Vorteile im Überblick
- Sehr hohe Reinheit
- Hohe Aktivität
- Aktiv unter denaturierenden Bedingungen
- Erhältlich als Pulver oder Lösung mit verschiedenen Aktivitätsbereichen
- Verschiedene Anwendungsmöglichkeiten, z.B. Vorbereitung von chromosomaler DNA für PFGE, Abbau von Nukleasen, Isolation genomischer DNA
"3 für 2“ AngebotJuli und AugustKauf 3 - Zahl 2
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Produktinformationen "Proteinase K Pulver - PCR tauglich"
Überblick
Produkt-Details
- ready-to-use
- Konzentration: 20 mg/mL
- Aktiv über einen weiteren Bereich von Reaktionsbedingungen.
- Eine Erhöhung der Reaktionstemperatur von 37°C auf 50 - 60°C kann die Aktivität um ein Vielfaches erhöhen.
Qualität
- PCR-Qualität, die eine hohe Reinheit und keine Interferenz mit PCR-Reaktionen gewährleistet.
Anwendungen
- Geeignet für die DNA- und RNA-Extraktion
- Entfernung von Proteinverunreinigungen
- Vorbereitung von Proben für verschiedene molekularbiologische Techniken.
Vorteile
- Hohe Reinheit: Die PCR-Qualität garantiert minimale Verunreinigungen und sorgt für zuverlässige Ergebnisse bei empfindlichen Anwendungen.
- Vielseitig einsetzbar: Ideal für verschiedene molekularbiologische Verfahren, einschließlich der Probenvorbereitung für die PCR.
- Einfache Anwendung: Gebrauchsfertige Lösung in optimaler Konzentration für eine einfache Anwendung.
Zusätzliche Bemerkungen
- Die empfohlene Arbeitskonzentration von Proteinase K beträgt 0,05 bis 1 mg/mL.
- Die Aktivität des Enzyms wird durch 0,2 bis 1 % SDS und auch durch 1 bis 4 M Harnstoff stimuliert.
- Ca2+ schützt Proteinase K vor Autolyse und erhöht die thermische Stabilität
- Stabil über einen weiten pH-Bereich: 4,0 bis 12,5, optimaler pH-Wert 7,5 bis 8,0
- Aktivitätsoptimum: 50°C bis 55°C
- Bei Temperaturen über 65°C tritt eine schnelle Denaturierung des Enzyms ein.
Merkmale
- Keine nachgewiesene Exonuklease-, Endonuklease- oder RNase-Aktivität
- Spezifische Aktivität: ≥40 units/mg protein
- Aktivität: ≥30 units/mg
- Löslichkeit: ≥20 mg/mL
- DNA-Gehalt ≤10 pg/mL
- Versandbedingungen: wird gekühlt verschickt
Inhibitoren von Proteinase K
- SDS: High concentrations of SDS can denature and inactivate proteinase K.
- EDTA: EDTA is a chelating agent that can bind to metal ions that are essential for proteinase K activity.
- Harnstoff: Hohe Konzentrationen an Harnstoff können Proteinase K denaturieren und dadurch inaktivieren.
- Detergenzien: Einige Detergenzien, wie z.B. Triton X-100 oder Tween® 20 können Proteinase K, besondersn, wenn die Detergenzien in hohen Konzentrationen vorliegen, inhibieren.
- Protease-Inhibitoren: Protease-Inhibitoren, wie Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF), können Proteinase K irreversibel inhibieren.
- Chaotrope Salze: Abhängig vom DNA-Extratkionsprotokoll kann die Anwesenheit chaotroper Salze, oder Detergenzien, die Proteinase K Aktivität erhöhen. Es kann aber auch sein, dass dieselben Reagenzien die Proteinase K Aktivität inhibieren.
Hergestellt von der Genaxxon bioscience GmbH, die 2002 von Dr. Norbert Tröndle gegründet wurde, um zuverlässige Produkte für PCR und kundenspezifische Zellkulturmedienformulierungen anzubieten, bietet die Proteinase K Solution 20 mg/mL eine zuverlässige und effiziente Lösung für Ihre molekularbiologischen Anforderungen. Erzielen Sie konsistente, hochwertige Ergebnisse mit einem Enzym, das speziell für Ihre Anforderungen entwickelt wurde.
