Vorteile im Überblick
- Hotstart Technology
- High Fidelity: > 60x Taq fidelity
- High elongation rate: 10 sec/kb
- Long range amplification: 11 kb for human gDNA
- 3’ to 5’ proofreading exonuclease activity
- Kostenloser Versand
- Versand innerhalb von 24h
- 30 Tage Geld-Zurück-Garantie
- Bequemer Kauf auf Rechnung
Produktinformationen "AQ97 Hot Start High Fidelity proofreading Polymerase"
AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase ist eine proofreading Polymerase mit hoher Amplifikationsgeschwindigkeit und sehr hoher Genauigkeit (>60-fach) gegenüber Taq DNA Polymerase. AQ97 ist ideal für schwierige Targets mit sehr niedrigem oder hohem GC-Gehalt geeignet. Neben diesen Eigenschaften zeichnet sich die AQ97 auch durch Ihre Eignung, lange Targets bis zu 18 kb, zu amplifizieren aus. Dies führt zu sehr genauen und zuverlässigen PCR-Ergebnissen. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase besitzt sowohl eine 5'→3' DNA Polymerase-Aktivität als auch eine 3'→5' proofreading Exonuklease-Aktivität, die es dieser Polymerase ermöglicht, Basenpaar-Fehlpaarungen zu korrigieren.
AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist ein fusionierter Proteinkomplex aus DNA-Polymerase mit einer prozessivitätssteigernden DNA-Bindungsdomäne. Neben einer sehr schnellen und robusten Amplifikation komplexer und langer Zielmoleküle zeichnet sich die AQ97 High Fidelity DNA Polymerase durch eine hohe Genauigkeit aus, was dazu führt, dass auch für lange Amplicons eine genaue Amplifikation gewährleistet ist. Dadurch eignet sich die AQ97 besonders für PCR-Experimente, die eine Amplifikation mit sehr niedrigen Fehlerraten erfordern, wie z. B. Klonen/Subklonen, NGS-Anwendungen, SNP-Analysen und Mutagenese.
Eigenschaften:
• High Fidelity: >60x Taq fidelity
• High elongation rate: 10 sec/kb (bis 6000bp per minute)
• Built in hot start technology
• Long range amplification: 18 kb for human gDNA
• 5'-3' polymerase acitivity and 3'-5' exonuclease activity.
• generates blund ends.
Bild 1: Die Vergleichswerte der Genauigkeitswerte für die AQ97-DNA-Polymerase, die AccuPol-DNA-Polymerase, die beiden Wettbewerber High-Fidelity-DNA-Polymerasen "P" und "Q" und die Taq-DNA-Polymerase wurden durch eine NGS-basierte Analyse des Nukleotid-Fehleinbaus während der PCR ermittelt. Die PCR-Amplifikation wurde mit einem synthetischen DNA-Target von etwa 200 bp durchgeführt, wobei für jede der getesteten Polymerasen PCR-Produkte erzeugt wurden (unter Verwendung der empfohlenen Setup-Bedingungen).
Bild 2: Acht verschiedene humane genomische DNA-Targets mit einer Länge von 400 bis 800 bp und einem GC-Gehalt zwischen 29% und 78% wurden mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation beobachtet. Für Targets mit einem GC-Gehalt von mehr als 70% wurde der Reaktionsmischung 2 M Betain Enhancer Solution zugesetzt. Marker: M.
Bild 3: Es wurden fünf verschiedene Targets aus menschlicher genomischer DNA mit einer Länge von 2 kb bis 17,5 kb amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix beobachtet, was die Fähigkeit des Master Mixes zur Amplifikation großer und komplexer Targets belegt. Die Amplikongrößen sind am oberen Rand des Gels angegeben. Marker M: High Range DNA-Leiter.
