Vorteile im Überblick
- stable for up to 3 years if stored at -20°C
- stable for at least 12 months after delivery if stored at +15°C to +30°C
- stable for at least 6 months
- Kostenloser Versand
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- 30 Tage Geld-Zurück-Garantie
- Bequemer Kauf auf Rechnung
Produktinformationen "Lyophilisierter 5x qPCR Multiplex MasterMix"
Lyophilisierter 5x Multiplex PCR Mastermix für eine robuste qPCR zur schnellen, sensitiven und reproduzierbaren parallelen Quantifizierung verschiedener Templates. Die optimierte DNA-Polymerase und ein optimiertes Puffersystem einschließlich unserer hochreinen dNTPs sind Schlüsselkomponenten dieses ready-to-use qPCR Mastermixes. Die Hotstart-Formulierung der enthaltenen DNA-Polymerase verhindert eine falsche Amplifikation vor dem ersten Denaturierungsschritt und sorgt somit für die benötigte Spezifität. Unser Mastermix funktioniert mit einer breiten Palette an Templates, inklusive humaner, tierischer oder auch Pflanzen-DNA.
Eigenschaften:
- 5-fach konzentriert für mehr Wahlmöghlichkeit für das Primer- und Probevolumen.
- Amplifikation von unterschiedlichen Targets in einem einzigen PCR-Tube (für bis zu 4 Targets getestet).
- All-in-one Mastermix für das leichte multiplexen.
- Hohe Spezifität, Sensitivität und Produktausbeute.
- die Hot-Start-Formulierung der enthaltenen DNA-Polymerase verhindert eine falsche Amplifikation während des Reaktionsaufbaus
Unser neuer lyphilisierter 5-fach Multiplex Mastermix minimiert die Notwendigkeit zur Optimierung und macht daher die Entwicklung und Etablierung der Multiplex-PCR einfacher und schneller.
Stabilität
- der lyophilisierte MasterMix ist für 3 Jahre stabil, wenn er bei -20°C gelagert wird.
- der lyophilisierte MasterMix ist mindestens 12 Monate stabil, wenn er, nach der Anlieferung, bei +15°C bis +30°C gelagert wird.
- der rekonstituierte MasterMix ist für min. 6 Monate stabil, wenn er bei -20°C gelagert wird.
Weitere Realtime PCR Mastermixe passend für Ihre PCR finden Sie hier >.
Beispiele für Multiplexandwendungen:
F. Javier Pérez-Pérez and Nancy D. Hanson, Detection of Plasmid-Mediated AmpC β-Lactamase Genes in Clinical Isolates by Using Multiplex PCR, J. Clin. Microbiol. June 2002 vol. 40 no. 6 2153-2162. doi: 10.1128/JCM.40.6.2153-2162.2002.
- No-Template Control (NTC): Für jedes zu analysierende Gen ist es wichtig, eine NTC zu verwenden (einfach Wasser anstelle eines Templates). NTCs spielen eine entscheidende Rolle bei der Erkennung von Kreuzkontaminationen und sollten ein Standardbestandteil jeder qPCR sein.
- Referenzgene (früher bekannt als Housekeeping-Gene): Um eine robuste Genexpressionsanalyse zu gewährleisten, ist es eine gute Praxis, mehrere Referenzgene für jede Probe zu verwenden. Diese Referenzgene sollten unabhängig von der Behandlung eine stabile Expression aufweisen und als Referenzpunkte für die anschließende relative Quantifizierung dienen.
- Alternative Positivkontrolle: In Fällen, in denen Sie absolute Quantifizierungen durchführen und keine Referenzgene verwenden, wird die Einbeziehung einer alternativen Positivkontrolle empfohlen. Diese Kontrolle sollte in allen Szenarien stets ein bekanntes Ergebnis liefern.
- noRT-Kontrolle: Wenn Sie die reverse Transkription (RT) von mRNA als Vorlage verwenden, ist es ratsam, eine noRT-Kontrolle mit einer Probe ohne das Enzym durchzuführen.
- Reduzieren Sie die Primerkonzentration.
- Erhöhen Sie die Annealing-Temperatur (und achten Sie darauf, dass sie die Schmelztemperatur der Primer nicht überschreitet).
- Verkürzen Sie die Annealing-Zeit.
Specifications:
Lyophilized 5-time ready-to-use multiplex master mix with an optimized chemically modified Taq DNA polymerase.
