RT-PCR & PCR Inhibitor Tolerance Screening Kit

Das RT-PCR & PCR Inhibitor Tolerance Screening Kit enthält fünf gebrauchsfertige Additive zur systematischen Untersuchung und Optimierung von PCR- und RT-PCR-Assays. Die Additive können je nach Assay die Toleranz gegenüber PCR-Inhibitoren verbessern und ermöglichen es, geeignete Reaktionsbedingungen für das jeweilige Enzymsystem und die jeweilige Probenmatrix zu identifizieren.

Systematisches Screening mit fünf Additiven

Die fünf Additive werden separat bereitgestellt und einzeln getestet. Sie können mit bestehenden Polymerase- oder Reverse-Transcriptase-Systemen sowie mit vorhandenen Puffern und Primer-Probe-Kombinationen eingesetzt werden. Jedes Additiv wird separat untersucht und mit einer Kontrollreaktion ohne Additiv verglichen.

Verbesserung der Inhibitorentoleranz

Inhibitoren können die Performance von PCR- und RT-PCR-Assays beeinträchtigen. Die fünf Additive des Screening Kits ermöglichen es, ihren Einfluss auf den jeweiligen Assay einzeln zu untersuchen. Abhängig von Assay, Enzymsystem und Probenmatrix können einzelne Additive die Inhibitorentoleranz verbessern.

Da die Wirkung assayabhängig ist, werden die Additive separat getestet und mit einer Kontrollreaktion ohne Additiv verglichen. So lässt sich experimentell ermitteln, welches Additiv für den jeweiligen Assay geeignet ist. Anschließend kann die Additivkonzentration für die spezifische Anwendung weiter optimiert werden.

Anwendung und Auswertung

Für das initiale Screening werden 2 µL des ausgewählten Additivs zu einer 20-µL-Reaktion gegeben und ein entsprechendes Volumen Wasser ersetzt. Jedes Additiv wird einzeln getestet; zusätzlich wird eine Kontrolle ohne Additiv mitgeführt. Alle weiteren Reaktionskomponenten und Cycling-Bedingungen bleiben unverändert.

Die Ergebnisse können anhand assayspezifischer Parameter wie Cq-Wert, Produktausbeute, Spezifität und Reproduzierbarkeit bewertet werden. Je nach Anwendung können eine weitere Optimierung der Additivkonzentration und eine Validierung in der vorgesehenen Probenmatrix erforderlich sein.

Assayabhängige Optimierung

Die Wirkung der einzelnen Additive hängt vom jeweiligen Assay, Enzymsystem und der Probenmatrix ab. Das empfohlene Additivvolumen dient daher dem initialen Screening. Die optimale Konzentration muss für die jeweilige Anwendung individuell bestimmt werden.