Vorteile im Überblick
- Activity: >3000 units/mg
- MW: appr. 31 kDa
- Appearance: salt-free, freeze-dried powder
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Produktinformationen "DNase I (EC 3.1.21.1)"
DNase I ist eine Endonuklease aus Rinderpankreas, die Doppel- und Einzelstrang-DNA in Oligo- und Mononukleotide hydrolisiert.
Beschreibung
DNAse I wird unter anderem dazu verwendet unerwünschte Verklumpung bei der Gewebedisaggregation zu vermeiden, die eine Dispersion einzelner Zellen erschwert. Da die Disaggregation von Gewebe und die nachfolgende Isolierung einzelner Zellen immer mit der Ruptur und Lyse einiger Zellen einhergeht, wird DNA aus diesen Zellen in das umgebende Medium abgegeben. Die freigesetzte DNA im Medium wird für die unerwünschte Zellverklumpung bei Gewebedissoziationsverfahren verantwortlich gemacht. Dieser Verklumpungseffekt kann durch Zugabe von Desoxyribonuklease (DNase) zum Dissoziationsmedium vermieden werden und wurde für eine Vielzahl von verschiedenen Zell- und Gewebetypen beschrieben.
DNase kann auch eingesetzt werden, um, vor wichtigen Experimenten (wie RT-PCR), DNA aus RNA-Präparationen zu entfernen. Da keine Reinigungsmethode für RNA zu 100% die DNA entfernt, ist es angeraten, vor jeder RT-PCR, die DNA mittels DNAse I zu entfernen. Ein einfacher 15-minütiger Verdau bei Raumtemperatur beseitigt zuverlässig alle kontaminierende DNA. DNase I wird inaktiviert, indem man die Stopplösung zugibt und erhitzt. Da Hitze auch die RNA denaturiert, kann der Ansatz dann sofort für die reverse Transkription benutzt werden.
Diese DNAse I aus Rinderpankreas ist nicht RNase frei und muss vor Einsatz für die Isolation von RNA entsprechend chemisch behandelt werden.
Specifications:
Activity: >3000 units/mg
Appearance: salt-free, freeze-dried powder, chromatographically prepared
MW: appr. 31 kDa
Applikation:
removes DNA for RNA purification procedures. removes DNA in single cell isolation proceduresQuelle:
bovine pancreasKlassifizierungen:
Dokumente:
ZertifikateProduktbeschreibung
The normal DNAse reaction buffer is:
10X buffer:
100mM Tris, pH7.5-8.0
25mM MgCl2
5mM CaCl2
Optional: 50-100mM NaCl
as 1X buffer:
10mM Tris, pH7
2.5mM MgCl2
0.5mM CaCl2
Optional: 5-10mM NaCl
A possible alternative is the following 10X buffer:
200mM Tris, pH8.4
20mM MgCl2
500mM KCl
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Inactivation of DNAse I
You can deactivate DNAse I by EDTA. The amount of EDTA depends on the amount/concentration of Mg2+ and or Ca2+ ions in the solution. As a rule of thumb you should use Mg2+/Ca2+:EDTA in a 1:1 molar ratio. E.g. if you use the buffer composition above (2.5mM MgCl2 plus 0.5mM CaCl2) you should use 3mM EDTA to inhibit the DNAse activity.
You can also use an even higher amount of EDTA (about 10% higher), especially if there are other divalent cations in the solution, but you have to be careful if you want to proceed with a reverse transcription after the DNAse digest. As EDTA inhibits also the reverse transcriptase it is not recommended to add to much EDTA for the inhibition of DNAse.
=> For this the preferred method to inhibit DNAse is still the combination of heat and EDTA. In this case you can use not more EDTA than in a 1:1 ratio.