Applikation:
Multiplex PCR for Microsatellite analysis clonality analysis gene rearrangement analysisQuelle:
syntheticKlassifizierungen:
Dokumente:
SicherheitsdatenblätterProtokolle
Produktbeschreibung
Kategorienliste
Accessory Items - Zubehör
Weiße 384-Well-PCR-Platten für optimale Kompatibilität mit dem Roche LightCycler® 480 mit 384-Well-Block. Die Platten sind auf ein Reaktionsvolumina von bis zu 30µl ausgelegt. Eigenschaften:Unbehandeltes weißes Polypropylengeschnittene Ecke A24/P24 <30µL Arbeitsvolumen bei 55µL Gesamtkapazität der WellsHauptmerkmale: - Aus einem Polypropylen unter ISO-zertifizierten Reinraumbedingungen hergestellt.- Frei an DNase, RNase, humaner genomischer DNA, sowie Endotoxin/Pyrogen-frei.- Ultra-glatte, dünnwandige Wells für eine optimale PCR (RT-qPCR) Ergebnisse.- Arbeitsvolumen: <30µL bei einem Gesamtvolumen von 55µL- Maximaler Wärmetransfer für eine effiziente und genaue PCR. - Erhöhte Well-Ränder verhindern eine mögliche Cross-Contamination und dienen gleichzeitig einem effektiven Abschluss für ein vermindertes Verdampfen während der PCR.- Empfohlen für die "low volume PCR.- Kompatibel mit Blöcken, die für 384 Well PCR Platten entwickelt wurden.Kompatibel mit Standard Multichannel Pipetten.- Kompatibel mit Blöcken, die für 384 Well-PCR-Plates entworfen wurden.
Standard low profile, 96-well PCR-Platte mit halbhohen Rand für den Roche LC480 Thermocycler. Die dünnwandigen wells sind für optimalen Wärmeübergang ausgelegt, um maximale PCR-Ergebnisse zu gewährleisten. Verschließbar mit Folie oder strip-caps. Diese Platten können auch im ABi 9700 eingesetzt werden. Eigenschaften des Plattenmaterials: Reines Polypropylen. Die Oberfläche ist für einen möglichst geringen Probenverlust ausgelegt. Gleichbleibende Qualität von Batch zu Batch garantiert gleichbleibende PCR-Effizienz. Die low-profile Geometrie erlaubt kleine PCR-Volumina. Schwarze Codierung zur einfachen Identifizierung der Probenwells. Abgeschrägte Kante für die einfache Orientierung. Gesamte Platte aus weißem Polypropylen.Volumen: 100µL
Unsere adhäsive Folien für die qPCR bestehen aus einer Folie mit optisch klaren Klebefilm und erst durch Druck aktivierbarem Kleber. Die Folie ist wieder abziehbar. Speziell geeignet für qPCR-Anwendungen und andere bildgebende Verfahren, einschließlich Kristallisationsverfahren. - Optisch klare Versiegelung insbesondere für die qPCR geeignet oder für spezielle optische Anwendungen.- Die Folie ist nicht klebrig, wenn sie aus der Verpackung entnommen und die Schutzfolie abgezogen wird. Dies erleichtert die Handhabung, speziell beim Tragen von Handschuhen.- Der Klebstoff befindet sich in kleinen Kapseln, die Licht durchlassen. Somit wird die optische Klarheit der Versiegelung gewährleistet.- Folie stabil zwischen: -40°C bis +110°C.- Frei von DNase, RNase, und humaner genomischer DNA. Wenn die Folie auf der PCR-Platte richtig positioniert wurde, kann Druck ausgeübt werden, um die Kapseln mit dem Klebstoff aufplatzen zu lassen, wodurch ein starker Klebstoff nur an den Stellen freigesetzt wird, auf die Druck ausgeübt wurde, also nur an den Vertiefungsränder der Platte - der Rest des Verschlussbereichs über den Vertiefungen bleibt optisch klar. Höchstlichtdurchlässige Folie für PCR-Platten, die in der qPCR benutzt werden. Ein Klebstoff wird nach Druck auf die Oberfläche freigesetzt.
B-Enhancer Lösung kann verwendet, werden um Multiplex-PCR Ergebnisse oder die PCR von GC-reichen Templates zu verbessern. Die Stammlösung ist 5M. Die Arbeitskonzentration beträgt 1M. Die Ergebnisse zeigen, dass die Genaxxon bioscience B-Enhancer Lösung mit der Q-solution von Qiagen vergleichbar ist. Bei Einsatz der B-Enhancer Lösung sollte die Annealingtemperatur verringert werden. Es kommt vor, dass für ein gegebenes Primerpaar eine Annealingtemperatur von 55°C verwendet werden muss, wenn normalerweise eine Annealingtemperatur von 60-65°C eingesetzt wird. Die optimale Annealingtemperatur sollte für jede Reaktion separat ermittelt werden. 500µL für 100 x 50µL PCR Reaktionen.
