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Produktinformationen "SuperHot Taq PCR Kit mit dNTP-Mix für HotStart PCR"
Hotstart Polymerase Kit mit dNTP Mix für schwierige Templates, qPCR und Multiplex Applikationen: Diese Taq DNA Super Hotstart Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der thermostabilen Taq Polymerase, die durch Hitze aktiviert wird. Die chemische Modifikation inhibiert die Taq Hotstart Polymerase bei niedrigen Temperaturen, so dass es nicht zur Amplifikation von Primer-Dimeren und anderen Artefakten kommen kann. Dadurch wird vor allem die Spezifität, aber auch die Sensitivität gegenüber der normalen Taq extrem verbessert. Da man mit der SuperHot Taq Polymerase auch für längere Zeit bei 95°C denaturieren kann, ist es möglich, auch schwierige Templates mit z.B. hohem GC-Gehalt ohne Probleme zu amplifizieren. Durch die erhöhte Sensitivität werden auch die Ergebnisse bei Multiplex Applikationen besser. Ideal für qPCR Anwendungen geeignet.
Super Hotstart Polymerase Kit mit dNTPs:
- chemisch modifizierte Hotstart Polymerase
- erhöhte Spezifität
- erhöhte Sensitivität
- für schwierige Templates mit hohem GC-Gehalt geeignet
- für Multiplexapplikationen empfohlen
- für qPCR geeignet
- mit dNTP Mix
Der Genaxxon SuperHot Taq Kit beinhaltet die SuperHot Taq Polymerase von Genaxxon, Puffer E und separates MgCl2 sowie genügend 10mM dNTP Mix für 500, bzw. 2000 x 25µL PCR Reaktionen (0,5 units Taq pro Reaktion). Alle Bestandteile werden in separaten Tubes geliefert.
Beachten Sie auch unseren SuperHot Hotstart Mastermix > mit und ohne Farbstoff.
Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) >, als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.
Specifications:
HotStart Taq polymerasee with 5 units/µL. Kit contains also 100µL of a 10mM dNTP mix.
Enyzme is completely inactive prior to heating at 95°C for at least 10 min.!
Applikation:
For Real-time PCR, for PCR of low amount of DNA (very low copy number).Einheiten:
One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.Quelle:
recombinantKlassifizierungen:
Dokumente:
SicherheitsdatenblätterProtokolle
Zertifikate
Produktbeschreibung
Allg. Daten 3
Kategorienliste
Für jedes Template / Primer-Paar müssen die optimalen Reaktionsbedingungen empirisch evaluiert werden, indem man z.B. Verhältnis von Primer zu Template ändert oder die Ionenstärke (mit MgSO4) sowie Zyklusparameter (Zeit und Temperaturen).
DNA Template
- Verwenden Sie nur qualitativ hochwertige DNA-Templates
- Ungefähr 10E4 Kopien an Ziel-DNA werden benötigt, um nach 25-30 Zyklen ein detektierbares Produkt zu erhalten.
- Benutzen Sie 1pg–1ng Plasmid-DNA oder virale DNA.
- Benutzen Sie 1ng–1µg bei genomischer DNA.
- Höhere DNA-Konzentrationen vermindern die Ampliconspezifität und ergeben z.B. Extrabanden, besonders wenn eine hohe Zyklenzahl eingesetzt wird.
- Höhere DNA-Konzentrationen können eingesetzt werden, wenn kleinere Zyklenzahlen erwünscht sind, um z.B. die Spezifität zu erhöhen.
Primer
- Generell sollten diese 20-30 Nukleotide in der Länge besitzen.
- Der ideale GC-Gehalt liegt bei 40-60%.
- Die GC-Basen sollten möglichst gleichmäßig über den/die Primer verteilt sein.
- Die Schmelztemperaturen beider Primer eines Primerpaares sollten nicht mehr als 5°C voneinander abweichen.
- Vermeiden Sie Sekundärstrukturen (z.B. Hairpins) innerhalb der Primer und der potentiellen Dimerisationsbereiche zwischen den verwendeten Primerpaaren.