Specifications:
• High Fidelity: >60x Taq DNA Polymerase
• High elongation rate: 10 sec/kb
• 3’ → 5’ proofreading exonuclease activity
• Hot start technology
• Good coverage on difficult DNA templates with low to high GC content
• Long range capability: 18 kb for gDNA
• delivered as 2 units/µL enyzme solution
Applikation:
PCR for cloning, subcloning, mutagenesis, NGS applications, SNP analysis and mutagenesisQuelle:
E.coliKlassifizierungen:
Dokumente:
KategorienlisteAccessory Items - Zubehör
Agarose LE ist eine Standardagarose zur Trennung von DNA im Größenbereich zwischen 100bp und 25kbp. Sie besitzt einen sehr niedrigen EEO-Wert und zeichnet sich durch eine niedrige DNA-bindende Aktivität aus. Sie wird besonders für die Herstellung präparativer und analytischer Gele in der Routine-Gelelektrophorese verwendet. Je nach Konzentration der Standardagarose LE variiert der Größenbereich bei der Nukleinsäuretrennung zwischen 100bp und 25kbp. Der niedrige EEO-Wert ermöglicht eine breite Palette von Anwendungen: PCR-Produktanalysen, Restriktionsenzymanalysen, Trennung von RNA vor dem Blotting usw. Diese Agarose ist vergleichbar mit der Agarose BioRagent, low EEO von Sigma oder mit der Universal-Agarose, peqGOLD von Peqlab. Einmaliges kostenloses Agarose Testmuster erhältlich. Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 100bp bis 25kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.
Agarose LM ist die Original Low Melting Agarose. Diese “molecular biology grade”-Agarose ergibt Gele mit besseren Trenneigenschaften und höherer Transparenz gegenüber der Standardagarose mit normalem Schmelzpunkt. Die Agarose entspricht der SeaPlaque™ von Lonza. Agarose LM ist eine low melting Agarose mit einer sehr hohen Trennkapazität für große DNA-Fragmente (>1000 bp), RNA und Proteine. Im geschmolzenen Gel können enzymatische Manipulationen vorgenommen werden (z. B. Verdau, Ligation, PCR. usw.). Eine Extraktion der DNA ist daher nicht notwendig. Low melting Agarose LM ist hervorragend für den Verdau mit β-Agarase (S5223) geeignet. Große DNA-Fragmente können dadurch besonders schonend isoliert werden. Die low melting Agarose LM wird im analytischen und präparativen Bereich eingesetzt. Für optimale Erfolge sollte das Gel für mind. 1 Stunde vor der Benutzung bei +2°C bis +8°C gelagert werden. Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 50 bp bis >20 kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver (M3044 - Agarose LE >) als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase (S5223) oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.
Unsere Agarose TIny HT ist eine hochauflösende (+/-2 bp), normal schmelzende Spezialagarose für die Auftrennung von DNA-Fragmenten von 20 bis 1500 bp, wie zum Beispiel PCR-Produkte oder kleine DNA-Fragmente nach Restriktionsverdau bzw. bei Mutationsanalysen. Die Agarose Tiny HT verfügt über einen Schmelzpunkt von <89°C (4,0 %-Gel) und einem Gelpunkt von <40,0°C (4,0%-Gel). Ihre Anwendung empfiehlt sich besonders für analytische DNA/RNA-Gele mit Fragmentgrößen von 20 - 1500 Basenpaaren (bei einer Gelkonzentration von 2 - 3%). Diese Agarose ist auch für Blotting- Experimente geeignet. Bei einer Gelkonzentration von 4% können DNA-Fragmente von ca. 150 - 2200 Basenpaare im Southern Blot transferiert werden. Die hohe Gelstärke (>2000 g/cm³, 1,5%-Gel) gegenüber vergleichbaren Agarosen minimiert das Risiko des Zerbrechens des Gels beim Hantieren sehr stark und erlaubt auch die Herstellung von Gelen mit einer Konzentration <1% bei hervorragender Auflösung. Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 50 bp bis >20 kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver (M3044 - Agarose LE >) als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase (S5223) oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.