Biotin-11-dUTP (Biotin-11-2'-deoxyuridin-5'-triphosphat - Tetralithiumsalz) wird gewöhnlich für die enzymatische, nicht radioaktive Markierung von DNA verwendet. Biotin-11-dUTP kann in DNA enzymatisch durch Nick-Translation, random-priming, 3'-end terminal Labelling oder duch PCR mittels Taq DNA Polymerase oder Reverse Transkriptase Reaktion eingebaut werden. Die Zahl '11' steht für die Anzahl von Kohlenstoffatomen im Linker zwischen Biotin und dem dUTP. Je länger der Linker ist, desto besser funktioniert die Wechselwirkung zwischen Biotin and Avidin. Je kürzer der Linker ist, desto besser wird Biotin-dUTP in die DNA eingebaut. Es kann gezeigt werden, dass '11' einen guten Kompromiss zwischen den beiden Anforderungen ergibt. Das Produkt Biotin-11-dUTP für die nicht radioaktive Markierung von DNA wird als 1mM Lösung in 10mM Tris-HCl (pH7,5), 1mM EDTA geliefert. Biotin-11-dUTP kann mittels Taq DNA-Polymerase >, phi29 DNA Polymerase, dem Klenowfragment oder der DNA Polymerase I in DNA eingebaut werden. Neben Biotin-11-dUTP finden Sie hier weitere modifizierte Nukleotide >. Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix > mit 2 mM > oder 10 mM > bzw. das dNTP-Set mit 100mM >. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001) >, unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004) >, Pwo (M3002) > oder ReproFast (M3003) > sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029) >, der schon dNTPs enthält.
Deoxyuridin 5'-triphosphat Tetranatriumsalz (dUTP) mit einer Reinheit größer 99% (HPLC). dUTP kann als Ersatz für dTTP in PCR and RT-PCR Protokollen verwendet werden um 'Carry-Over' vor der PCR zu vermeiden. Das Produkt wurde in der Anwendung zur Amplifikation von Amplikons bis 8kb, sowie mit proofreading Enzymen (bis 0.8kb) getestet. Die Substitution von dTTP durch dUTP in der PCR resultiert in Uracil enthaltenter DNA die für die meisten Standardanwendungen verwendet werden kann. Das Enzym Uracil-DNA-Glucosylase (UDG) > wird dann vor einer neuen PCR-Reaktion eingesetzt, um alte DNA enzmatisch zu hydrolisieren. Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix mit 10 mM >, unser dNTP-Set als 4 x 100 mM Lösung > oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP >. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001) >, unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004) >, Pwo (M3002) > oder ReproFast (M3003) >, sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029) >, der schon dNTPs enthält.
Green DNA Dye ist ein sensitiver Fluoreszenzfarbstoff für die Detektion von dsDNA in der Real-time PCR (qPCR) oder für DNA Gele (Agarose oder Polyacrylamid). Da unser Green DNA Dye eine wesentlich höhere Affinität zu dsDNA hat, ist dieser Farbstoff besonders geeignet, wenn neben der zu detektierenden dsDNA noch RNA oder ssDNA vorliegen. Mit einer außergewöhnlich niedrigen Hintergrundfluoreszenz ist der Green DNA Dye ideal für die Anwendung mit Laserscannern geeignet. Außerdem ist Green DNA Dye viel sensitiver als Silberfärbung bei der Detektion von doppelsträngiger DNA in nativen Polyacrylamidgelen. Wenn sich der grüne Fluoreszenzfarbstoff ungebunden in Lösung befindet, emittiert er nur ein sehr schwaches Fluroeszenzsignal. Sobald der Green DNA Dye aber an dsDNA gebunden ist, verstärkt sich das Signal (ca. 1000-fach!), was das Fluoreszenzsignal direkt proportional zur Menge der amplifizierten dsDNA macht. Der Genaxxon Green DNA Dye wird als 100-fach Lösung in DMSO geliefert. Die Konzentration des Farbstoffs wird traditionell als Verdünnungsfaktor angegeben, wobei die 1-fach Verdünnung verwendet wird, um DNA in Gelen zu färben. Für PCR-Reaktionen sollte man mit einer 0,2-fachen Lösung beginnen, um zu optimieren und die richtige Konzentration zu ermitteln. Unsere Kunden vertrauen auf Genaxxons Green DNA Dye und nutzen den Farbstoff u.a. bei der Erforschung der Regulation von Tomur-Suppressorgenen oder der Impfungen und der Krankheitsbilder ausgelöst durch Infektionen mit Enteroviren. Herstellung einer 10-fach Arbeitslösung für die realtime PCR: Green DNA Dye eignet sich für realtime PCR in einer Endkonzentration von 0,2X (kurze Target von 50-400bp). Verdünnen Sie die 100-fache Stammlösung 1:10 mit Nuklease-freiem Wasser (Vorverdünnung) und geben Sie von dieser Lösung 0,4µL zu einer 20μL PCR-Reaktion (20µL Endvolumen). Die 10-fach Arbeitslösung muss bei -20°C gelagert und spätestens alle 2-3 Wochen erneuert werden. Green DNA dye ist ein ungefährlicher (nicht cancerogener) Fluoreszenzfarbstoff zum Anfärben von Nukleinsäuren als Alternative zu Ethidiumbromid. Sie suchen weitere nicht-toxische Farbstoffe für Ihre Gel-Elekrophorese? Dann probieren Sie doch auch SafeGel red stain oder SafeGel green stain - die kostengünstige Alternativen zu EtBr.. Für Ihre qPCR erhalten Sie bei Genaxxon auch verschiedene qPCR Mastermixe > für Ihre jeweiligen Anforderungen mit oder ohne ROX >.Hier geht es zum Formular für Ihr qPCR Mastermix Testmuster >
Diese 96-well low-profile PCR-Platten mit komplettem Rahmen sind durch die universelle Passform in allen gängigen Thermocyclern mit 0.2mL Block einsetzbar. Die PCR-Platten werden mit schwarzer Codierung mit klaren Wells angeboten. Besondere Merkmale: Optimaler Wärmetransfer durch geringe und einheitliche Wandstärken, hochwertige Rohmaterialien, präzise Reinraumfertigung, strenge Qualitätskontrollen (RNase und DNase frei). Low Profile Platten mit 150µL Arbeitsvolumen und einem kompletten Fassungsvermögen von 200µL wenn mit Sealingfolie gearbeitet wird. Die I2261 und die I2010 passen zum Beispiel in den qTower 2.0 von Analytik Jena oder den LabChip GXII Touch HT von Perkin Elmer.