- Wenn gentechnisch veränderte Stellen (side directed mutagenesis) in die Primer eingebaut werden, dann ist es besser, wenn 5' von der side direkted mutagenesis Stelle noch 4-6 Extrabasen eingebaut werden, damit der Primer auch an der richtigen Stelle annealen kann.
- Die Endkonzentration von jedem Primer sollte zwischen 0,05-1 µM liegen (0,05 µM ist die unterste Grenze), typische Werte liegen zwischen 0,1 und 0,5 µM.
- Höhere Konzentrationen können eine erhöhte Primerdimerisierung zur Folge haben und falsche Amplifikationsprodukte "generieren" bzw. vortäuschen.
- Bei Primern und Sonden kann man davon ausgehen, dass mit zunehmender Primermenge natürlich zunächst auch die PCR besser läuft (meistens ist zunächst ein früherer Ct-Wert zu erwarten). Mit weiter zunehmender Konzentration ist die PCR aber gesättigt. Neben einem etwas niedrigeren Ct-Wert wird anfänglich bei höherer Primer/Sondenkonzentration meistens auch das Fluoreszenzsignal verstärkt.
-
Dazu kommen dann ggf. eine oder mehrere Sonden (hierbei sollte die notwendige Konzentration immer gut ausgetestet werden). Wir empfehlen zwischen 50-500 nM. In diesem Bereich sollten verschiedene Kombinationen ausgetestet werden.
Magnesiumkonzentration
- 1,5-2,0 mM Mg2+ sind optimal für die Wirkung der Taq DNA Polymerase, jedoch hängt die optimale Mg2+ Konzentration sehr stark vom Template, der Pufferzusammensetzung, der Menge an DNA und auch an dNTPs ab, da vor allem die beiden letzteren eine hohe Tendenz haben, Magnesium zu chelatieren und damit der PCR-Reaktion zu entziehen.
- Wenn [Mg2+] zu niedrig ist: Kein PCR-Produkt sichtbar.
- Wenn [Mg2+] zu hoch ist: unerwünschte/falsche PCR-Produkte sind sichtbar. Eventuell ist nur noch ein Schmier zu sehen.
- Die typische Konzentration beträgt 200 µM von jedem einzelnen dNTP. Grundsätzlich sind 200-400 µM an dNTPs aber eine gute Konzentration für die PCR.
- Eine niedrigere Konzentration von 50-100 µM erhöht die Spezifität, reduziert aber die Ausbeute zum Teil deutlich.
- Eine höhere Konzentration erhöht zwar die Ausbeute besonders bei langen Amplicons, reduziert aber die Spezifität deutlich.
DNA-Polymerase
- Die Wahl der richigen Polymerase ist u.a. abhängig vom Verwendungszweck sowie vom eingesetzten Template (Standard-PCR: Taq DNA Polymerase S > mit hoher Genauigkeit, Taq Polymerase E > mit hoher Ausbeute; Mastermixe: Standard PCR Mastermix > oder RedMasterMix > mit rotem Farbstoff).
- Für die Multiplex PCR gibt es spezielle lyophilisierte Multiplex Mastermixe >.
- Zur Steigerung der Spezifität oder bei schwierigen Templates werden Hot Start Anwendungen empfohlen. Hierfür gibt es spezielle Hot Start Polymerasen >.
- Für PCRs für Klonierungen oder andere Verfahren, die eine geringe Fehlerquote erfordern, gibt es thermostabile High Fidelity Proofreading Polymerasen wie
Pfunds >, ExactRun >, ReproFast > oder ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase >. Diese Enzyme machen weit weniger Fehler während der Amplifikation und erhöhen die Chancen auf ein fehlerfreies Amplicon. - Für Genotypisierungen und andere Anwendungen, bei denen eine hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird, gibt es eine neue hochselektive DNA Polymerase, SNP Pol DNA Polymerase >. Sie unterscheidet fehlgepaarte Primer-Template Komplexe spezifisch und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren.