Die Agarose Tiny ist eine niedrig schmelzende Spezialagarose. Die Agarose Tiny ist für molekularbiologische Anwendungen geeignet und ergibt Gele mit besseren Trenneigenschaften und einer höherer Klarheit als Standard-Agarose. So ist sie auch bei hohen Gelkonzentrationen (3,0% - 4,5%) sehr transparent und kann mit allen Puffersystemen verwendet werden. Die niedrige Schmelztemperatur macht die Agarose Tiny ideal für die präparative DNA- und RNA-Elektrophorese, während die niedrige Geliertemperatur ideal zum Klonierexperimente von Gewebekulturzellen und viralen Plaque-Assays ist. Neben diesen Eigenschaften könnte die Agarose Tiny auch für hochauflösende (2 bp) Gelelektrophorese im Bereich von 10 bis 500 bp herangezogen werden. Bsp.: PCR-Produkte oder kleine DNA-Fragmente nach Restriktionsverdau bzw. bei Mutationsanalysen. Wie die SeaPlaque™ von Lonza, besitzt die Agarose Tiny einen niedrigen Schmelzpunkt (<66°C, 3,0%-Gel) und Gelpunkt (<26°C, 3,0%-Gel) sowie eine niedrige DNA-Bindungskapazität. Ihre Anwendung empfiehlt sich besonders für präparative RNA und DNA-Gele. Achtung: Zur Herstellung von Gelen mit einer Konzentration >3% ist das Erhitzen im kochenden Wasserbad oder im Autoklaven (121°C, 15 Minuten) empfehlenswert. Die mechanischen Eigenschaften und die Trennfähigkeit werden dadurch nicht geändert. Um eine höchstmögliche Auflösung mit Agarose Tiny-Gelen zu erzielen, sollte das Gel vor Gebrauch für mind. 60 Minuten bei +2°C bis +8°C gekühlt werden. Als Alternative für hohe Trennleistung bieten wir unsere Agarose Tiny HT (M3047 Agarose Tiny HT > ) mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose an! Genaxxon bietet Agarosen für verschiedenste Anwendungen. Es gibt Agarosen mit unterschiedlichem Schmelzpunkt oder aber mit normalen bzw. hochauflösenden Trenneigenschaften von DNA-Fragmenten. Unsere Standardagarose (M3044) mit normalem Schmelzpunkt und Standardtrenneigenschaften ist mit einem sehr großen Trennbereich von 50 bp bis >20 kbp eine optimale Lösung für die Routine. Diese Agarose ist sowohl als Pulver (M3044 - Agarose LE >) als auch als hochwertige, vielseitig einsetzbare Tabletten (M3054 >) in Blisterverpackung (200 oder 1.000 Tabletten) erhältlich. Diese Tabletten sind vorgewogen und daher sofort ohne wiegen mit Staubentwicklung einsetzbar. Die niedrig schmelzenden Agarosen sind speziell für die schnelle Extraktion von DNA aus Gelen zum Verdau mit β-Agarase (S5223) oder aber für die "in-gel" DNA-Bearbeitung mit Enzymen für die bakterielle Transformation mit Nukleinsäuren gedacht. Die hochauflösenden Agarosen (normal schmelzend oder niedrig schmelzend) sind für die extrem gute Separation/Auflösung von DNA-Fragmenten gedacht, die sich nur durch eine Größe von 2bp unterscheiden: M3046 Agarose Tiny > (niedrig schmelzend, hohe Auflösung vergleichbar mit NuSieve®) oder M3047 Agarose Tiny HT > (mit hoher Gelstärke, hohem Schmelzpunkt und hoher Auflösung entsprechend der SeaKem® Agarose). Zum ungiftigen Anfärben von Nukleinsäuren im Agarosegel wird der hochsensitive Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain (M3193) oder SafeGel green stain (M3191) empfohlen.Empfohlen für folgende Anwendungen:- RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism - AMPFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) - HVR (Hyper-Variable Regionen) - VNTR (Variable Numbers of Tandem Repeats) - STR (Short Tandem Repeats) - Tri und Tetra Nukleotid repeats
Coral Red Buffer ist ein 10-fach Pufferzusatz zum Anfärben des PCR-Puffers vor der PCR-Reaktion. Die Lösung enthält Glycerin, EDTA, einen roten und einen gelben Farbstoff. 5µL von diesem Pufferzusatz werden zu 45µL des PCR-Ansatzes vor der PCR-Reaktion gegeben, um diese rot einzufärben. Als Alternative bietet Genaxxon bioscience den ready-to-use RedMastermix M3029 > an. Dieser PCR Mastermix enthält alle für die PCR notwendigen Bestandteile inklusive eines roten Farbstoffes, der die visuelle Kontrolle von Pipettierschritten ermöglicht.