ROX wird als passiver Referenzfarbstoff verwendet, um Unterschiede in der Fluoreszenz zwischen den Wells auszugleichen, die nichts mit der PCR zu tun haben, also zur Normalisierung des fluoreszierenden Reportersignals in quantitativer Realtime PCR (qPCR) oder RT-PCR. Unterschiede in der Fluoreszenz können z.B. auftreten aufgrund von Variationen in der Lichtintensität zwischen den Wells, die von der optischen Konstruktion der PCR-Maschine herrühren, oder durch Pipettierunterschiede. Die ROX Fluoreszenz ändert sich nicht im Verlauf der PCR-Reaktion, stellt aber eine stabile Basislinie dar, auf die die Proben genormt sind. Anregung und Emission des Referenzfarbstoffs liegen bei 584nm und 612nm. Die Konzentration, die verwendet wird, hängt ab vom Realtime qPCR-Instrument oder, genauer gesagt, von dem verwendeten Filter. Bei älteren Realtime qPCR-Maschinen gibt es noch keine exakt für die ROX Fluoreszenz passenden Filter. Daher werden bei diesen Maschinen hohe Konzentrationen an ROX benötigt. Einige neuere Maschinen brauchen keinerlei internen Standard, um Unterschiede in der Lichtintensität auszugleichen. Dennoch könnte ein interner Standard nützlich sein, um Variationen beim Pipettieren zu korrigieren. Dieser Referenzfarbstoff ist qualifiziert für die Verwendung auf Instrumenten wie ABI PRISM® 7700, One-Step System, RotorGene und vielen anderen. Bitte beachten Sie die Bedienungsanleitung der jeweiligen qPCR-Maschine im Hinblick auf die adäquate Menge an ROX. Ready-to-use qPCR Mastermixe mit hoher Konzentration an ROX (High ROX, 500nM), niedriger Konzentration Low ROX (50nM) oder ohne ROX stehen Ihnen bei Genaxxon zur Verfügung (qPCR >).
Klare, stark haftende adhesive Sealingfolie zum wieder abziehen. Einsetzbar, z.B. für PCR-Platten / qPCR-Platten und andere Applikationen die eine optische Durchlässigkeit des Verschlusses bedürfen, wie z. Bsp. Fluoreszenz- oder colorimetrische Messungen. Die Folie ist nicht dazu gedacht, mit einer Pipettenspitze durchstochen werden zu können. - Die Sealingfolien bestehen aus einem beständigen, transparenten Polyesterfilm mit einer durchgehenden Beschichtung mit starkem Klebstoff. - Die Seals verhindern das Vermischen einzelner Proben und verhindern gleichzeitig zuverlässig eine Verdunstung der Proben. - Die Folien sind für die normale, aber auch für die qPCR geeignet.- Die Folien können sowohl für die PCR als auch einfach zum Verschließen und Lagern von wichtigen Proben eingesetzt werden. Die Folien besitzen kleberfreie Enden auf beiden Seiten, so dass die Folien einfach angefasst und auf der PCR-Platte platziert werden können. Nach dem Entfernen verbleiben keine klebrigen Rückstände auf der PCR-Platte.
