Ribonuclease A (RNase A) - DNase free

ÜberblickProteinase K ist eine robuste und vielseitige Serinprotease, die in der Molekularbiologie häufig für den Verdau von Proteinen in Nukleinsäurepräparaten verwendet wird. Diese Lösung in einer Konzentration von 20 mg/mL ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich der Vorbereitung von DNA- und RNA-Proben. Die PCR-Qualität stellt sicher, dass das Enzym frei von Verunreinigungen ist, die nachgeschaltete Anwendungen beeinträchtigen könnten, so dass es sich hervorragend für empfindliche Techniken wie die PCR eignet.Produkt-Detailsready-to-useKonzentration: 20 mg/mLAktiv über einen weiteren Bereich von Reaktionsbedingungen.Eine Erhöhung der Reaktionstemperatur von 37°C auf 50 - 60°C kann die Aktivität um ein Vielfaches erhöhen.QualitätPCR-Qualität, die eine hohe Reinheit und keine Interferenz mit PCR-Reaktionen gewährleistet.AnwendungenGeeignet für die DNA- und RNA-ExtraktionEntfernung von ProteinverunreinigungenVorbereitung von Proben für verschiedene molekularbiologische Techniken. VorteileHohe Reinheit: Die PCR-Qualität garantiert minimale Verunreinigungen und sorgt für zuverlässige Ergebnisse bei empfindlichen Anwendungen. Vielseitig einsetzbar: Ideal für verschiedene molekularbiologische Verfahren, einschließlich der Probenvorbereitung für die PCR.Einfache Anwendung: Gebrauchsfertige Lösung in optimaler Konzentration für eine einfache Anwendung.Zusätzliche BemerkungenDie empfohlene Arbeitskonzentration von Proteinase K beträgt 0,05 bis 1 mg/mL. Die Aktivität des Enzyms wird durch 0,2 bis 1 % SDS und auch durch 1 bis 4 M Harnstoff stimuliert.Ca2+ schützt Proteinase K vor Autolyse und erhöht die thermische StabilitätStabil über einen weiten pH-Bereich: 4,0 bis 12,5, optimaler pH-Wert 7,5 bis 8,0Aktivitätsoptimum: 50°C bis 55°CBei Temperaturen über 65°C tritt eine schnelle Denaturierung des Enzyms ein. MerkmaleKeine nachgewiesene Exonuklease-, Endonuklease- oder RNase-Aktivität Spezifische Aktivität: ≥40 units/mg proteinAktivität: ≥30 units/mgLöslichkeit: ≥20 mg/mLDNA-Gehalt ≤10 pg/mLVersandbedingungen: wird gekühlt verschicktInhibitoren von Proteinase KWelche Substanzen können Proteinase K inhibiieren? Proteinase K kann von einer Vielzahl Substanzen inhibitiert werden. Hierzu gehörten "denaturierende Substanzen", Detergenzien aber auch Proteinase inhibitoren. Die Empfindlichkeit gegenüber den Inhibitoren hängt dabei stark von der jeweiligen Anwendung ab (genauer pH, Konzentration, Temperatur). Häufig in der Biochemie und der Molekularbiologie eingesetzte Inhibitoren sind: SDS: High concentrations of SDS can denature and inactivate proteinase K.EDTA: EDTA is a chelating agent that can bind to metal ions that are essential for proteinase K activity. Harnstoff: Hohe Konzentrationen an Harnstoff können Proteinase K denaturieren und dadurch inaktivieren.Detergenzien: Einige Detergenzien, wie z.B. Triton X-100 oder Tween® 20 können Proteinase K, besondersn, wenn die Detergenzien in hohen Konzentrationen vorliegen, inhibieren.Protease-Inhibitoren: Protease-Inhibitoren, wie Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF), können Proteinase K irreversibel inhibieren.Chaotrope Salze: Abhängig vom DNA-Extratkionsprotokoll kann die Anwesenheit chaotroper Salze, oder Detergenzien, die Proteinase K Aktivität erhöhen. Es kann aber auch sein, dass dieselben Reagenzien die Proteinase K Aktivität inhibieren.Proteinase K kann von Genaxxon als Pulver (M3036 >) oder als 20mg/mL Lösung (M3037 >) bezogen werden.Hergestellt von der Genaxxon bioscience GmbH, die 2002 von Dr. Norbert Tröndle gegründet wurde, um zuverlässige Produkte für PCR und kundenspezifische Zellkulturmedienformulierungen anzubieten, bietet die Proteinase K Solution 20 mg/mL eine zuverlässige und effiziente Lösung für Ihre molekularbiologischen Anforderungen. Erzielen Sie konsistente, hochwertige Ergebnisse mit einem Enzym, das speziell für Ihre Anforderungen entwickelt wurde.