DNA Ladepuffer II mit Orange G ist ein spezieller Ladepuffer um DNA-Banden bis unterhalb 65 bp im Gel sichtbar bleiben zu lassen. Der 6-fach Puffer enthält Glycerin, EDTA und Orange G. Orange G läuft unterhalb 50 bp im Gel und ist zusätzlich durchlässiger für Fluoreszenz als Bromophenolblau oder Xylencyanol.
Der DNA Loading Buffer I ist ein 6-fach Ladepuffer für die Applikation der PCR-Reaktion auf ein Agarosegel. Der Puffer enthält Glycerin, EDTA, Bromophenolblau und Xylenecyanol. 6X Ladepuffer für die DNA Applikation in Gele.Der Genaxxon 6X DNA Loading Dye wird benutzt um DNA Marker und DNA-proben für das Auftragen auf Agarose- oder Polyacrylamidgele vorzubereiten. Der Puffer enthält zwei unterschiedliche Farbstoffe (Bromophenolblau und Xylencyanol FF) um die DNA-Migration während der Elektrophorese zu visualisieren.
Der Loading Buffer I Fluoro ist vergleichbar mit dem Loading Buffer M3308, enthält aber zusätzlich einen fluoreszierenden Farbstoff, der bei Blaulicht oder UV-Beleuchtung von Agarosegelen eine sofortige Visualisierung der DNA-Banden bewirkt. Ladepuffer I Fluoro wird als 6-fach DNA-Ladepuffer geliefert und dient zur Vorbereitung von DNA-Markern oder PCR-Proben für das Laden auf Agarose- oder Polyacrylamid-Gele.Loading Buffer I Fluoro ist das empfindlichste Färbereagenz für den Nachweis doppelsträngiger DNA (dsDNA). Der Ladepuffer enthält die drei Tracking-Farbstoffe Bromphenolblau, Xylencyanol FF und Orange G zur visuellen Verfolgung der DNA-Migration während der Elektrophorese, sowie einen Fluoreszenzfarbstoff zur Detektion der DNA-Banden ohne zusätzliche Färbung des Gels. Bitte beachten Sie: Der DNA Loading Buffer I Fluoro zeigt zwar einen kleinen Anregungspeak im UV-Bereich, die Fluoreszenz ist jedoch deutlich intensiver bei Anregung mit Blaulicht (ca. 490nm Excitation). Wir empfehlen daher die Nutzung von Blaulicht, um die bestmöglichen Ergebnisse zu erzielen.
Hochreine dNTPs (>99%) als fertiger Mix für die qPCR, Standard PCR oder RT-PCRs und Klenowreaktionen. Die dNTPS liegen als praktischer Mix vor aus den Natriumsalzen der Nukleotide: dATP, dCTP, dGTP und dTTP, jedes Nukleotid in einer Konzentration von 2mM. Die Mischung ist optimiert für die Verwendung in der DNA-Polymerisation und anderen verwandten Methoden. Unsere dNTPs enthalten keine messbare bakterielle oder humane DNA. Jeweils 5µL der 2mM Lösung reichen für eine 50µL PCR Reaktion. Für die Lagerung über längere Zeit und/oder bei regelmäßiger, aber nicht häufiger Anwendung empfehlen wir, kleinere Aliquots zuzubereiten. Mischung aus den Natriumsalzen der Nukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP Konzentration: 2 mM je Nukleotid Beachten Sie auch unseren dNTP-Mix mit 10 mM, unser dNTP-Set als 4 x 100 mM Lösung oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001), unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004), Pwo (M3002) oder ReproFast (M3003), sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029), der schon dNTPs enthält.
