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| Bis 10 |
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Produktinformationen "Proteinase Low-Temp - Lösung (200 units/mL)"
Die leicht zu inaktivierende Genaxxon Proteinase Low-Temp ist eine unspezifische Endopeptidase, die aus einer arktischen marinen mikrobiellen Quelle stammt. Sie hat eine breite Substratspezifität und ist nach Gebrauch leicht zu inaktivieren. Bereits ab einer Temperatur von 60°C wird die Genaxxon Proteinase Low-Temp hitzeinaktiviert und ist somit ideal geeignet für hitzeempfindliche Proben.
Die Proteinase Low-Temp ist am aktivsten im Temperaturbereich von 25°C-40°C. In der Regel wird eine Hitzeinaktivierung bis zu 15 Minuten bei 40°C-65°C empfohlen, abhängig vom Grad der erforderlichen Inaktivierung.
Es ist bekannt, dass Histone und andere Proteine Nukleinsäuren vor einer optimalen Wechselwirkung mit anderen DNA-bindenden Proteinen und Enzymen abschirmen. Die Genaxxon Proteinase Low-Temp eignet sich ideal für die Transformation von Chromatin und anderen kompakten Nukleinsäuren in bloße DNA. Das Enzym ist leicht inaktivierbar. Dies ermöglicht eine thermische Inaktivierung bei Temperaturen, die für RNA-Integrität sorgen und die Dissoziation von dsDNA vermeiden.
Vorteile:
- Leicht zu inaktivieren
- Aktiv bei hohem Salzgehalt
- Kompatibel mit Downstreamanalysen
Anwendungsbeispiele:
- Präparation chromosomaler DNA für die PFGE
- Abbau von Nukleasen (DNase, RNase) bei der Präparation von Nukleinsäuren, einschließlich der Gewinnung nativer RNA
- Isolierung genomischer DNA aus Gewebe von Mausschwänzen
- Isolierung genomischer DNA aus Zellkulturen
Spezifische Aktivität: >30 U/mg. Fremdaktivität: RNase und DNase nicht nachweisbar. Temperatur-Optimum: +25°C bis +40°C (pH 7-10).
Empfohlene Inaktivierungsbedingungen: In der Regel bis zu 15 Minuten bei 40-65°C, abhängig vom Grad der erforderlichen Inaktivierung.
Inhibitoren: Allgemein Serinproteaseinhibitoren wie PMSF.
Anwendungshinweise: Das Enzym ist bei Lagerung von -20°C bis zu 2 Jahre lang stabil. Die Genaxxon Proteinase Low-Temp ist auch bei Lagerung von 4°C (>6 Monate) und Raumtemperatur (>4 Wochen) stabil.
Die optimale Enzymaktivität liegt zwischen pH 7 und 10. Empfohlener Temperaturbereich für die Aktivität ist 25–40°C. Die Aktivität der Genaxxon Proteinase Low-Temp ist nicht von zweiwertigen Kationen wie Calcium abhängig (Ca2+) und ist daher in Puffern aktiv, die EDTA enthalten (<40°C Reaktionstemperatur).
Genaxxon Proteinase Low-Temp ist geeignet für den Verdauung von Proteinen in Gegenwart von SDS (0,2–1%) und Harnstoff (1–5 M). Das Enzym verträgt 500mM Guanidinthiocyanat und 1% Triton X-100 (>50% Aktivität). Es kann kein signifikanter Aktivitätsverlust bei 400 mM NaCl beobachtet werden.
Proteinase K erhalten Sie von Genaxxon als Pulver (M3036) > oder als Lösung (20mg/mL, M3037) >.
- Source: Recombinantly produced in Pichia pastoris
- Specific activity: >30 Units/mg
- Concentration: min. 200 U/mL
- Size: 34 kDa
- Specificity: Nonspecific endopeptidase
- Activity:
- Highly active in temperature range of 25–40°C
- pH: 7–10 - Inactivation:
Typically up to 15 minutes at 40°C – 65°C (inactivation by denaturation). - Tolerance to typical buffer additives:
- SDS: 0.2–1%
- Urea: 1–5 mM - Inhibitors: The enzyme is inhibited by general serine protease inhibitors, such as PMSF.
- Storage: The enzyme is stable upon storage at - 20°C for up to 2 years. Genaxxon Proteinase is also stable upon storage at 4°C (> 6 months) and room temperature (> 4 weeks). Genaxxon Proteinase is stable at dilute concentrations (< 0.1 mg/ml) in solutions.
