Total RNA Purification Kit - Tissue

Random Hexamere sind kurze Oligodeoxyribonukleotide der zufälligen Sequenz [d(N)6]. Die Primer sind qualitätskontrolliert (MS), gereinigt (HPLC), lyophilisiert und zu einer garantierten Menge von 5OD (ca. 76,1nmol (136,4µg)) aliquotiert. Hexanukleotid-Primer bestehen aus einer Mischung von zufälligen 5'-Hydroxylhexanukleotiden oder Hexameren. Die Primer binden an zufällig komplementäre Bereiche auf einer Ziel-DNA oder -RNA und dienen dann als Primer für die DNA-Synthese mittels einer DNA Polymerase oder Reversen Transkriptase zur reversen Transkription. Die heterogene Natur der Random Primer stellt sicher, dass alle theoretisch möglichen Sequenzen im gelieferten Produkt enthalten sind. Dadurch sind diese Primer gut dazu geeignet, ein möglichst langes (vollständiges) Transkript der RNA zu erstellen, bzw. vor allem bei langen RNA-Templates auch die 5'-Enden zu transkripieren. Als Alternative können auch Oligo(dT)-Primer > für die reverse Transkription benutzt werden. Diese binden an den polyA-Schwanz von RNA, womit die Transkription auf jeden Fall immer am 3'-Ende der RNA beginnt. Die garantierte Liefermenge von 5OD, entsprechend ca. 76,1nmol, bzw. 136,4µg, können in 760µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. ca. 180µg/µL. Wenn man zwischen 50ng und 250ng der Hexamere pro 20µL RT-Reaktion einsetzt, reichen 760μL (100μM) für 460 bis 2280 reverse Transkriptase Reaktionen.

Die Genaxxon bioscience M-MuLV Reverse Transkriptase, codiert durch den Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV RT) und in E.coli exprimiert ist eine RNA-abhängige DNA Polymerase ohne RNase H Aktivität. Das Enzym synthetisiert den cDNA Erststrang von einem RNA Template an das ein entsprechender Primer gebunden hat. M-MuLV RT wird aber auch Primer verlängern die an Einzelstrand-DNA gebunden haben! Es ist daher darauf zu achten, dass bei der cDNA-Synthese keine DNA mehr vorhanden ist. Das Enzym kann für die Synthese von cDNA von 100 bp bis zu 10 kb Länge benutzt werden. Die Synthese von Zweitstrang-cDNA kann mit einigen RNA Termplates erzielt werden, ohne dass eine weitere Polymerase hinzu gegeben werden muss. Von Genaxxon gibt es das Enzym HotScriptase (M3056) > oder den HotScriptase master mix (M3062 >; M3064 >) mit dem direkt, ohne den zeitaufwendigen isothermalen Transkriptionsschrit, doppelsträngige DNA synthetisiert wird: Zeitersparnis: bis zu 50%. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Keramische Beads zur Lyse von Gewebe aus einer großen Bandbreite an Probenmaterial, z.B. für die RNA-Extraktion. Der Kit enthält 100 Preps mit 1,4mm Keramikperlen (Zirkonoxid) und werden vorproportioniert zu 1g in 2mL Standardschraubdeckelgefäßen geliefert. Die Beads sind für die Homogenisierung von "weichem" Gewebe aus Lunge, Leber, Gehirn, Niere, Milz, Haut, Zellen aus der Zellkultur, sowie für Pflanzengewebe wie z.B. Blätter oder ganze Insekten geeignet. Die Menge an Beads reicht für reicht bis zu 200mg Gewebe (frisch, gefroren, getrocknet, etc.), bis zu 200µL suspendierten Zellen (in Wasser oder isotonischer Salzlösung oder für bis zu 100mg Nassgewicht von Zellen aus der Zellkultur (Bsp.: bis zu 10E7 menschlichen Zellen). Die Beads können für eine Vielzahl von Proben und Anwendungen verwendet werden, z. B. für die Veterinärdiagnostik (BSE-Screening), Pharmakologie und Toxikologie (Drogendetektion), Kriminologie und forensische Medizin, Lebensmittelindustrie (GVO-Erkennung), Mikrobiologie in der Umwelt (Mikroorganismenlyse). sowie die Isolierung von Nukleinsäuren und Proteinen. Sie sind chemisch inert und binden keine Nukleinsäuren. Die Beads sind mit denen von MP Biomedical Nr. 116913100 (äquivalent zu Lysing Matrix D) vergleichbar und mit den meisten im Handel erhältlichen Homogenisatoren, wie FastPrep® (MP Biomedicals), MagNA Lyser Instrument (Roche), kompatibel. Weitere RNA-Reinigungskits und Zubehör von Genaxxon: DNA and RNA Purification Kit > sowie Total RNA Purification Mini Spin Kit > ohne keramische Beads. Unsere RNA- > und DNA-Reinigungssäulchen > zur Isolation von Gesamt-RNA oder DNA aus enzymatischen Reaktionen oder keramische Beads > zur schnellen Zerkleinerung der Zellen können Sie separat nachbestellen. Mit unereren HotScriptase RT Polymerase > Kits können Sie RNA schnell und einfach mittels PCR direkt in DNA umschreiben und amplifizieren. Sie benötigen hierzu keine reverse Transkriptase und auch keinen reversen Transkriptionsschritt. Unsere HotScriptase RT gibt es auch als Mastermix >, mit dem Sie direkt aus Zellen ohne vorherige Isolation die RNA zu DNA umschreiben und amplifizieren können!

