Genaxx1Step RT-qPCR COVID-19 CDC Probe Assay Kit

Random Hexamere sind kurze Oligodeoxyribonukleotide der zufälligen Sequenz [d(N)6]. Die Primer sind qualitätskontrolliert (MS), gereinigt (HPLC), lyophilisiert und zu einer garantierten Menge von 5OD (ca. 76,1nmol (136,4µg)) aliquotiert. Hexanukleotid-Primer bestehen aus einer Mischung von zufälligen 5'-Hydroxylhexanukleotiden oder Hexameren. Die Primer binden an zufällig komplementäre Bereiche auf einer Ziel-DNA oder -RNA und dienen dann als Primer für die DNA-Synthese mittels einer DNA Polymerase oder Reversen Transkriptase zur reversen Transkription. Die heterogene Natur der Random Primer stellt sicher, dass alle theoretisch möglichen Sequenzen im gelieferten Produkt enthalten sind. Dadurch sind diese Primer gut dazu geeignet, ein möglichst langes (vollständiges) Transkript der RNA zu erstellen, bzw. vor allem bei langen RNA-Templates auch die 5'-Enden zu transkripieren. Als Alternative können auch Oligo(dT)-Primer > für die reverse Transkription benutzt werden. Diese binden an den polyA-Schwanz von RNA, womit die Transkription auf jeden Fall immer am 3'-Ende der RNA beginnt. Die garantierte Liefermenge von 5OD, entsprechend ca. 76,1nmol, bzw. 136,4µg, können in 760µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. ca. 180µg/µL. Wenn man zwischen 50ng und 250ng der Hexamere pro 20µL RT-Reaktion einsetzt, reichen 760μL (100μM) für 460 bis 2280 reverse Transkriptase Reaktionen.

DNase I ist eine Endonuklease aus Rinderpankreas, die Doppel- und Einzelstrang-DNA in Oligo- und Mononukleotide hydrolisiert. BeschreibungDNAse I wird unter anderem dazu verwendet unerwünschte Verklumpung bei der Gewebedisaggregation zu vermeiden, die eine Dispersion einzelner Zellen erschwert. Da die Disaggregation von Gewebe und die nachfolgende Isolierung einzelner Zellen immer mit der Ruptur und Lyse einiger Zellen einhergeht, wird DNA aus diesen Zellen in das umgebende Medium abgegeben. Die freigesetzte DNA im Medium wird für die unerwünschte Zellverklumpung bei Gewebedissoziationsverfahren verantwortlich gemacht. Dieser Verklumpungseffekt kann durch Zugabe von Desoxyribonuklease (DNase) zum Dissoziationsmedium vermieden werden und wurde für eine Vielzahl von verschiedenen Zell- und Gewebetypen beschrieben. DNase kann auch eingesetzt werden, um, vor wichtigen Experimenten (wie RT-PCR), DNA aus RNA-Präparationen zu entfernen. Da keine Reinigungsmethode für RNA zu 100% die DNA entfernt, ist es angeraten, vor jeder RT-PCR, die DNA mittels DNAse I zu entfernen. Ein einfacher 15-minütiger Verdau bei Raumtemperatur beseitigt zuverlässig alle kontaminierende DNA. DNase I wird inaktiviert, indem man die Stopplösung zugibt und erhitzt. Da Hitze auch die RNA denaturiert, kann der Ansatz dann sofort für die reverse Transkription benutzt werden. Diese DNAse I aus Rinderpankreas ist nicht RNase frei und muss vor Einsatz für die Isolation von RNA entsprechend chemisch behandelt werden.

Steriles, destilliertes Wasser, das frei von DNasen, RNasen und Proteinasen ist. Zusätzlich wurde das Wasser mit DEPC behandelt, um ganz sicher zu gehen, dass keine Spuren an RNase vorhanden sind. Aus diesem Grund ist dieses Wasser speziell für RT-PCR oder andere molekularbiologische Anwendungen geeignet, bei denen RNasen zu 100% entfernt sein müssen. Genaxxon bietet daher verschiedene Nuklease-freie Wasserqualitäten an: steriles, Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltes Wasser (M6082 >) und Nuklease-freies Wasser (nicht DEPC-behandelt) (M6340 >). Unser Nuklease-freies Wasser wird in nukleasefreien PE-Behältern, oder in Glasflaschen abgefüllt.