Specifications:
Appearance: white lyophilisate
Activity: >30 AnsonU/mg protein (>30 units/mg)
DNAses and RNAses: not detectable
Solubility: easily soluble in water
pH (1% H2O, 20°C): 6.2 - 6.8
MW = ca. 27,000 g/mol.
Applikation:
Protein digest in DNA samples Isolation of genomic DNA from mouse tails Isolation of genomic DNA from cell culturesEinheiten:
Activity: >30 U/mg lyophilizate. Specific activity: >40 U/mg protein. One unit is definded as the enzyme acitivity which liberates folin-positive amino acids and peptides corresponding to 1 µmol tyrosine in 1 minute at 37°C using haemoglobin as substrate.Quelle:
Tritirachium albumSicherheitshinweise:
Klassifizierungen:
Dokumente:
SicherheitsdatenblätterZertifikate
Produktbeschreibung
Allg. Daten 1
Application tipps
dissolve Proteinase K (20mg/mL) in water or in 50mM Tris/HCl (pH8.0), 1.5mM Ca-Acetate.
Following some application examples based on 20mg/mL concentrations of Proteinase K dissolved in pure water or 50mM Tris, pH8.0.
Standard reaction buffer:
Cell lysis: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 5 mM CaCl2; 0.5 % SDS.
DNA purification: 100 mM Tris-HCl (pH 8.0); 50 mM EDTA, 500 mM NaCl.
Some Application Protocols:
• Isolation of genomic DNA from mammal cells
(3h, 50°C) 10mM Tris/HCl (pH8.0), 100mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5%SDS, 20µg/mL DNase free RNase, 100µg/mL proteinase K.
• Isolation of genomic DNA from mice tails
(overnight, 55°C) 20mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
• Rapid isolation of genomic DNA as a PCR-template from cell cultures
(1h, 37 °C) 67mM Tris/HCl (pH8.8), 16.6mM ammonium sulfate, 5mM β-mercaptoethanol, 6.7mM MgCl2, 6.7µM EDTA (pH8.0), 1.7µM SDS, 50µg/mL proteinase K.
• Preparation of DNA for PFGE, lysis in agarose block
(approx. 20h, 50°C). 100mM EDTA (pH8.0), 1 mM Tris/HCl (pH7.6), 20mM NaCl, 1% sarcosyl, 100µg/mL proteinase K.
• Purification of mRNA prior to cDNA synthesis (leads often to an increase in cDNA yield)
(1-2h, 37°C) 100mM Tris/HCl (pH7.5), 10mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.1% SDS, 5µg/mL proteinase K.
• Purification of PCR-reactions prior to cloning
(overnight, 55°C) PCR-reaction + 10mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 400mM NaCl, 1% SDS, 400µg/mL proteinase K.
• Purification of plasmid-DNA prior to in vitro transcription
(1h, 37°C) Plasmid-DNA + 21mM Tris/HCl (pH8.0), 5mM EDTA (pH8.0), 50mM NaCl, 0.5% SDS, 100µg/mL proteinase K.
• RNase inactivation in ribonuclease-protection-assays
(30 min, 37°C) 30µL RNA/RNA-hybridisation mix + 300µL RNase digestion mix + 0.6% SDS, 300µg/mL proteinase K.
• Inactivation of DNase in transcription-run-on-assays
(30 min, 42°C) Suspension of nuclei in 36mM Tris/HCl (pH7.4), 17mM MgCl2, 0.7mM CaCl2, 170mM NaCl, 13mM EDTA (pH8.0), 0.5% SDS with DNase, 100µg/mL proteinase K.
• Denaturation of alkaline phosphatase when cipping vector DNA
(30 min, 56°C) 1 x dephosphorylation buffer + 0.5% SDS, 5mM EDTA (pH8.0), 100µg/mL proteinase K.