Uracil-DNA Glycosylase (UDG) auch Uracil N-Glycosylase (UNG) genannt, katalysiert die Freisetzung von Uracil aus Uracil-enthaltender DNA. Die UDG/UNG von Genaxxon ist ein hochreines, rekombinantes Enzym, isoliert aus E.coli mit der Masse von 26 kDa. UDG hydrolysiert effizient einzel- und doppelsträngige DNA, die Uracil enthält, außer bei Oligomeren mit 6 oder weniger Basen. Daher wird Uracil-DNA Glycosylase (UDG) überall dort eingesetzt, wo man das Risiko von DNA-Verschleppung (Kontaminationen) bei der PCR vermeiden muss. Damit die UDG/UNG die DNA auch hydrolysieren kann, benötigen Sie dUTP > in Ihren PCR Reaktionen. Aufbewahrungspuffer: 20mM Tris HCl (pH 8,0) 50mM NaCl 0,1mM EDTA 50% Glycerin Reaktionspuffer (1X): 20 mM Tris HCl (pH 8,0) 1 mM EDTA
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Lyo-ready qPCR Multiplex MastermixLeistungsstarke All-in-one-Lösung für die multiplexe Real-Time PCR – optimiert für hohe Sensitivität und Lyophilisierung.Dieser hochkonzentrierte 5x qPCR MasterMix wurde speziell für multiplexe Real-Time PCR-Anwendungen entwickelt. Er ermöglicht den Nachweis von bis zu 30 Targets in einer einzigen Reaktion, erlaubt die Amplifikation direkt aus Probenmaterial wie Blut oder Abstrichen (keine Extraktion erforderlich) und bietet durch die 5-fache Konzentration mehr Möglichkeiten für Primer und Sonden – ohne Einbußen bei der Sensitivität. Vollständig lyophilisierbar und damit ideal für die Kit-Herstellung, den Versand bei Raumtemperatur und die langfristige Lagerung ohne Kühlung.Wichtigste Vorteile auf einen Blick:Sensitiv – Mehr Möglichkeiten für das Wesentliche Durch die 5-fache Konzentration steht mehr Volumen für target-spezifische Primer und Sonden zur Verfügung. Perfekt für hochgradige Multiplex-Assays ohne Sensitivitätsverlust.Robust – Zuverlässige Ergebnisse bei allen Targets Der MasterMix gewährleistet eine gleichmäßige und konsistente Amplifikation – selbst in komplexen Multiplex-Panels. Schnell – Direkte PCR, keine Extraktion Funktioniert direkt mit Probenmaterial wie Blut oder Abstrichen – ohne zeitaufwändige DNA-Extraktionsschritte.Spezifisch – Präzision eingebaut Die optimierte Taq-Polymerase mit aptamerbasierter Hot-Start-Technologie verhindert unspezifische Amplifikation und sorgt für einen schnellen Start bei Raumtemperatur. Lyo Ready – Ideal für die Lyophilisierung Mit allen notwendigen Hilfsstoffen für die Gefriertrocknung formuliert. Kann bei Ihnen oder durch uns lyophilisiert werden. Nach dem Trocknen geeignet für Lagerung und Versand bei Raumtemperatur – perfekt für die Kit-Produktion und den Feldeinsatz.Application Note:Erfahren Sie mehr über die Anwendung des Produkts in der Praxis – die Application Note steht Ihnen hier zum Download bereit.Lesen Sie jetzt in unserem Blogartikel, warum der 5x qPCR Multiplex MasterMix optimal für Ihre Multiplex-qPCR ist. Weitere Realtime PCR Mastermixe passend für Ihre PCR finden Sie hier.Beispiele für Multiplexandwendungen:F. Javier Pérez-Pérez and Nancy D. Hanson, Detection of Plasmid-Mediated AmpC β-Lactamase Genes in Clinical Isolates by Using Multiplex PCR, J. Clin. Microbiol. June 2002 vol. 40 no. 6 2153-2162. doi: 10.1128/JCM.40.6.2153-2162.2002. Tamara B. Souzaa, Diego M. Lozerb, Sônia M. S. Kitagawab, Liliana C. Spanob, Neusa P. Silvac and Isabel C. A. Scaletskya, Real-Time Multiplex PCR Assay and Melting Curve Analysis for Identifying Diarrheagenic Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. March 2013 vol. 51 no. 3 1031-1033, doi: 10.1128/JCM.02478-12.