- Für die Real Time Quantitative PCR > gibt es hochspezialisierte qPCR Mastermixe. Hier kommt es bei der Wahl des richtigen Mastermixes auf das verwendete qPCR-Gerät an. So ist darauf zu achten, ob und wieviel ROX im qPCR Mastermix enthalten sein sollte und ob es eher ein Green qPCR Mastermix mit grünem Fluoreszenzfarbstoff > oder ein Probe qPCR Mastermix > ohne Fluoreszenzfarbstoff sein muss. Diesen gibt es auch lyophilisiert bei Raumtemperatur stabil in Beads (LyoBalls >).
- Die Menge an eingesetzter DNA-Polymerase in der PCR-Reaktion kann das PCR-Ergebnis signifikant beeinflussen (verwenden Sie 1,25 - 1,5 units Taq-Polymerase > für einen 50µL-Ansatz).
Annealing
- Die Annealingtemperatur sollte mit einem Temperaturgradienten optimiert werden. Auch die Annealingzeit hat einen Einfluss auf das Gelingen. Es gilt, dass der Einsatz eines anderen Mastermixes oder der Einsatz eines Reaktionspuffers eines anderen Anbieters einen gravierenden Einfluß auf die Annealingtemperatur haben kann.
- Die Schmelztemperaturen beider Primer eines Primerpaares sollten nicht mehr als 5°C voneinander abweichen.
- Typische Annealingtemperaturen liegen ca. 5°C unterhalb des niedrigsten Tm der eingesetzten Primer. Oft fallen die Temperaturen in den Bereich von 50-60°C.
- Höhere Annealingtemperaturen sollten getestet werden, wenn es zu unspezifischen Banden oder einem Schmier kommt.
- Typsiche Annealingzeiten liegen im Bereich von 15-30 Sekunden.
Extensionstemperatur und -zeiten
- Die Amplicon-Verlängerung wird normalerweise bei 68°C durchgeführt.
- Als allgemeine Regel kann man bei Standard Taq-Polymerasen pro 1000 Basenpaaren von 1 Minute Extensionszeit bei 68°C ausgehen (oder 2 Minuten für 2000 Basenpaare, bzw. 3 Minuten für 3000 Basenpaare).
- Für PCR-Produkte, die kleiner als 1 kb sind, können 45-60 Sekunden genommen werden (eher 45 Sekunden, wenn es sich nicht um ein Amplicon nahe 1 kb handelt).
- Sowohl bei PCR-Produkten, die länger als 3000 Basenpaare sind, als auch bei PCR-Protokollen, die mehr als 30 Zyklen haben, ist es wahrscheinlich, dass längere Extenstionszeiten benötigt werden. Daher sollte bei längeren Amplicons oder bei höheren Zyklenzahlen nochmals optimiert werden.
Die Amplifikation von Templates mit hohem GC-Gehalt, starken Sekundärstrukturen, niedrigen Konzentrationen oder Amplicons größer 5 kb benötigen sehr oft eine Optimierung der PCR-Bedingungen. Typischerweise sollten 15-30 Sekunden Denaturierung bei 95°C während der PCR durchgeführt werden.
Quelle: NCBI PubMed
Hier finden Sie Artikel und Literaturzitate, in denen die Autoren auf die hohe Qualität dieses Genaxxonprodukts vertrauen.
Listed below are articles and references, in which the authors trust in the high quality of this Genaxxon product.