Quelle: NCBI PubMed
Decreased Enhancer-Promoter Proximity Accompanying Enhancer Activation
Nezha S. Benabdallah, Iain Williamson, Robert S. Illingworth, Lauren Kane, Shelagh Boyle, Dipta Sengupta, Graeme R. Grimes, Pierre Therizols, Wendy A. Bickmore
Mol Cell. 2019 Nov 7; 76(3): 473–484.e7.
doi: 10.1016/j.molcel.2019.07.038
PMCID: PMC6838673
Glucocorticoid Receptor Binding Induces Rapid and Prolonged Large-Scale Chromatin Decompaction at Multiple Target Loci
Alasdair W. Jubb, Shelagh Boyle, David A. Hume, Wendy A. Bickmore
Cell Rep. 2017 Dec 12; 21(11): 3022–3031.
doi: 10.1016/j.celrep.2017.11.053
PMCID: PMC5745231
Enhancer turnover is associated with a divergent transcriptional response to glucocorticoid in mouse and human macrophages
Alasdair W Jubb, Robert S Young, David A Hume, Wendy A Bickmore
J Immunol. 2016 Jan 15; 196(2): 813–822.
doi: 10.4049/jimmunol.1502009
PMCID: PMC4707550
Active promoters give rise to false positive ‘Phantom Peaks’ in ChIP-seq experiments
Dhawal Jain, Sandro Baldi, Angelika Zabel, Tobias Straub, Peter B. Becker
Nucleic Acids Res. 2015 Aug 18; 43(14): 6959–6968.
doi: 10.1093/nar/gkv637
PMCID: PMC4538825
ISWI Remodelling of Physiological Chromatin Fibres Acetylated at Lysine 16 of Histone H4
Henrike Klinker, Felix Mueller-Planitz, Renliang Yang, Ignasi Forné, Chuan-Fa Liu, Lars Nordenskiöld, Peter B. Becker
PLoS One. 2014; 9(2): e88411.
doi: 10.1371/journal.pone.0088411
PMCID: PMC3916430
PRC1 and PRC2 Are Not Required for Targeting of H2A.Z to Developmental Genes in Embryonic Stem Cells
Robert S. Illingworth, Catherine H. Botting, Graeme R. Grimes, Wendy A. Bickmore, Ragnhild Eskeland
PLoS One. 2012; 7(4): e34848.
doi: 10.1371/journal.pone.0034848
PMCID: PMC3322156
HP1 Binding to Chromatin Methylated at H3K9 Is Enhanced by Auxiliary Factors
Ragnhild Eskeland, Anton Eberharter, Axel Imhof
Mol Cell Biol. 2007 Jan; 27(2): 453–465.
doi: 10.1128/MCB.01576-06
PMCID: PMC1800810
Accessory Items
Protease Inhibitor Mix II für Proteinrohextrakte ist eine spezielle Mischung von 5 wasserlöslichen Proteaseinhibitoren mit einer breiten Wirkspektrum gegen Cystein-, Serin- und Metalloproteinasen. Die Mischung wird für allgemeine Anwendungen und speziell dort empfohlen, wo keine organischen Lösungsmittel eingesetzt werden dürfen/können. Die Mischung enthält AEBSF >, Aprotinin >, E-64 >, Leupeptin > und EDTA. Der Inhalt eines Vials in 1mL Wasser gelöst ergibt ein 100-fach Konzentrat das für die Behandlung von 100mL Proteinrohextrakt ausreicht. Wirkspektrum: AEBSF wirkt gegen Serinproteasen. Aprotinin wirkt gegen Serinproteasen. E-64 wirkt gegen Cysteinproteasen. Leupeptin wirkt gegen Cysteinproteasen und trypsinähnlichen Serinproteasen und EDTA inhibiert Metalloproteasen. Weitere Proteaseinhibitorenmixe von Genaxxon finden Sie hier: - Protease Inhibitor Mix I > (allgemeine Anwendungen, enthält kein EDTA)- Protease Inhibitor Mix II >(allgemeine Anwendungen, enthält EDTA)- Protease Inhibitor Mix III > (speziell für bakterielle Extrakte, enhält EDTA)- Protease Inhibitor Mix IV > (speziell für pflanzliche Extrakte, enthält kein EDTA)- Protease Inhibitor Mix V > (speziell für tierische Extrakte, enthält kein EDTA) Weitere Inhibitoren finden Sie hier: Inhibitoren >: Pepstatin A >, AEBSF >, Aprotinin >, Leupeptin >, TLCK >, PMSF >, Bestatin > oder
