dUTP Lösung 100mM

Oligo(dT)20 Primer sind für die Synthese von cDNA mithilfe einer reversen Transkriptase, z. B. der MMuLV (M3042) > geeignet. Der Primer hybridisiert an den poly(A)-Schwanz der mRNA. Er wird am 5´-Ende phosphoryliert, um das Klonieren der cDNA zu erleichtern. Oligo (dT) 20-Primer wurden entwickelt, um die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA in einer reversen Transkriptionsreaktion zu initiieren, wobei die Reverse Transkriptase die Reaktion vom Poly-A-Ende der mRNA startet. Oligo(dT)20 Primer können auch zur Herstellung markierter cDNA zum Screening von Mikroarrays verwendet werden. Die garantierte Liefermenge von 5OD entspricht ca. 27,2nmol, bzw. 163,7µg. Die Primer sind qualitätsgeprüft (MS), gereinigt (reversed phase HPLC), lyophilisiert und aliquotiert. Die 5 OD können in 271,5µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. 600ng/µL. 272µL (100µM / 600ng/µL) ergeben zwischen 325 und bis zu 645 reverse Transkriptionsreaktionen von 20µL (250ng bis 500ng Oligo (dT)20 pro 1µg RNA in 20µL Reaktionsvolumen). Eine Mischung (1:1 Ratio) von random Hexamerprimern (M3038) > und Oligo(dT)-Primer kann die Sensitivität der cDNA-Synthese erhöhen, indem speziell die Synthese von längeren cDNA-Stücken verstärkt wird. Applikationen: cDNA Synthese aus Gesamt-RNA mittels reverser Transkription. optimal zur Erstellung von cDNA-Banken aus eukaryotischer mRNA geeignet. Full length cDNA Klonierung 3’ rapid amplification of cDNA ends (3’ RACE) Herstellung markierter cDNA zum screening von Microarrays.

Random Hexamere sind kurze Oligodeoxyribonukleotide der zufälligen Sequenz [d(N)6]. Die Primer sind qualitätskontrolliert (MS), gereinigt (HPLC), lyophilisiert und zu einer garantierten Menge von 5OD (ca. 76,1nmol (136,4µg)) aliquotiert. Hexanukleotid-Primer bestehen aus einer Mischung von zufälligen 5'-Hydroxylhexanukleotiden oder Hexameren. Die Primer binden an zufällig komplementäre Bereiche auf einer Ziel-DNA oder -RNA und dienen dann als Primer für die DNA-Synthese mittels einer DNA Polymerase oder Reversen Transkriptase zur reversen Transkription. Die heterogene Natur der Random Primer stellt sicher, dass alle theoretisch möglichen Sequenzen im gelieferten Produkt enthalten sind. Dadurch sind diese Primer gut dazu geeignet, ein möglichst langes (vollständiges) Transkript der RNA zu erstellen, bzw. vor allem bei langen RNA-Templates auch die 5'-Enden zu transkripieren. Als Alternative können auch Oligo(dT)-Primer > für die reverse Transkription benutzt werden. Diese binden an den polyA-Schwanz von RNA, womit die Transkription auf jeden Fall immer am 3'-Ende der RNA beginnt. Die garantierte Liefermenge von 5OD, entsprechend ca. 76,1nmol, bzw. 136,4µg, können in 760µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. ca. 180µg/µL. Wenn man zwischen 50ng und 250ng der Hexamere pro 20µL RT-Reaktion einsetzt, reichen 760μL (100μM) für 460 bis 2280 reverse Transkriptase Reaktionen.

The Genaxxon RNase Inhibitor is a recombinant (E.coli) murine protein which inhibits ribonucleases (RNases) A, B and C. It does not inhibit RNase 1, RNase H, RNase T1, S1 Nuclease. Native RNase-Inhibitor from murine placenta exerts its inhibitory effect by binding non-covalently to RNases in a 1:1 ratio with high affinity. There is no inhibition of polymerase activity when this RNase Inhibitor is used with AMV Reverse Transcriptase, M-MuLV Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase or Phage RNA Polymerase (SP6, T7, or T3).The enzyme is active over a broad pH range between 5 and 9, with a maximum activity at pH7 – pH8. The inhibition of RNases is a reversible process. Reagents as urea or thiol reagents will lead to the dissociation of the Inhibitor-RNase-complex, resulting in re-natured and functional RNase and irreversibly deactivated RNase inhibitor.Applications: RT-PCRcDNA synthesisIn vitro transcription/translationEnzymatic RNA labelling reactionsIn vitro virus detection. Improvement of RNA translation in homologous systems.Preparations of RNase-free antibodies. Any application where eukaryotic RNase contamination is a potential problem.  Advantages:  The recombinant murine RNase inhibitor does not contain the cysteine pair that was identified to cause the high sensitivity against oxidation resulting in the inactivation of the human RNase inhibitor (1). As a result, the murine RNase inhibitor has significantly improved oxidation resistance compared to the human and porcine RNase inhibitors. In addition, murine RNase inhibitor is much more stable at low low DTT concentrations (less than 1 mM), what makes it ideal for reactions where high DTT concentrations interfere with the reaction (e.g. real-time RT-PCR). Product does not contain glycerol => lyo-ready product (ready for preparations of freeze-dried products).Recommendations: Since the RNase inhibitor protein is sensitive to denaturing agents and conditions, whereas RNases are not, care must be taken to avoid high concentrations of urea or other denaturing agents and temperatures above 50-55°C. The recommended concentration of the RNase inhibitor is 1 unit/µL. During set-up of a reaction, RNase inhibitor should be added before other components are added (enzymes, plasmids from mini preps, etc.).References1. Kim, B.M. et al. Protein Science. 8, 430-434.

Die Genaxxon bioscience M-MuLV Reverse Transkriptase, codiert durch den Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV RT) und in E.coli exprimiert ist eine RNA-abhängige DNA Polymerase ohne RNase H Aktivität. Das Enzym synthetisiert den cDNA Erststrang von einem RNA Template an das ein entsprechender Primer gebunden hat. M-MuLV RT wird aber auch Primer verlängern die an Einzelstrand-DNA gebunden haben! Es ist daher darauf zu achten, dass bei der cDNA-Synthese keine DNA mehr vorhanden ist. Das Enzym kann für die Synthese von cDNA von 100 bp bis zu 10 kb Länge benutzt werden. Die Synthese von Zweitstrang-cDNA kann mit einigen RNA Termplates erzielt werden, ohne dass eine weitere Polymerase hinzu gegeben werden muss. Von Genaxxon gibt es das Enzym HotScriptase (M3056) > oder den HotScriptase master mix (M3062 >; M3064 >) mit dem direkt, ohne den zeitaufwendigen isothermalen Transkriptionsschrit, doppelsträngige DNA synthetisiert wird: Zeitersparnis: bis zu 50%. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.