Oligo(dT)20 Primer sind für die Synthese von cDNA mithilfe einer reversen Transkriptase, z. B. der MMuLV (M3042) > geeignet. Der Primer hybridisiert an den poly(A)-Schwanz der mRNA. Er wird am 5´-Ende phosphoryliert, um das Klonieren der cDNA zu erleichtern. Oligo (dT) 20-Primer wurden entwickelt, um die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA in einer reversen Transkriptionsreaktion zu initiieren, wobei die Reverse Transkriptase die Reaktion vom Poly-A-Ende der mRNA startet. Oligo(dT)20 Primer können auch zur Herstellung markierter cDNA zum Screening von Mikroarrays verwendet werden. Die garantierte Liefermenge von 5OD entspricht ca. 27,2nmol, bzw. 163,7µg. Die Primer sind qualitätsgeprüft (MS), gereinigt (reversed phase HPLC), lyophilisiert und aliquotiert. Die 5 OD können in 271,5µL DEPC-Wasser gelöst werden und ergeben dann eine Konzentration von 100pmol/μL (100μM), bzw. 600ng/µL. 272µL (100µM / 600ng/µL) ergeben zwischen 325 und bis zu 645 reverse Transkriptionsreaktionen von 20µL (250ng bis 500ng Oligo (dT)20 pro 1µg RNA in 20µL Reaktionsvolumen). Eine Mischung (1:1 Ratio) von random Hexamerprimern (M3038) > und Oligo(dT)-Primer kann die Sensitivität der cDNA-Synthese erhöhen, indem speziell die Synthese von längeren cDNA-Stücken verstärkt wird. Applikationen: cDNA Synthese aus Gesamt-RNA mittels reverser Transkription. optimal zur Erstellung von cDNA-Banken aus eukaryotischer mRNA geeignet. Full length cDNA Klonierung 3’ rapid amplification of cDNA ends (3’ RACE) Herstellung markierter cDNA zum screening von Microarrays.

Total RNA Purification und Extraction Kit für die schnelle und effiziente Isolation von qualitativ hochwertiger RNA aus 1-30mg Gewebe (frisch oder gefroren) oder bis zu 25mg in Paraffin eingebettetes Gewebe. Das Protokoll für die Isolation und die Pufferformulierungen wurden für hohe Effizienz und Reinheit der RNA optimiert. Der Total RNA Purification Kit verwendet Mini Spin Säulchen mit Membranen, die effizient und selektiv Nukleinsäuren bei hoher Konzentration an chaotropen Salzen binden. Das Verfahren der Isolation mit dem Total RNA Purification Kit besteht aus 6 Schritten. Im Extraktionsschritt wird das Gewebe homogenisiert, um interzelluläre Bindungen (Epithelgewebe) abzubauen und hochmolekulare Proteine ​​(Muskel oder Bindegewebe) zu fragmentieren. Im nächsten Schritt wird das Homogenat mit Guanidinthiocyanat und Detergentien lysiert. Jegliche RNasen werden mit Guanidinthiocyanat und β-Mercaptoethanol inaktiviert. Der dreistufige Waschschritt entfernt effektiv Verunreinigungen und Enzyminhibitoren. Mit Hilfe eines Puffers mit geringer Ionenstärke oder mit RNase-freiem Wasser wird die gereinigte RNA eluiert und kann direkt in nachgeschalteten Anwendungen, wie beispielsweise as RT-PCR, RT-qPCR, Northern blotting, cDNA synthesis, primer extension, RT-PCR, RNA sequencing, micro arrays, usw. verwendet werden. Weitere RNA-Reinigungskits > oder Zubehör wie z.B. Ceramic Beads >. Mit unerer HotScriptase RT Polymerase > können Sie RNA schnell und einfach mittels PCR direkt in DNA umschreiben und amplifizieren. Sie benötigen hierzu keine reverse Transkriptase und auch keinen reversen Transkriptionsschritt.  Hier finden Sie weitere Reinigungskits > von Genaxxon.