Ribonuklease A ist eine Endo-Ribonuklease, die spezifisch Einzelstrang-RNA am 3'-Ende von Pyrimidinbasen (Cytosin und Uracil) schneidet. RNAse A wird benutzt, um RNA-freie DNA zu erhalten und um nichthybridisierte RNA-DNA Hybride zu hydrolisieren. Das pH-Optimum von RNAse A liegt zwischen 7,0 und 7,5. RNAse A wird durch Diethylpyrocarbonate (DEPC) >, Guanidiniumsalz (4 M Guanidiniumthiocyanat), beta-Mercaptoethanol, Schwermetalle, Vanadylkomplexe, RNAse-Inhibitor inhibiert. RNAse A spaltet Einzel- und Doppelstrang RNA und RNA in RNA:DNA Komplexen bei niedriger Salzkonzentration (100 mM NaCl). Bei hohen Salzkonzentrationen (>300 mM NaCl) spaltet das Enzym nur noch Einzelstrang RNA. Das Enzym kann durch Proteinase K-Verdau und anschließende Phenolextraktion entfernt werden. Eliminierung von potentieller DNAse-Aktivität: Produkt S5231 (RNAse A (nicht zertifiziert DNAse-frei)) kann DNAse-Aktivität beinhalten. Da jedoch RNAse A hitzestabil ist empfehlen wir eventuelle DNAse-Aktivität durch Hitzeinaktivierung zu entfernen. Prozedur: 10mg/mL RNAse A gelöst in 0,01 Natriumacetat (pH5.2) werden 15 Minuten lang bei 100°C for 15 im Wasserbad inkubiert. Anschließend verbleibt der Ansatz im Wasserbad, während dieses auf Raumtemperatur abkühlt. Der pH-Wert der Lösung kann durch Zugabe des 0,1-fachen Volumens an 1M Tris-HCl (pH7,4) angepasst werden. Nach dem aliquotieren, der nun DNAse-freien RNAse A, sollten alle Aliquote bei -20°C gelagert werden. ACHTUNG: RNAse A präzipitiert wenn konzentrierte Lösungen bei neutralem pH-Wert auf 100°C erhitzt werden! Stock solution: Stammlösungen können im Konzentrationsbereich von 1 - 10mg/mL in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 15mM NaCl oder in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 1mM EDTA, pH8.0 (TE-Puffer) hergestellt werden. Die empfohlene Arbeitskonzentration ist 10µg/mL (für die Entfernung von RNA aus Plasmidpräparationen; 1 hr, RT) oder 100ng/mL (bei der Präparation von 'blunt ends' bei doppelsträngiger cDNA). Stabilität: RNase A aggregiert während der Lyophilisation und Lagerung. Das Protein hat eine hohe Affinität zu Glassoberflächen, was bei der Herstellung von Lösungen berücksichtigt werden sollte. Bei neutralem pH (z.B. in PBS pH 7.4) und hohen Konzentrationen (>10mg/mL) wird RNase A präzipitieren. Bei +2°C to +8°C (lyophilisiert) ist RNase A für mehrere Jahre stabil (Lagerung im Trockenen). In Lösung (-20°C) ebenfalls für mehrere Jahre und bei +2°C to +8°C für einige Wochen.