Treffen Sie eine bessere Wahl! Keine Notwendigkeit für verschiedene qPCR Master-Mixe mehr!Ein Produkt für die Verwendung mit verschiedenen Thermocyclern vereinfacht Ihren Entscheidungsprozess. Der GNX Versa qPCR Master Mix ist ein optimierter 2-fach Reaktionsmix für die Real-Time qPCR-Detektion und Quantifizierung von Ziel-DNA-Sequenzen unter Verwendung des SYBR®/FAM-Kanals der meisten Real-Time qPCR-Geräte. Er enthält unsere HotStart Taq DNA Polymerase zusammen mit einem einzigartigen passiven Referenzfarbstoff, der mit einer Vielzahl von Geräteplattformen kompatibel ist (einschließlich solcher, die ein hohes oder niedriges ROX-Referenzsignal erfordern). Dieser Farbstoff überschneidet sich spektral nicht mit Fluoreszenzfarbstoffen, die für die qPCR verwendet werden, und stört somit die Echtzeit-Detektion nicht. Der Mastermix enthält alle PCR-Komponenten, die für die Amplifikation und Quantifizierung von DNA erforderlich sind, mit Ausnahme der Primer und des DNA-Templates. Genomische DNA oder cDNA kann sowohl mit vorhandenen als auch mit kommerziellen Primern analysiert werden.Vorteile Eine Formulierung für verschiedene Plattformen Bequemes Mastermix-Format Benutzerfreundliche Protokolle zur Vereinfachung des Reaktionsaufbaus Konstante Leistung des Produkts bei einer Vielzahl von ProbenquellenDatenauswertungSYBR® Green bindet nicht-spezifisch an doppelsträngige DNA. Aus diesem Grund lässt sich am besten mit einer Schmelzkurvenanalyse überprüfen, ob eine qPCR-Reaktion mit SYBR® Green ein einzelnes Target ohne Primer-Dimer-Bildung amplifiziert hat. Die Schmelzkurvenanalyse sollte jedem qPCR-Lauf durchgeführt werden um zu überprüfen ob die PCR-Amplifikation spezifisch für ein einzelnes Amplikon war. Aufgrund der unspezifischen Bindung von SYBR® Green ist die Schmelzkurvenanalyse eine der wenigen Möglichkeiten, die zielspezifische Amplifikation zu bestätigen. Wenn das erzeugte Fluoreszenzsignal auf Primer-Dimere oder unspezifische Amplifikation zurückzuführen ist, ist die relative Quantifizierung des Targets zumindest fragwürdig. Wenn Sie also eine neue SYBR® Green PCR starten, führen Sie immer eine Schmelzkurvenanalyse als QC-Schritt durch, um die Spezifität zu bestätigen!Konsistente Leistung bei Verwendung verschiedener Instrumente und ModiHohe Leistung bei verschiedenen Genen verschiedener ArtenRobustheit gegen Auftau- und Einfrierzyklen
Green qPCR Mastermix High ROX optimiert für die qPCR (realtime) PCR in Blockcyclern, speziell von Applied Biosystems Geräten. Der Green qPCR Mastermix mit 500nM ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten chemisch modifizierten SuperHot Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix High ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff 500nM ROX optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
Green qPCR Mastermix Low ROX optimiert für die qPCR (realtime) PCR in Blocksystemen. Der Green qPCR Mastermix mit 50nM ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten chemisch modifizierten SuperHot Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP 50nM ROX interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 7500, 7500 Fast and ViiA™ 7, QuantStudio™ instruments, Agilent Mx3000P™, Mx3005P™, Mx4000™ and AriaMx. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
Green qPCR Mastermix ohne ROX optimiert für die qPCR/realtime PCR in Blockgeräten. Der Green qPCR Mastermix ohne ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten chemisch modifizierten SuperHot Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: BioRad CFX96 Touch™, CFX384 Touch™, CFX Connect™, DNA Engine Opticon® 2, Chromo4™, iCycler iQ™ and My iQ™ , Roche LightCycler® 480, LightCycler® 1536, LightCycler® Nano, LightCycler® 96 and QuantStudio™ instruments, Thermo Scientific™ PikoReal™, Cepheid SmartCycler®, Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler, Qiagen Rotor Gene Q, Rotor Gene 6000, MyGo Mini and MyGo Pro. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
GreenMasterMix FAST Blue with 500nM ROX und einem zusätzlichen blauem Farbstoff für die realtime PCR in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle PCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser GreenMasterMix FAST Blue High ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Der zusätzliche blaue Farbstoff erlaubt eine einfache Identifikation schon durchgeführter Pipettierschritte. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten HotStart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur. kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix FAST Blue mit 500nM ROX™ enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer 500nM ROX™ als passiver interner Referenzfarbstoff Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert.
GreenMasterMix FAST High ROX mit 500nM ROX für die realtime PCR in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle PCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser GreenMasterMix ohne ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten HotStart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur. kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix High ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer 500nM ROX™ als passiver interner Referenzfarbstoff Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern lieferen. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon ProbeMastermix (M3045) > sowie der analoge GreenMastermix M3023 > (= M3045 mit grünem Fluoreszenzfarbstoff) vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert. Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet.