Applikation:
Protein digest in DNA samples for example: Typical uses will be direct-PCR settings of single and few cells. Isolation of vaccinia virus DNA. Purification of genomic DNA from bacteria (miniprep).Einheiten:
One unit is defined as the amount of enzyme that produces one μmol 4-nitroaniline (extinction coefficient 8.8 mM-1 at 410 nm) at 25°C, pH 8.0 per minute (buffer conditions 50 mM Tris-HCl pH 8.0, 1% DMSO, 1 mM Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA).Quelle:
Pichia pastorisSicherheitshinweise:
Klassifizierungen:
Dokumente:
ProduktbeschreibungThis enzyme differs from normal Proteinase K as it is easier to inactivate and gentler on downstream procedures. Its main purpose is to reduce chromatin to naked DNA prior to analysis. It is best fitted to analysis of small amounts of cells, where endogenous proteinases will not have an adverse effect on downstream analysis
Possible protocol for tissue cells:
Seed small amounts of cells in 96-well plate (few thousands?)
Following day – wash and lyse cells in lysis buffer supplemented with AZ Protease (7.5 U/mL)
Transfer 2µL lysate to a 10µL qPCR reaction kept on ice
Run qPCR directly
Heat inactivate might be necessary in some cases (e.g. in case of not working on ice, as this means that used enzymes will be more susceptible for protease activity), then a typical inactivation step might be up to 15 minutes at 40-65°C, depending on degree of inactivation needed.
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DNase I ist eine Endonuklease aus Rinderpankreas, die Doppel- und Einzelstrang-DNA in Oligo- und Mononukleotide hydrolisiert. BeschreibungDNAse I wird unter anderem dazu verwendet unerwünschte Verklumpung bei der Gewebedisaggregation zu vermeiden, die eine Dispersion einzelner Zellen erschwert. Da die Disaggregation von Gewebe und die nachfolgende Isolierung einzelner Zellen immer mit der Ruptur und Lyse einiger Zellen einhergeht, wird DNA aus diesen Zellen in das umgebende Medium abgegeben. Die freigesetzte DNA im Medium wird für die unerwünschte Zellverklumpung bei Gewebedissoziationsverfahren verantwortlich gemacht. Dieser Verklumpungseffekt kann durch Zugabe von Desoxyribonuklease (DNase) zum Dissoziationsmedium vermieden werden und wurde für eine Vielzahl von verschiedenen Zell- und Gewebetypen beschrieben. DNase kann auch eingesetzt werden, um, vor wichtigen Experimenten (wie RT-PCR), DNA aus RNA-Präparationen zu entfernen. Da keine Reinigungsmethode für RNA zu 100% die DNA entfernt, ist es angeraten, vor jeder RT-PCR, die DNA mittels DNAse I zu entfernen. Ein einfacher 15-minütiger Verdau bei Raumtemperatur beseitigt zuverlässig alle kontaminierende DNA. DNase I wird inaktiviert, indem man die Stopplösung zugibt und erhitzt. Da Hitze auch die RNA denaturiert, kann der Ansatz dann sofort für die reverse Transkription benutzt werden. Diese DNAse I aus Rinderpankreas ist nicht RNase frei und muss vor Einsatz für die Isolation von RNA entsprechend chemisch behandelt werden.