Detection and Quantification of Milk Ingredients as Hidden Allergens in Meat Products by a Novel Specific Real-Time PCR Method
Caterina Villa, Joana Costa, Isabel Mafra
Biomolecules. 2019 Dec; 9(12): 804. Published online 2019 Nov 29. doi: 10.3390/biom9120804
PMCID: PMC6995640
Somatic Mutations in Exocrine Pancreatic Tumors: Association with Patient Survival
P. Sivaramakrishna Rachakonda, Andrea S. Bauer, Huaping Xie, Daniele Campa, Cosmeri Rizzato, Federico Canzian, Stefania Beghelli, William Greenhalf, Eithne Costello, Michaela Schanne, Anette Heller, Aldo Scarpa, John P. Neoptolemos, Jens Werner, Markus Büchler, Jörg D. Hoheisel, Kari Hemminki, Nathalia Giese, Rajiv Kumar
PLoS One. 2013; 8(4): e60870. Published online 2013 Apr 2. doi: 10.1371/journal.pone.0060870
PMCID: PMC3614935
The Arabidopsis thaliana response regulator ARR22 is a putative AHP phospho-histidine phosphatase expressed in the chalaza of developing seeds
Jakub Horák, Christopher Grefen, Kenneth W Berendzen, Achim Hahn, York-Dieter Stierhof, Bettina Stadelhofer, Mark Stahl, Csaba Koncz, Klaus Harter
BMC Plant Biol. 2008; 8: 77. Published online 2008 Jul 15. doi: 10.1186/1471-2229-8-77
PMCID: PMC2478664
The Histidine Kinase AHK5 Integrates Endogenous and Environmental Signals in Arabidopsis Guard Cells
Radhika Desikan, Jakub Horák, Christina Chaban, Virtudes Mira-Rodado, Janika Witthöft, Kirstin Elgass, Christopher Grefen, Man-Kim Cheung, Alfred J. Meixner, Richard Hooley, Steven John Neill, John Travers Hancock, Klaus Harter
PLoS ONE. 2008; 3(6): e2491. Published online 2008 Jun 18. doi: 10.1371/journal.pone.0002491
PMCID: PMC2424244
Accessory Items
Der Genaxxon GenLadder 100 bp Plus with loading dye ist ideal dafür geeignet die Größe doppelsträngiger DNA zwischen 100 und 1500 Basenpaaren zu bestimmen. Durch die zusätzlichen Banden bei 1.5kbp und 3.0kbp können auch zusätzlich DNA-Größen in diesem Bereich zugeordnet werden, ohne einen zusätzliche 1kbp DNA-Marker einsetzen zu müssen. Die Genladder 100 bp Plus besteht aus 12 Fragmenten in den Größen zwischen 100 - 1000bp im Abstand von 100bp. Zusätzlich gibt es bei 1500bp und 3000bp weitere Banden. Das 500bp und das 1500bp Fragment zeigen eine stärkere Intensität, um eine leichtere Identifizierung zu ermöglichen. Alle Fragmente sind 'blunt-ended'. Die Fragmentgrößen (in Basenpaaren) sind 3000 bp (40ng/5µL), 2x 1500 bp (70ng/5µL), 1000 bp (50ng/5µL), 900 bp (40ng/5µL), 800 bp (40ng/5µL), 700 bp (30ng/5µL), 600 bp (30ng/5µL), 2x 500 bp (90ng/5µL), 400 bp (40ng/5µL), 300 bp (30ng/5µL), 200 bp (40ng/5µL), 100 bp (40ng/5µL). Der DNA-Marker ist in einem ready-to-use Puffer gelöst der Orange G und Xylenecyanol FF als Tracking dyes enthält. Die Gesamtkonzentration der enthaltenen DNA beträgt 0,1µg/µL (108µg/mL). Die empfohlene Menge Marker pro Gelspur liegt bei 0,5μg (5µL). Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Agarose LE ist eine Standardagarose zur Trennung von DNA im Größenbereich zwischen 100bp und 25kbp. Sie besitzt einen sehr niedrigen EEO-Wert und zeichnet sich durch eine niedrige DNA-bindende Aktivität aus. Sie wird besonders für die Herstellung präparativer und analytischer Gele in der Routine-Gelelektrophorese verwendet. Je nach Konzentration der Standardagarose LE variiert der Größenbereich bei der Nukleinsäuretrennung zwischen 100bp und 25kbp. Der niedrige EEO-Wert ermöglicht eine breite Palette von Anwendungen: PCR-Produktanalysen, Restriktionsenzymanalysen, Trennung von RNA vor dem Blotting usw. Diese Agarose ist vergleichbar mit der Agarose BioRagent, low EEO von Sigma oder mit der Universal-Agarose, peqGOLD von Peqlab. Einmaliges kostenloses Agarose Testmuster erhältlich. Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 100bp bis 25kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.