GreenMasterMix FAST with 50nM ROX für die realtime PCR in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle PCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser GreenMasterMix ohne ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten HotStart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur. kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix Low ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 7500, 7500 Fast and ViiA™ 7, QuantStudio™ instruments, Agilent Mx3000P™, Mx3005P™, Mx4000™ and AriaMx. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
GreenMasterMix FAST ohne ROX für die realtime PCR ohne Probes in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle qPCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser GreenMasterMix ohne ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten HotStart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur. kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: BioRad CFX96 Touch™, CFX384 Touch™, CFX Connect™, DNA Engine Opticon® 2, Chromo4™, iCycler iQ™ and My iQ™ , Roche LightCycler® 480, LightCycler® 1536, LightCycler® Nano, LightCycler® 96 and QuantStudio™ instruments, Thermo Scientific™ PikoReal™, Cepheid SmartCycler®, Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler, Qiagen Rotor Gene Q, Rotor Gene 6000, MyGo Mini and MyGo Pro. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
Multiplex-PCR ist eine Methode, mit der zwei oder mehr Amplifikate gleichzeitig in einem einzigen Reaktionsgefäß / einer einzigen Reaktion amplifiziert werden können. Es ist weit verbreitet in der Genotypisierung und in verschiedenen Bereichen der DNA-Testung in Forschungs-, Forensik- und Diagnoselabors. Unser Multiplex HS Mastermix (2X) ist ein gebrauchsfertiger PCR-Mastermix der die gleichzeitige Amplifikation mehrerer PCR-Produkte erleichtert und dadurch die Entwicklung von Multiplex-PCR-Assays schnell und einfach macht. Der 2-fach Mastermix ist ein optimiertes, gebrauchsfertiges Gemisch für sondenbasierte Assays wie TaqMan®, Beacons und MGBs. Es enthält eine modifizierte HotStart Taq-DNA-Polymerase, dNTPs und MgCl2 kombiniert in einem optimierten Puffersystem für Echtzeit-PCR / qPCR-Anwendungen. Primer, Sonden und Matrizen-DNA / cDNA sind nicht enthalten. Die im Multiplex HS enthaltene HotStart Taq-Polymerase basiert auf der Standard-Taq-DNA-Polymerase von Genaxxon, die durch einen spezifischen Antikörper inaktiviert wurde. Während der ersten Denaturierungsphase wird der Antikörper denaturiert und dadurch die Taq wieder aktiviert. Das Ergebnis ist eine höhere Spezifität, eine höhere Empfindlichkeit und höhere Ausbeuten im Vergleich zu Standard-DNA-Polymerasen, wodurch dieses Enzym besonders gut für die Multiplex-PCR geeignet ist. - Amplifikation von unterschiedlichen Targets in einem einzigen PCR-Tube.- All-in-one Mastermix für das leichte multiplexen.- Hohe Spezifität, Sensitivität und Produktausbeute.- Einfaches Set-up bei Raumtemperatur. Der Multiplex HS MasterMix 2X wird in Aliqutos von 1mL angeboten. Unsere Standard Agarose LE > und speziell unsere hochauflösende Spezialagarose Agarose Tiny > sind ideal dazu geeignet die PCR-Fragmente nach der Multiplex PCR zu analysieren. Weitere realtime Mastermix /qPCR Mastermix können Sie hier > finden. Beispiele für Multiplexandwendungen: F. Javier Pérez-Pérez and Nancy D. Hanson, Detection of Plasmid-Mediated AmpC β-Lactamase Genes in Clinical Isolates by Using Multiplex PCR, J. Clin. Microbiol. June 2002 vol. 40 no. 6 2153-2162. doi: 10.1128/JCM.40.6.2153-2162.2002. Tamara B. Souzaa, Diego M. Lozerb, Sônia M. S. Kitagawab, Liliana C. Spanob, Neusa P. Silvac and Isabel C. A. Scaletskya, Real-Time Multiplex PCR Assay and Melting Curve Analysis for Identifying Diarrheagenic Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. March 2013 vol. 51 no. 3 1031-1033, doi: 10.1128/JCM.02478-12.
Probe qPCR Mastermix High ROX optimiert für die qPCR/realtime-PCR in Blocksystemen, speziell von ABI-Geräten. Der Probe qPCR Mastermix mit 500nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Multiplex PCR: Anwendungen bei Genaxxon und bei Kunden von Genaxxon haben gezeigt, dass der qPCR Probe Mastermix zum gleichzeitigen Nachweis von bis zu vier DNA-Targets in derselben PCR-Reaktion eingesetzt werden kann. Weitere Details finden Sie im Manual zum Produkt oder fragen Sie bei uns an: info@genaxxon.com Vorteile des Genaxxon ProbeMasterMix: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix high ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR oder eine Multiplex PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP 500nM ROX optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert.