ÜberblickProteinase K ist eine robuste und vielseitige Serinprotease, die in der Molekularbiologie häufig für den Verdau von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet wird. Diese Lösung in einer Konzentration von 20 mg/mL ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Vorbereitung von DNA- und RNA-Proben. Die PCR-Qualität stellt sicher, dass das Enzym frei von Verunreinigungen ist, die nachgeschaltete Anwendungen beeinträchtigen könnten, so dass es sich hervorragend für empfindliche Techniken wie die PCR eignet.Produkt-Detailsready-to-useKonzentration: 20 mg/mLAktiv über einen weiteren Bereich von Reaktionsbedingungen.Eine Erhöhung der Reaktionstemperatur von 37°C auf 50 - 60°C kann die Aktivität um ein Vielfaches erhöhen.QualitätPCR-Qualität, die eine hohe Reinheit und keine Interferenz mit PCR-Reaktionen gewährleistet.AnwendungenGeeignet für die DNA- und RNA-ExtraktionEntfernung von ProteinverunreinigungenVorbereitung von Proben für verschiedene molekularbiologische Techniken. VorteileHohe Reinheit: Die PCR-Qualität garantiert minimale Verunreinigungen und sorgt für zuverlässige Ergebnisse bei empfindlichen Anwendungen. Vielseitig einsetzbar: Ideal für verschiedene molekularbiologische Verfahren, einschließlich der Probenvorbereitung für die PCR.Einfache Anwendung: Gebrauchsfertige Lösung in optimaler Konzentration für eine einfache Anwendung.Zusätzliche BemerkungenDie empfohlene Arbeitskonzentration von Proteinase K beträgt 0,05 bis 1 mg/mL. Die Aktivität des Enzyms wird durch 0,2 bis 1 % SDS und auch durch 1 bis 4 M Harnstoff stimuliert.Ca2+ schützt Proteinase K vor Autolyse und erhöht die thermische StabilitätStabil über einen weiten pH-Bereich: 4,0 bis 12,5, optimaler pH-Wert 7,5 bis 8,0Aktivitätsoptimum: 50°C bis 55°CBei Temperaturen über 65°C tritt eine schnelle Denaturierung des Enzyms ein. MerkmaleKeine nachgewiesene Exonuklease-, Endonuklease- oder RNase-Aktivität Spezifische Aktivität: ≥40 units/mg proteinAktivität: ≥30 units/mgLöslichkeit: ≥20 mg/mLDNA-Gehalt ≤10 pg/mLVersandbedingungen: wird gekühlt verschicktInhibitoren von Proteinase KWelche Substanzen können Proteinase K inhibiieren? Proteinase K kann von einer Vielzahl Substanzen inhibitiert werden. Hierzu gehörten "denaturierende Substanzen", Detergenzien aber auch Proteinase inhibitoren. Die Empfindlichkeit gegenüber den Inhibitoren hängt dabei stark von der jeweiligen Anwendung ab (genauer pH, Konzentration, Temperatur). Häufig in der Biochemie und der Molekularbiologie eingesetzte Inhibitoren sind: SDS: High concentrations of SDS can denature and inactivate proteinase K.EDTA: EDTA is a chelating agent that can bind to metal ions that are essential for proteinase K activity. Harnstoff: Hohe Konzentrationen an Harnstoff können Proteinase K denaturieren und dadurch inaktivieren.Detergenzien: Einige Detergenzien, wie z.B. Triton X-100 oder Tween® 20 können Proteinase K, besondersn, wenn die Detergenzien in hohen Konzentrationen vorliegen, inhibieren.Protease-Inhibitoren: Protease-Inhibitoren, wie Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF), können Proteinase K irreversibel inhibieren.Chaotrope Salze: Abhängig vom DNA-Extratkionsprotokoll kann die Anwesenheit chaotroper Salze, oder Detergenzien, die Proteinase K Aktivität erhöhen. Es kann aber auch sein, dass dieselben Reagenzien die Proteinase K Aktivität inhibieren.Proteinase K kann von Genaxxon als Pulver (M3036 >) oder als 20mg/mL Lösung (M3037 >) bezogen werden.Hergestellt von der Genaxxon bioscience GmbH, die 2002 von Dr. Norbert Tröndle gegründet wurde, um zuverlässige Produkte für PCR und kundenspezifische Zellkulturmedienformulierungen anzubieten, bietet die Proteinase K Solution 20 mg/mL eine zuverlässige und effiziente Lösung für Ihre molekularbiologischen Anforderungen. Erzielen Sie konsistente, hochwertige Ergebnisse mit einem Enzym, das speziell für Ihre Anforderungen entwickelt wurde.