Ribonuklease A ist eine Endo-Ribonuklease, die spezifisch Einzelstrang-RNA am 3'-Ende von Pyrimidinbasen (Cytosin und Uracil) schneidet. RNAse A wird benutzt, um RNA-freie DNA zu erhalten und um nichthybridisierte RNA-DNA Hybride zu hydrolisieren. Das pH-Optimum von RNAse A liegt zwischen 7,0 und 7,5. RNAse A wird durch Diethylpyrocarbonate (DEPC) >, Guanidiniumsalz (4 M Guanidiniumthiocyanat), beta-Mercaptoethanol, Schwermetalle, Vanadylkomplexe, RNAse-Inhibitor inhibiert. RNAse A spaltet Einzel- und Doppelstrang RNA und RNA in RNA:DNA Komplexen bei niedriger Salzkonzentration (100 mM NaCl). Bei hohen Salzkonzentrationen (>300 mM NaCl) spaltet das Enzym nur noch Einzelstrang RNA. Das Enzym kann durch Proteinase K-Verdau und anschließende Phenolextraktion entfernt werden. Eliminierung von potentieller DNAse-Aktivität: Produkt S5231 (RNAse A (nicht zertifiziert DNAse-frei)) kann DNAse-Aktivität beinhalten. Da jedoch RNAse A hitzestabil ist empfehlen wir eventuelle DNAse-Aktivität durch Hitzeinaktivierung zu entfernen. Prozedur: 10mg/mL RNAse A gelöst in 0,01 Natriumacetat (pH5.2) werden 15 Minuten lang bei 100°C for 15 im Wasserbad inkubiert. Anschließend verbleibt der Ansatz im Wasserbad, während dieses auf Raumtemperatur abkühlt. Der pH-Wert der Lösung kann durch Zugabe des 0,1-fachen Volumens an 1M Tris-HCl (pH7,4) angepasst werden. Nach dem aliquotieren, der nun DNAse-freien RNAse A, sollten alle Aliquote bei -20°C gelagert werden. ACHTUNG: RNAse A präzipitiert wenn konzentrierte Lösungen bei neutralem pH-Wert auf 100°C erhitzt werden! Stock solution: Stammlösungen können im Konzentrationsbereich von 1 - 10mg/mL in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 15mM NaCl oder in 10mM Tris/HCl, pH7.5; 1mM EDTA, pH8.0 (TE-Puffer) hergestellt werden. Die empfohlene Arbeitskonzentration ist 10µg/mL (für die Entfernung von RNA aus Plasmidpräparationen; 1 hr, RT) oder 100ng/mL (bei der Präparation von 'blunt ends' bei doppelsträngiger cDNA). Stabilität: RNase A aggregiert während der Lyophilisation und Lagerung. Das Protein hat eine hohe Affinität zu Glassoberflächen, was bei der Herstellung von Lösungen berücksichtigt werden sollte. Bei neutralem pH (z.B. in PBS pH 7.4) und hohen Konzentrationen (>10mg/mL) wird RNase A präzipitieren. Bei +2°C to +8°C (lyophilisiert) ist RNase A für mehrere Jahre stabil (Lagerung im Trockenen). In Lösung (-20°C) ebenfalls für mehrere Jahre und bei +2°C to +8°C für einige Wochen.