DNase I ist eine Endonuklease aus Rinderpankreas, die Doppel- und Einzelstrang-DNA in Oligo- und Mononukleotide hydrolisiert. BeschreibungDNAse I wird unter anderem dazu verwendet unerwünschte Verklumpung bei der Gewebedisaggregation zu vermeiden, die eine Dispersion einzelner Zellen erschwert. Da die Disaggregation von Gewebe und die nachfolgende Isolierung einzelner Zellen immer mit der Ruptur und Lyse einiger Zellen einhergeht, wird DNA aus diesen Zellen in das umgebende Medium abgegeben. Die freigesetzte DNA im Medium wird für die unerwünschte Zellverklumpung bei Gewebedissoziationsverfahren verantwortlich gemacht. Dieser Verklumpungseffekt kann durch Zugabe von Desoxyribonuklease (DNase) zum Dissoziationsmedium vermieden werden und wurde für eine Vielzahl von verschiedenen Zell- und Gewebetypen beschrieben. DNase kann auch eingesetzt werden, um, vor wichtigen Experimenten (wie RT-PCR), DNA aus RNA-Präparationen zu entfernen. Da keine Reinigungsmethode für RNA zu 100% die DNA entfernt, ist es angeraten, vor jeder RT-PCR, die DNA mittels DNAse I zu entfernen. Ein einfacher 15-minütiger Verdau bei Raumtemperatur beseitigt zuverlässig alle kontaminierende DNA. DNase I wird inaktiviert, indem man die Stopplösung zugibt und erhitzt. Da Hitze auch die RNA denaturiert, kann der Ansatz dann sofort für die reverse Transkription benutzt werden. Diese DNAse I aus Rinderpankreas ist nicht RNase frei und muss vor Einsatz für die Isolation von RNA entsprechend chemisch behandelt werden.
ÜberblickProteinase K ist eine robuste und vielseitige Serinprotease, die in der Molekularbiologie häufig für den Verdau von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet wird. Diese Lösung in einer Konzentration von 20 mg/ml ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Vorbereitung von DNA- und RNA-Proben. Die PCR-Qualität stellt sicher, dass das Enzym frei von Verunreinigungen ist, die nachgeschaltete Anwendungen beeinträchtigen könnten, so dass es sich hervorragend für empfindliche Techniken wie die PCR eignet.Produkt-Detailsready-to-useKonzentration: 20 mg/mLAktiv über einen weiteren Bereich von Reaktionsbedingungen.Eine Erhöhung der Reaktionstemperatur von 37°C auf 50 - 60°C kann die Aktivität um ein Vielfaches erhöhen.QualitätPCR-Qualität, die eine hohe Reinheit und keine Interferenz mit PCR-Reaktionen gewährleistet.AnwendungenGeeignet für die DNA- und RNA-ExtraktionEntfernung von ProteinverunreinigungenVorbereitung von Proben für verschiedene molekularbiologische Techniken. VorteileHohe Reinheit: Die PCR-Qualität garantiert minimale Verunreinigungen und sorgt für zuverlässige Ergebnisse bei empfindlichen Anwendungen. Vielseitig einsetzbar: Ideal für verschiedene molekularbiologische Verfahren, einschließlich der Probenvorbereitung für die PCR.Einfache Anwendung: Gebrauchsfertige Lösung in optimaler Konzentration für eine einfache Anwendung.Zusätzliche BemerkungenDie empfohlene Arbeitskonzentration von Proteinase K beträgt 0,05 bis 1 mg/mL. Die Aktivität des Enzyms wird durch 0,2 bis 1 % SDS und auch durch 1 bis 4 M Harnstoff stimuliert.Ca2+ schützt Proteinase K vor Autolyse und erhöht die thermische StabilitätStabil über einen weiten pH-Bereich: 4,0 bis 12,5, optimaler pH-Wert 7,5 bis 8,0Aktivitätsoptimum: 50°C bis 55°CBei Temperaturen über 65°C tritt eine schnelle Denaturierung des Enzyms ein. MerkmaleKeine nachgewiesene Exonuklease-, Endonuklease- oder RNase-Aktivität Konzentration ≥20 mg/mL / Aktivität ≥600 U/mLDNA-Gehalt ≤200 pg/mLVersandbedingungen: wird gekühlt verschicktLagerpuffer: 10 mM Tris/HCl, pH7,5; 1mM (CH3COO)2Ca; 50% Glycerin Proteinase K kann von Genaxxon als Pulver (M3036 >) oder als 20mg/mL Lösung (M3037 >) bezogen werden. Hergestellt von der Genaxxon bioscience GmbH, die 2002 von Dr. Norbert Tröndle gegründet wurde, um zuverlässige Produkte für PCR und kundenspezifische Zellkulturmedienformulierungen anzubieten, bietet die Proteinase K Solution 20 mg/mL eine zuverlässige und effiziente Lösung für Ihre molekularbiologischen Anforderungen. Erzielen Sie konsistente, hochwertige Ergebnisse mit einem Enzym, das speziell für Ihre Anforderungen entwickelt wurde.