA-Agarose (Kat.-Nr. S5370), die eine weit höhere Selektivität gegenüber 6-fach Histidin-getagten Fusionsproteinen aufweist. Genaxxon Ni-IDA-Agarose zeichnet sich durch hohe chemische Stabilität sowie durch die einfache Möglichkeit aus, die Aufreinigung direkt aus den Rohlysaten durchzuführen. Die Genaxxon Ni-IDA-Agarose kann darüber hinaus mehrfach mit Nickelsulfat-Lösung regeneriert und wieder eingesetzt werden. Ni-IDA-Agarose - Der effiziente, aber günstige Weg zur Aufreinigung von 6x Histidin-getagten Fusionsproteinen. Highlights: - ideal geeignet für Grafity-Flow- und Batch-Verfahren - Kein teures Aufreinigungssystem notwendig - konsistente Leistungsfähigkeit - für native wie auch denaturierende Bedingungen - Extrem kostengünstig (Volumenangaben entsprechen den Agarosemengen)! Die Genaxxon Ni-IDA Agarose besteht aus quervernetzter Agarose, an die mit Ni2+-Ionen beladene Iminodiessigsäure (IDA) kovalent gebunden ist. Bindungskapazität bis zu 50mg 6xHistidin-getagtes Fusionsprotein pro mL Agarose. Die Ni-IDA Agarose wird als eine gepufferte 50% Suspension mit 20% Ethanol geliefert.