4,5-Diaminofluoresceintriazol - DAF-2T

DAF-2 zeigt eine höhere Photostabilität als klassische Fluoresceinderivate. Anwendungen: DAF-2 ist ein hochempfindliches Nachweisreagenz von NO und der Bestimmung der NO-Synthaseaktivität. DAF-2 bleibt im wesentlichen nichtfluoreszierend solange es nicht mit dem Nitrosiumkation reagiert (NO+ entsteht bei der spontanen Oxidation aus NO) und dabei einen stark fluoreszierenden Heterozyklus bildet. Der Heterozyklus wiederum bleibt im Zellzytoplasma gefangen. Dieser empfindliche und spezifische Fluoreszentfarbstoff wurde schon dazu benutzt um individuelle NO-produzierende Neuronen in Hirnschnitten, bzw. um die NO-Produktion in Mitochondrien und in lebenden Pflanzenzellen nachzuweisen. In der Zelle reagiert das Produkt schnell mit NO in Gegenwart von O2 zur stark fluoreszierenden Verbindung Triazolfluorescein (DAF-2T (Cat-Nr. S5442 >)). Referenzen: (1) M. Kirsch et al.; J. Pineal Res. 40(1), 10 (2006), (2) V.M. Dirsch et al.; Biol. Proc. Online 5(1), 136 (2003), (3) N. Nagata et al.; J. Biochem. 125(4), 658 (1999), (4) H. Kojima et al.; Chem. Pharm. Bull. 46, 373 (1998), (5) H. Kojima et al.; Anal. Chem. 70, 2446 (1998)

3-Amino-4-(N-methylamino)-2',7'-difluorofluoresceindiacetat. DAF-FM diacetat ist ein wichtiges Reagenz für die Quanitifizierung von niedrigen Konzentrationen an Stickstoffoxid in Lösung. Die Verbindung ist nicht fluoreszierend bevor sie mit NO reagiert hat und ein fluoreszierendes Benzotriazol gebildet hat. Das Excitation/Emissionsmaxima liegt bei 495nm. DAF-FM Spezifikationen:• Ex/Em von DAF-FM: ~495/515 nm.• Das lyophilisierte Produkt sollte in DMSO gelöst werden und kann dann in wässrigen Puffern verdünnt werden um die jeweilige Arbeitslösung zu erhalten. • DAF-FM diacetat ist zellpermeabel und diffundiert passiv durch die Zellmembran. Im inneren der Zelle wird DAF-FM DA in eine zellimpermeable Form umgewandelt. • Puffer die Rinderserumalbumin (BSA) und/oder Phenolrot enthalten können die Fluoresezenz beeinflussen und sind daher eher nicht einzusetzen.• Die Fluoreszenzquantenausbeute von DAF-FM beträgt ca. 0,005, verstärkt sich aber um das 160-fache auf ca. 0,81, nach der Reaktion mit NO. Vorteile von DAF-FM gegenüber DAF-2Das Spektrum von NO-Adukten von DAF-FM sind unabhängig vom pH-Wert (oberhalb pH5,5). Zusätzlich sind die NO-Adukte von DAF-FM signifikant photostabiler als die von DAF-2 >, was bedeutet, dass zusätzliche Zeit für die Dektektion gegeben ist. Schließlich ist DAF-FM sehr viel sensitiver gegenüber NO als es DAF-2 ist (das NO Detektionslimit von DAF-FM liegt bei ca. 3nM gegenüber ca. 5nM für DAF-2).

4,5-Diaminofluoresceindiacetat (DAF-2 DA) ist ein hochsensitives zellpermeables Nachweisreagenz für die Echtzeitmessung von NO in lebenden Zellen. Anwendungen: DAF-2DA ist wahrscheinlich der erfolgreichste Indikator für NO. Wie andere Fluoresceindiazetate ist DAF-2 Diazetat membrangängig und wird durch intrazelluläre Esterasen zu 4,5-Diaminofluorescein (DAF-2) deacetyliert. DAF-2 DA kann für die fluorometrische Detektion und die Fluoreszenzmikroskopie von NO benutzt werden um Echtzeitänderungen im NO-Gehalt in vivo zu messen. Referenzen: (1) V.M. Dirsch et al.; Biol. Proc. Online 5(1), 136 (2003), (2) N. Nagata et al.; J. Biochem. 125(4), 658 (1999), (3) H. Kojima et al.; Anal. Chem. 70(13), 2446 (1998), (4) H. Kojima et al.; Chem. Pharm. Bull. 46, 373 (1998), (5) H. Kojima et al.; Neuroreport 9, 3345 (1998).

3-Amino-4-(N-methylamino)-2',7'-difluorofluoresceindiacetat. DAF-FM diacetat ist ein wichtiges Reagenz für die Quanitifizierung von niedrigen Konzentrationen an Stickstoffoxid in Lösung. Die Verbindung ist nicht fluoreszierend bevor sie mit NO reagiert hat und ein fluoreszierendes Benzotriazol gebildet hat. Das Excitation/Emissionsmaxima liegt bei 495nm. DAF-FM Spezifikationen:• Ex/Em von DAF-FM: ~495/515 nm.• Das lyophilisierte Produkt sollte in DMSO gelöst werden und kann dann in wässrigen Puffern verdünnt werden um die jeweilige Arbeitslösung zu erhalten. • DAF-FM diacetat ist zellpermeabel und diffundiert passiv durch die Zellmembran. Im inneren der Zelle wird DAF-FM DA in eine zellimpermeable Form umgewandelt. • Puffer die Rinderserumalbumin (BSA) und/oder Phenolrot enthalten können die Fluoresezenz beeinflussen und sind daher eher nicht einzusetzen.• Die Fluoreszenzquantenausbeute von DAF-FM beträgt ca. 0,005, verstärkt sich aber um das 160-fache auf ca. 0,81, nach der Reaktion mit NO. Vorteile von DAF-FM gegenüber DAF-2Das Spektrum von NO-Adukten von DAF-FM sind unabhängig vom pH-Wert (oberhalb pH5,5). Zusätzlich sind die NO-Adukte von DAF-FM signifikant photostabiler als die von DAF-2 >, was bedeutet, dass zusätzliche Zeit für die Dektektion gegeben ist. Schließlich ist DAF-FM sehr viel sensitiver gegenüber NO als es DAF-2 ist (das NO Detektionslimit von DAF-FM liegt bei ca. 3nM gegenüber ca. 5nM für DAF-2).