Probe qPCR Mastermix Low ROX optimiert für die qPCR (realtime) PCR in Blocksystemen. Der Probe qPCR Mastermix mit 50nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Multiplex PCR: Anwendungen bei Genaxxon und bei Kunden von Genaxxon haben gezeigt, dass der qPCR Probe Mastermix zum gleichzeitigen Nachweis von bis zu vier DNA-Targets in derselben PCR-Reaktion eingesetzt werden kann. Weitere Details finden Sie im Manual zum Produkt oder fragen Sie bei uns an: info@genaxxon.com Vorteile des Genaxxon ProbeMasterMix: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP 50nM ROX optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 7500, 7500 Fast and ViiA™ 7, QuantStudio™ instruments, Agilent Mx3000P™, Mx3005P™, Mx4000™ and AriaMx. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
qPCR ProbeMastermix ohne ROX optimiert für die qPCR (realtime) PCR in Blocksystemen. Multiplex PCR: Anwendungen bei Genaxxon und bei Kunden von Genaxxon haben gezeigt, dass der qPCR Probe Mastermix zum gleichzeitigen Nachweis von bis zu vier DNA-Targets in derselben PCR-Reaktion eingesetzt werden kann. Weitere Details finden Sie im Manual zum Produkt oder fragen Sie bei uns an: info@genaxxon.com Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten chemisch modifizierten SuperHot Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: BioRad CFX96 Touch™, CFX384 Touch™, CFX Connect™, DNA Engine Opticon® 2, Chromo4™, iCycler iQ™ and My iQ™ , Roche LightCycler® 480, LightCycler® 1536, LightCycler® Nano, LightCycler® 96 and QuantStudio™ instruments, Thermo Scientific™ PikoReal™, Cepheid SmartCycler®, Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler, Qiagen Rotor Gene Q, Rotor Gene 6000, MyGo Mini and MyGo Pro. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern lieferen. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
ProbeMasterMix FAST High ROX mit 500nM ROX für die realtime PCR in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle PCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten Hotstart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix FAST High ROX mit 500nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP optimierter Reaktionspuffer 500nM ROX als interner Standardfarbstoff Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
ProbeMasterMix FAST Low ROX mit 50nM ROXfür die realtime PCR zusammen mit Probes in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle qPCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser ProbeMasterMix mit 50nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten Hotstart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix FAST Low ROX mit 50nM ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP optimierter Reaktionspuffer 50nM ROX als interner Standard Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 7500, 7500 Fast and ViiA™ 7, QuantStudio™ instruments, Agilent Mx3000P™, Mx3005P™, Mx4000™ and AriaMx. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
ProbeMasterMix FAST ohne ROX für die realtime PCR mit Probes in allen gängigen Blocksystemen. Dieser Mastermix ist auf eine schnelle qPCR mit kurzen Denaturierungszeiten und 2-Schritt PCR Protokollen ausgelegt. Unser ProbeMasterMix ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon ProbeMasterMix eingesetzten Hotstart Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur kurze anfängliche Denaturierungszeit von maximal 2 Minuten optimiert auf 2-step PCR Protokolle Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon Hotstart Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Probe qPCR Mastermix FAST ohne ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Hotstart Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Speziell geeignet für: BioRad CFX96 Touch™, CFX384 Touch™, CFX Connect™, DNA Engine Opticon® 2, Chromo4™, iCycler iQ™ and My iQ™ , Roche LightCycler® 480, LightCycler® 1536, LightCycler® Nano, LightCycler® 96 and QuantStudio™ instruments, Thermo Scientific™ PikoReal™, Cepheid SmartCycler®, Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler, Qiagen Rotor Gene Q, Rotor Gene 6000, MyGo Mini and MyGo Pro. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass die Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefern. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
SNP Pol DNA-Polymerase für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Die Variante SNP PolTaq DNA-Polymerase > besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman® Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP Pol DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher Bande Annealingtemperatur ist zu niedrig! Achtung: Die SNP Pol ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minutenreicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
Die Genaxxon SNP Pol DNA-Polymerase, die für den SNP Pol DNA-Polymerase 2X Mastermix eingesetzt wird, wurde speziell für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen, entwickelt. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Die Variante SNP PolTaq DNA-Polymerase > besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman® Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP PolTaq DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher Bande Annealingtemperatur ist zu niedrig! Achtung: Die SNP Pol ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minutenreicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
Unsere SNP PolTaq DNA-Polymerase besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman™ Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Allgemein sind die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq speziell für die für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen, entwickelt worden. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP PolTaq DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: Z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher BandeAnnealingtemperatur ist zu niedrig!Achtung: Die SNP PolTaq ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minuten reicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
Die Genaxxon SNP PolTaq DNA-Polymerase, die für den SNP PolTaq DNA-Polymerase 2X Mastermix eingesetzt wird, wurde speziell für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen, entwickelt. Die SNP PolTaq DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP PolTaq DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Die SNP PolTaq DNA-Polymerase besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Sonden wie Taqman® Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP PolTaq DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: Z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher Bande Annealingtemperatur ist zu niedrig! Achtung: Die SNP PolTaq ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minuten reicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn möglich: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640