Hochreine dNTPs (>99%) als fertiger Mix für die qPCR, Standard PCR oder RT-PCRs und Klenowreaktionen. Die dNTPS liegen als praktischer Mix vor aus den Natriumsalzen der Nukleotide: dATP, dCTP, dGTP und dTTP, jedes Nukleotid in einer Konzentration von 10 mM. Die Mischung ist optimiert für die Verwendung in der DNA-Polymerisation und anderen verwandten Methoden. Unsere dNTPs enthalten keine messbare bakterielle oder humane DNA. Jeweils 1µL der 10mM Lösung reichen für eine 50µL PCR Reaktion. Für die Lagerung über längere Zeit und/oder bei regelmäßiger, aber nicht häufiger Anwendung empfehlen wir, kleinere Aliquots zuzubereiten. Mischung aus den Natriumsalzen der Nukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP Konzentration: 10 mM je Nukleotid Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix mit 2 mM, unser dNTP-Set als 4 x 100 mM Lösung oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001), unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004), Pwo (M3002) oder ReproFast (M3003), sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029), der schon dNTPs enthält.
Hochreine, HPLC-gereinigte dNTPs (>99%) als 4 separate Lösungen (dATP, dCTP, dGTP und dTTP) zu jeweils 100 mM für die qPCR, Standard PCR, RT-PCR und Klenowreaktionen. Die dNTP-Lösungen sind optimiert für die Verwendung in der DNA-Polymerisation und anderen verwandten Methoden. Die dNTPs von Genaxxon enthalten keine messbare bakterielle oder humane DNA. Für die Lagerung über einen längeren Zeitraum und/oder bei regelmäßiger, aber nicht häufiger Anwendung empfehlen wir, kleinere Aliquots zuzubereiten. Lösungen der Natriumsalze der Nukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP Konzentration: 100 mM je Nukleotid Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix mit 2 mM oder 10 mM Konzentration oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001), unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004), Pwo (M3002) oder ReproFast (M3003), sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029), der schon dNTPs enthält.
Deoxyuridin 5'-triphosphat Tetranatriumsalz (dUTP) mit einer Reinheit größer 99% (HPLC). dUTP kann als Ersatz für dTTP in PCR and RT-PCR Protokollen verwendet werden um 'Carry-Over' vor der PCR zu vermeiden. Das Produkt wurde in der Anwendung zur Amplifikation von Amplikons bis 8kb, sowie mit proofreading Enzymen (bis 0.8kb) getestet. Die Substitution von dTTP durch dUTP in der PCR resultiert in Uracil enthaltenter DNA die für die meisten Standardanwendungen verwendet werden kann. Das Enzym Uracil-DNA-Glucosylase (UDG) > wird dann vor einer neuen PCR-Reaktion eingesetzt, um alte DNA enzmatisch zu hydrolisieren. Beachten Sie auch unseren PCR dNTP-Mix mit 10 mM >, unser dNTP-Set als 4 x 100 mM Lösung > oder unsere modifizierten Nukleotide, wie z. B. Biotin-11-dUTP >. Für Ihre erfolgreiche PCR finden Sie hier unsere Taq DNA Polymerse (M3001) >, unsere Proof-Reading Polymerasen Pfu (M3004) >, Pwo (M3002) > oder ReproFast (M3003) >, sowie unseren ready-to-use RedMastermix (M3029) >, der schon dNTPs enthält.