Protease Inhibitor Mix II für Proteinrohextrakte ist eine spezielle Mischung von 5 wasserlöslichen Proteaseinhibitoren mit einer breiten Wirkspektrum gegen Cystein-, Serin- und Metalloproteinasen. Die Mischung wird für allgemeine Anwendungen und speziell dort empfohlen, wo keine organischen Lösungsmittel eingesetzt werden dürfen/können. Die Mischung enthält AEBSF >, Aprotinin >, E-64 >, Leupeptin > und EDTA. Der Inhalt eines Vials in 1mL Wasser gelöst ergibt ein 100-fach Konzentrat das für die Behandlung von 100mL Proteinrohextrakt ausreicht. Wirkspektrum: AEBSF wirkt gegen Serinproteasen. Aprotinin wirkt gegen Serinproteasen. E-64 wirkt gegen Cysteinproteasen. Leupeptin wirkt gegen Cysteinproteasen und trypsinähnlichen Serinproteasen und EDTA inhibiert Metalloproteasen. Weitere Proteaseinhibitorenmixe von Genaxxon finden Sie hier: - Protease Inhibitor Mix I > (allgemeine Anwendungen, enthält kein EDTA)- Protease Inhibitor Mix II >(allgemeine Anwendungen, enthält EDTA)- Protease Inhibitor Mix III > (speziell für bakterielle Extrakte, enhält EDTA)- Protease Inhibitor Mix IV > (speziell für pflanzliche Extrakte, enthält kein EDTA)- Protease Inhibitor Mix V > (speziell für tierische Extrakte, enthält kein EDTA) Weitere Inhibitoren finden Sie hier: Inhibitoren >: Pepstatin A >, AEBSF >, Aprotinin >, Leupeptin >, TLCK >, PMSF >, Bestatin > oder
Ribonuklease A ist eine Endo-Ribonuklease, die spezifisch Einzelstrang-RNA am 3'-Ende von Pyrimidinbasen (Cytosin und Uracil) schneidet. RNAse A wird benutzt, um RNA-freie DNA zu erhalten und um nichthybridisierte RNA-DNA Hybride zu hydrolisieren. Das pH-Optimum von RNAse A liegt zwischen 7,0 und 7,5. RNAse A wird durch Diethylpyrocarbonate (DEPC) >, Guanidiniumsalz (4 M Guanidiniumthiocyanat), beta-Mercaptoethanol, Schwermetalle, Vanadylkomplexe, RNAse-Inhibitor inhibiert. RNAse A spaltet Einzel- und Doppelstrang RNA und RNA in RNA:DNA Komplexen bei niedriger Salzkonzentration (100 mM NaCl). Bei hohen Salzkonzentrationen (>300 mM NaCl) spaltet das Enzym nur noch Einzelstrang RNA. Das Enzym kann durch Proteinase K-Verdau und anschließende Phenolextraktion entfernt werden. Eliminierung von potentieller DNAse-Aktivität: Produkt S5231 (RNAse A (nicht zertifiziert DNAse-frei)) kann DNAse-Aktivität beinhalten. Da jedoch RNAse A hitzestabil ist empfehlen wir eventuelle DNAse-Aktivität durch Hitzeinaktivierung zu entfernen. Prozedur: 10mg/mL RNAse A gelöst in 0,01 Natriumacetat (pH5.2) werden 15 Minuten lang bei 100°C for 15 im Wasserbad inkubiert. Anschließend verbleibt der Ansatz im Wasserbad, während dieses auf Raumtemperatur abkühlt. Der pH-Wert der Lösung kann durch Zugabe des 0,1-fachen Volumens an 1M Tris-HCl (pH7,4) angepasst werden. Nach dem aliquotieren, der nun DNAse-freien RNAse A, sollten alle Aliquote bei -20°C gelagert werden. ACHTUNG: RNAse A präzipitiert wenn konzentrierte Lösungen bei neutralem pH-Wert auf 100°C erhitzt werden! Stock solution: Stammlösungen können im Konzentrationsbereich von 1 - 10mg/mL in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 15mM NaCl oder in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 1mM EDTA, pH8.0 (TE-Puffer) hergestellt werden. Die empfohlene Arbeitskonzentration ist 10µg/mL (für die Entfernung von RNA aus Plasmidpräparationen; 1 hr, RT) oder 100ng/mL (bei der Präparation von 'blunt ends' bei doppelsträngiger cDNA). Stabilität: RNase A aggregiert während der Lyophilisation und Lagerung. Das Protein hat eine hohe Affinität zu Glassoberflächen, was bei der Herstellung von Lösungen berücksichtigt werden sollte. Bei neutralem pH (z.B. in PBS pH 7.4) und hohen Konzentrationen (>10mg/mL) wird RNase A präzipitieren. Bei +2°C to +8°C (lyophilisiert) ist RNase A für mehrere Jahre stabil (Lagerung im Trockenen). In Lösung (-20°C) ebenfalls für mehrere Jahre und bei +2°C to +8°C für einige Wochen.