Hochreine, HPLC-gereinigte dNTPs (>99%) als 4 separate Lösungen (dATP, dCTP, dGTP und dTTP) zu jeweils 100 mM für die qPCR, Standard PCR, RT-PCR und Klenowreaktionen. Die dNTP-Lösungen sind optimiert für die Verwendung in der DNA-Polymerisation und anderen verwandten Methoden. Die dNTPs von Genaxxon enthalten keine messbare bakterielle oder humane DNA. Für die Lagerung über einen längeren Zeitraum und/oder bei regelmäßiger, aber nicht häufiger Anwendung empfehlen wir, kleinere Aliquots zuzubereiten. Lösungen der Natriumsalze der Nukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP Konzentration: 100 mM je Nukleotid Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix mit 2 mM oder 10 mM Konzentration oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001), unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004), Pwo (M3002) oder ReproFast (M3003), sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029), der schon dNTPs enthält.
Mit dem GenLadder 1 kbp (ready-to-use) DNA-Marker lassen sich im Bereich von 250 - 3000 Basenpaaren mit einem Abstand von 250 bp, z. B. größere Plasmid-Insertionen und oberhalb von 3000 Basenpaaren mit einem Abstand von 1 - 2kb Vektorplasmide nach Restriktion übersichtlich und präzise in ihrer Größe gelelektrophoretisch bestimmen. Im Vergleich zu DNA-Markern mit äquimolarer Verteilung der Banden, sind bei dieser 1kb Leiter die unteren Banden bis 1000bp in ihrer Masse verstärkt, die oberen Banden ab 3000 bp reduziert. Die 1 kb Leiter erlaubt mit den zwei deutlich verstärkten Banden bei 1000 und 3000 Basenpaaren eine schnelle Orientierung im 1,0 - 1,5%igen Agarosegel. Dies ermöglicht optimale Ergebnisse bereits nach ca. 60 - 80 mm Laufstrecke im Agarosegel und niedrige Beladungsmassen von ca. 0,7μg pro Spur in normalformatigen Agarosegelen (80mL). Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden. Wir empfehlen ein Portionieren in kleine Aliquots. Die DNA ist bereits in 6-fach, gefärbtem Ladepuffer gelöst. Fragmentgrößen und Menge an DNA pro Bande:10000bp ( 28ng/5µL), 8000bp (28ng/5µL), 6000bp (28ng/5µL), 5000bp (28ng/5µL), 4000bp ( 18ng/5µL), 2x3000bp (92ng/5µL), 2500bp (34ng/5µL), 2000bp (34ng/5µL), 1500bp (20ng/5µL), 2x1000bp (92ng/5µL), 750bp (23ng/5µL), 500bp (30ng/5µL), 250bp (45ng/5µL). Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Die Agarose Tiny ist eine niedrig schmelzende Spezialagarose. Die Agarose Tiny ist für molekularbiologische Anwendungen geeignet und ergibt Gele mit besseren Trenneigenschaften und einer höherer Klarheit als Standard-Agarose. So ist sie auch bei hohen Gelkonzentrationen (3,0% - 4,5%) sehr transparent und kann mit allen Puffersystemen verwendet werden. Die niedrige Schmelztemperatur macht die Agarose Tiny ideal für die präparative DNA- und RNA-Elektrophorese, während die niedrige Geliertemperatur ideal zum Klonierexperimente von Gewebekulturzellen und viralen Plaque-Assays ist. Neben diesen Eigenschaften könnte die Agarose Tiny auch für hochauflösende (2 bp) Gelelektrophorese im Bereich von 10 bis 500 bp herangezogen werden. Bsp.: PCR-Produkte oder kleine DNA-Fragmente nach Restriktionsverdau bzw. bei Mutationsanalysen. Wie die SeaPlaque™ von Lonza, besitzt die Agarose Tiny einen niedrigen Schmelzpunkt (<66°C, 3,0%-Gel) und Gelpunkt (<26°C, 3,0%-Gel) sowie eine niedrige DNA-Bindungskapazität. Ihre Anwendung empfiehlt sich besonders für präparative RNA und DNA-Gele. Achtung: Zur Herstellung von Gelen mit einer Konzentration >3% ist das Erhitzen im kochenden Wasserbad oder im Autoklaven (121°C, 15 Minuten) empfehlenswert. Die mechanischen Eigenschaften und die Trennfähigkeit werden dadurch nicht geändert. Um eine höchstmögliche Auflösung mit Agarose Tiny-Gelen zu erzielen, sollte das Gel vor Gebrauch für mind. 60 Minuten bei +2°C bis +8°C gekühlt werden. Als Alternative für hohe Trennleistung bieten wir unsere Agarose Tiny HT (M3047 Agarose Tiny HT > ) mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose an! Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 50 bp bis >20 kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver (M3044 - Agarose LE >) als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase (S5223) oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.Empfohlen für folgende Anwendungen:- RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism - AMPFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) - HVR (Hyper-Variable Regionen) - VNTR (Variable Numbers of Tandem Repeats) - STR (Short Tandem Repeats) - Tri und Tetra Nukleotid repeats
Accessory Items
Hochspezifischer Hotstart Mastermix für Routine und Diagnostik bis 4kb, auch qPCR. Ready-to-use, bestehend aus: chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase PCR-Puffer dNTPs MgCl2 für die HotStart PCR und qPCR. Der Super Hotstart Mastermix ist eine fertige Mischung bei optimaler Konzentration für die effiziente Amplifikation von DNA Templates mittels Hotstart PCR und qPCR. Es müssen nur noch die Primer und die Template DNA dazu gegeben werden. Dieser PCR Hotstart Mastermix wurde für die Verwendung in der Routine und der Diagnostik bis 4 kb Amplikonlänge entwickelt. Die spezielle Zusammensetzung des Puffers garantiert reproduzierbare Ergebnisse selbst nach wiederholten Auftau- und Einfrierzyklen. Der Hotstart Mastermix wird in Aliquots von 1,25mL verschickt. Diesen Mastermix gibt es auch als SuperHot Mastermix Blue > für die visuelle Kontrolle der Pipettierschritte. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) >, als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.
Green qPCR Mastermix High ROX optimiert für die qPCR (realtime) PCR in Blockcyclern, speziell von Applied Biosystems Geräten. Der Green qPCR Mastermix mit 500nM ROX enthält einen interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff und alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. Vorteile der im Genaxxon GreenMasterMix eingesetzten chemisch modifizierten SuperHot Taq-Polymerase: Hotstarttechnologie für das Setup bei Raumtemperatur Kein Pipettieren auf Eis notwendig Kein sofortiges Weiterbearbeiten (PCR) notwendig. Die pipettierten PCR-Ansätze können bis zu 3 Tagen bei RT stehengelassen werden. Amplifikation auch von GC-reichen Templates Hohe Ausbeute Keine Primerdimerbildung Die Genaxxon SuperHot Taq DNA-Polymerase bietet Komfort und Praktikabilität für konstante Effizienz und Spezifität:1. Sie inhibiert die Polymerase bei niedrigen Temperaturen und verhindert so zuverlässig unspezifische PCR-Reaktionen. Daher muss das PCR Setup nicht auf Eis durchgeführt werden. 2. Dies führt dazu, dass der PCR-Ansatz bei RT (20°C bis 25°C) zusammengemischt und bis zu 3 Tage gelagert werden kann, ohne das Endergebnis zu beeinflussen (z.B. während der Mittagspause oder während des Wartens auf weitere Proben). Der Green qPCR Mastermix High ROX enthält alle notwendigen Komponenten in einer optimierten Menge, um eine quantitative PCR durchzuführen. chemisch modifizierte Taq DNA Polymerase dATP, dCTP, dGTP, dTTP interkalierender, grüner Fluoreszenzfarbstoff 500nM ROX optimierter Reaktionspuffer Stabilisator und Enhancer, um sogar die Amplifikation von low copy number Targets zu ermöglichen Die kleinen Aliquots von 1,25mL vereinfachen die Handhabung und die Lagerung (weniger Einfrier- und Auftauzyklen pro Aliquot). Stabilität bei +2°C bis +8°C (Kühlschrank): Mindestens 8 Monate. Speziell geeignet für: Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900 HT, Eppendorf Realplex4, StepOne™ and StepOnePlus™. Weitere realtime PCR Mastermixe und realtime FAST PCR Mastermixe finden Sie hier: qPCR (Classic qPCR > oder FAST und Multiplex qPCR >). Unsere Daten zeigen, dass der Genaxxon Probe- und GreenMastermixe vergleichbare Ergebnisse zu entsprechenden qPCR Mastermixen von Wettbewerbern liefert. Testmuster sind erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands!