Oligo(dT)20 Primer sind für die Synthese von cDNA mithilfe einer reversen Transkriptase, z. B. der MMuLV (M3042) > geeignet. Der Primer hybridisiert an den poly(A)-Schwanz der mRNA. Er wird am 5´-Ende phosphoryliert, um das Klonieren der cDNA zu erleichtern. Oligo (dT) 20-Primer wurden entwickelt, um die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA in einer reversen Transkriptionsreaktion zu initiieren, wobei die Reverse Transkriptase die Reaktion vom Poly-A-Ende der mRNA startet. Oligo(dT)20 Primer können auch zur Herstellung markierter cDNA zum Screening von Mikroarrays verwendet werden. Die garantierte Liefermenge von 5OD entspricht ca. 27,2nmol, bzw. 163,7µg. Die Primer sind qualitätsgeprüft (MS), gereinigt (reversed phase HPLC), lyophilisiert und aliquotiert. Die 5 OD können in 271,5µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. 600ng/µL. 272µL (100µM / 600ng/µL) ergeben zwischen 325 und bis zu 645 reverse Transkriptionsreaktionen von 20µL (250ng bis 500ng Oligo (dT)20 pro 1µg RNA in 20µL Reaktionsvolumen). Eine Mischung (1:1 Ratio) von random Hexamerprimern (M3038) > und Oligo(dT)-Primer kann die Sensitivität der cDNA-Synthese erhöhen, indem speziell die Synthese von längeren cDNA-Stücken verstärkt wird. Applikationen: cDNA Synthese aus Gesamt-RNA mittels reverser Transkription. optimal zur Erstellung von cDNA-Banken aus eukaryotischer mRNA geeignet. Full length cDNA Klonierung 3’ rapid amplification of cDNA ends (3’ RACE) Herstellung markierter cDNA zum screening von Microarrays.

Lysozym hydrolysiert bevorzugt die β-1,4-glykosidische Bindung zwischen N-Acetylmuraminsäure und N-Acetyl-D-glucosamin, Bestandteile der Proteoglycan-Zellwand bestimmter Mikroorganismen, und baut die Heteroglycankette zu Disacchariden ab. In der Molekularbiologie wird üblicherweise das Enzym aus Hühnereiweiß zur Lyse von E. coli zwecks Plasmid-Isolierung eingesetzt. Die Arbeitskonzentration liegt hier bei 200μg/300μL. Beim 'Maxi-Prep' kann, zur Erhöhung der Plasmid-Ausbeute, ca. 5 - 10% Lysozym zugegeben werden. Eine weitere Anwendung ist die Lyse von Bakterien zur Präparation bakterieller RNA. Die Arbeitskonzentration liegt hier bei 40μg/mL (Stammlösung 50mg/mL). Die Lyse kann verhindert werden, wenn die Reaktion in einem isotonischen Sucrosemedium durchgeführt wird. Stabile Protoplasten werden unter diesen Konditionen gebildet. Stabilität:Lyophilisiertes Lysozym ist bei +2°C bis +8°C ohne Funktionsverlust für mehrere Jahre stabil. Als Lösung bei einem pH von 4 bis 5 und bei +2°C bis +8°C ist das Enzym nur noch wenige Wochen stabil und bei Raumtemperatur nur noch wenige Tage. Das pH-Optimum liegt bei 9.2, der isoelektrische Punkt liegt bei 11.0. Lysozym wird durch Detergenzien wie SDS, Alkohole, Fettsäuren, Imidazol und Indolderivaten inhibiert. Stammlösungen in 10mM Tris/HCl (pH8,0) werden üblicherweise mit einer Konzentration von 10, 25 oder 50mg/mL angesetzt.