Die SuperHot Taq DNA Polymerase ist speziell für eine Erhöhung der Spezifität, der Sensitivität und der Ausbeute bei der DNA-Amplifikation entwickelt worden. Sie ist optimal für alle Anwendungen der Hotstart PCR wie schwierige Templates oder Quantifizierung der PCR geeignet. Diese Hotstart DNA Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der thermostabilen Taq Polymerase, die durch Hitze aktiviert wird. Die chemische Modifikation inhibiert die SuperHot Taq Polymerase bei niedrigen Temperaturen, so dass es nicht zur Amplifikation von Primer-Dimeren und anderen Artefakten kommen kann. Dadurch wird vor allem die Spezifität, aber auch die Sensitivität gegenüber der normalen Taq extrem verbessert. Da man mit der SuperHot Taq Polymerase auch für längere Zeit bei 95°C denaturieren kann ohne dass die Polymerase an Aktivität verliert, ist es möglich, auch schwierige Templates mit z.B. hohem GC-Gehalt ohne Probleme zu amplifizieren. Durch die erhöhte Sensitivität werden die Ergebnisse bei Multiplex Applikationen besser. Ideal für qPCR Anwendungen geeignet. Für die realtime PCR haben wir speziell optimierte 2-fach qPCR Mastermixe >, ebenso wie für die Multiplex-PCR >. SuperHot Taq Polymerase: chemisch modifiziert erhöhte Spezifität erhöhte Sensitivität für schwierige Templates mit hohem GC-Gehalt geeignet für Multiplexapplikationen empfohlen für qPCR geeignetBeachten Sie auch unseren SuperHot Hot Start Mastermix > mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Hotstart Mastermix mit Farbstoff für die visuelle Kontrolle der Pipettierschritte nach der Hotstart PCR: Ready-to-use mit blauem Farbstoff, auch für die qPCR. Nach der PCR kann die Elektrophorese ohne Zugabe von Ladepuffer gefahren werden. Der Hotstart Mastermix Blue besteht aus: chemisch modifizierter SuperHotstart Taq DNA Polymerase dNTPs MgCl2 Reaktionspuffer Farbstoff für die HotStart PCR und qPCR in Routine und Diagnostik. Es müssen nur noch die Primer und die Template DNA dazu gegeben werden. Der vorhandene Farbstoff erlaubt es, die Hotstart PCR-Reaktion direkt auf das Gel aufzutragen, ohne vorher mit Ladepuffer oder Loading dye mischen zu müssen. Dieser PCR Hotstart Mastermix wurde für die Verwendung in der Routine und der Diagnostik bis 4 kb Amplikonlänge sowie für die qPCR entwickelt. Die spezielle Zusammensetzung des Puffers garantiert reproduzierbare Ergebnisse selbst nach wiederholten Auftau- und Einfrierzyklen. Der Hotstart Mastermix Blue wird in Aliquots von 1,25mL verschickt.Unseren SuperHot Mastermix > gibt es auch ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Taq DNA Hot Start Polymerase mit Aptamer Oligonukleotid: Das spezifische Aptamer inhibiert die DNA-Polymeraseaktivität unterhalb von Temperaturen von 50°C bis 55°C und ermöglicht somit eine Hot Start PCR. Bei höheren Temperaturen fällt das Aptamer von aktiven Zentrum der Taq-Polymerase ab. Die Hot Start Taq Polymerase kann so wie eine normale Taq eingesetzt werden, ohne dass der erste Denaturierungsschritt verlängert werden muss. Die Bindung von Aptamer und Polymerase verhindert die Bildung von Primer-Dimer Konstrukten und anderen Artefakten, die durch unspezifische Primerbindungen zu Tage treten. Beachten Sie auch unseren SuperHot Hotstart Mastermix mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set oder als Mix oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.