Der GenLadder 100 bp Plus mit integriertem Gelfärbefarbstoff und Loading Dye - DNA-ladder ready-to-use ist eine Innovation für Hochdurchsatzansätze oder Colony screenings! Ideal dafür geeignet die Größe doppelsträngiger DNA zwischen 100 und 1000 Basenpaaren zu bestimmen. Durch die zusätzlichen Banden bei 1.5kbp und 3.0kbp können auch DNA-Größen in diesem Bereich zugeordnet werden, ohne einen zusätzlichen 1kbp DNA-Marker einsetzen zu müssen. Gleichzeitig enthält die Mischung auch einen Gelfärbefarbstoff, der mit Blaulicht (ca. 490nm Excitation) detektiert werden kann. Eine zusätzliche Färbung (pre- oder post staining) oder die Zugabe von Fluoreszenzfarbstoff vor dem Auftragen ist somit hinfällig und erspart einen weiteren Pipettierschritt. Diese DNA-Ladder passt ideal zu unserem Red Mastermix Fluoro 2X, der den Gelfärbefarbstoff ebenfalls enthält. Zusammen das ideale Paar für Colony Screens! Der GenLadder 100 bp Plus mit Fluroeszenzfarbstoff und Loading Dye - ready-to-use besteht aus 12 Fragmenten in den Größen zwischen 100 - 1000bp im Abstand von 100bp. Zusätzlich gibt es bei 1500bp und 3000bp weitere Banden. Das 500bp und das 1500bp Fragment zeigen eine stärkere Intensität, um eine leichtere Identifizierung zu ermöglichen. Alle Fragmente sind 'blunt-ended'. Die Fragmentgrößen (in Basenpaaren) sind 3000 bp (40ng/6µL), 2x 1500 bp (70ng/6µL), 1000 bp (50ng/6µL), 900 bp (40ng/6µL), 800 bp (40ng/6µL), 700 bp (30ng/6µL), 600 bp (30ng/6µL), 2x 500 bp (90ng/6µL), 400 bp (40ng/6µL), 300 bp (30ng/6µL), 200 bp (40ng/6µL), 100 bp (40ng/6µL). Der DNA-Marker ist in einem ready-to-use Puffer gelöst, der Orange G und Xylenecyanol FF als Tracking dyes enthält. Die Gesamtkonzentration der enthaltenen DNA beträgt 90 µg/mL. Die empfohlene Menge Marker pro Gelspur liegt bei 0,5μg (6µL).Bitte beachten Sie: Der enthaltene Nukleinsäuren-Farbstoff zeigt zwar einen kleinen Anregungspeak im UV-Bereich, die Fluoreszenz ist jedoch deutlich intensiver bei Anregung mit Blaulicht. Wir empfehlen daher die Nutzung von Blaulicht, um die bestmöglichen Ergebnisse zu erzielen. Unsere weiteren GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Der Genaxxon GenLadder 100 bp Plus with loading dye ist ideal dafür geeignet die Größe doppelsträngiger DNA zwischen 100 und 1500 Basenpaaren zu bestimmen. Durch die zusätzlichen Banden bei 1.5kbp und 3.0kbp können auch zusätzlich DNA-Größen in diesem Bereich zugeordnet werden, ohne einen zusätzliche 1kbp DNA-Marker einsetzen zu müssen. Die Genladder 100 bp Plus besteht aus 12 Fragmenten in den Größen zwischen 100 - 1000bp im Abstand von 100bp. Zusätzlich gibt es bei 1500bp und 3000bp weitere Banden. Das 500bp und das 1500bp Fragment zeigen eine stärkere Intensität, um eine leichtere Identifizierung zu ermöglichen. Alle Fragmente sind 'blunt-ended'. Die Fragmentgrößen (in Basenpaaren) sind 3000 bp (40ng/5µL), 2x 1500 bp (70ng/5µL), 1000 bp (50ng/5µL), 900 bp (40ng/5µL), 800 bp (40ng/5µL), 700 bp (30ng/5µL), 600 bp (30ng/5µL), 2x 500 bp (90ng/5µL), 400 bp (40ng/5µL), 300 bp (30ng/5µL), 200 bp (40ng/5µL), 100 bp (40ng/5µL). Der DNA-Marker ist in einem ready-to-use Puffer gelöst der Orange G und Xylenecyanol FF als Tracking dyes enthält. Die Gesamtkonzentration der enthaltenen DNA beträgt 0,1µg/µL (108µg/mL). Die empfohlene Menge Marker pro Gelspur liegt bei 0,5μg (5µL). Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Mit dem GenLadder 1 kbp (ready-to-use) DNA-Marker lassen sich im Bereich von 250 - 3000 Basenpaaren mit einem Abstand von 250 bp, z. B. größere Plasmid-Insertionen und oberhalb von 3000 Basenpaaren mit einem Abstand von 1 - 2kb Vektorplasmide nach Restriktion übersichtlich und präzise in ihrer Größe gelelektrophoretisch bestimmen. Im Vergleich zu DNA-Markern mit äquimolarer Verteilung der Banden, sind bei dieser 1kb Leiter die unteren Banden bis 1000bp in ihrer Masse verstärkt, die oberen Banden ab 3000 bp reduziert. Die 1 kb Leiter erlaubt mit den zwei deutlich verstärkten Banden bei 1000 und 3000 Basenpaaren eine schnelle Orientierung im 1,0 - 1,5%igen Agarosegel. Dies ermöglicht optimale Ergebnisse bereits nach ca. 60 - 80 mm Laufstrecke im Agarosegel und niedrige Beladungsmassen von ca. 0,7μg pro Spur in normalformatigen Agarosegelen (80mL). Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden. Wir empfehlen ein Portionieren in kleine Aliquots. Die DNA ist bereits in 6-fach, gefärbtem Ladepuffer gelöst. Fragmentgrößen und Menge an DNA pro Bande:10000bp ( 28ng/5µL), 8000bp (28ng/5µL), 6000bp (28ng/5µL), 5000bp (28ng/5µL), 4000bp ( 18ng/5µL), 2x3000bp (92ng/5µL), 2500bp (34ng/5µL), 2000bp (34ng/5µL), 1500bp (20ng/5µL), 2x1000bp (92ng/5µL), 750bp (23ng/5µL), 500bp (30ng/5µL), 250bp (45ng/5µL). Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Der GenLadder 50bp DNA Marker ist ideal, um die Größe von DNA zwischen 50 und 1500 Basenpaaren zu bestimmen. Der Marker besteht aus 17 Fragmenten in den Größen zwischen 50 - 1000bp im Abstand von 50bp. Die 200bp, 500bp und 1200bp-Fragmente haben eine stärkere Intensität, um eine leichtere Identifizierung zu ermöglichen. Alle Fragmente sind 'blunt-ended'. Die Fragmentgrößen (in Basenpaaren) sind 50 (ca. 30ng/5µL), 100 (ca. 27ng/5µL), 150 (ca. 30ng/5µL), 200 (2x) (ca. 67ng/5µL), 250 (ca. 25ng/5µL), 300 (ca. 20ng/5µL), 350 (ca. 18ng/5µL), 400 (ca. 27ng/5µL), 450 (ca. 23ng/5µL), 500 (2x) (ca. 67ng/5µL), 600 (ca. 20ng/5µL), 700 (ca. 23ng/5µL), 800 (ca. 27ng/5µL), 900 (ca. 30ng/5µL), 1000 (ca. 33ng/5µL), 1200 (2X) (ca. 70ng/5µL) und 1500bp (ca. 40ng/5µL). Der DNA Marker wird mit einer Konzentration von ca. 0,1mg/mL in 10mM Tris · HCl (pH8,0), 1,0mM EDTA und Farbstoff Orange G geliefert. Die empfohlene Menge Marker pro Gelspur liegt bei 0,5μg (5μL). Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Mit der synthetischen GenLadder XLarge lassen sich im Bereich von 250 - 25000 Basenpaaren auch größere Plasmid-Insertionen und Vektorplasmide nach Restriktion übersichtlich und präzise in ihrer Größe gelelektrophoretisch bestimmen. GenLadder XLarge zeigt 14 DNA Banden. Die Menge an DNA pro Auftrag (5µL) beträgt 0,52µg. Die DNA-Leiter erlaubt, mit den zwei deutlich verstärkten Banden bei 1000 und 3000 Basenpaaren, eine schnelle Orientierung im 1,0 - 1,5%igen Agarosegel. Dies ermöglicht optimale Ergebnisse bereits nach ca. 60 - 80 mm Laufstrecke im Agarosegel und niedrige Beladungsmassen von ca. 0,5μg pro Spur in normalformatigen Agarosegelen (80mL). Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden. Wir empfehlen ein Portionieren in kleine Aliquots. Source:PCR-Produkte und Doppelsträngige DNA-Verdaus mit entsprechenden Restriktionsenzymen. Die erhaltene DNA ist mit Phenol extrahiert und mit 10mM Tris-HCl (pH8.0), 10mM EDTA äqulibriert worden. Unsere GenLadder DNA-Marker sind in einem praktischen ready-to-us- Format, vorgemixt mit 6X Loading Dye, erhältlich: GM3094 (GenLadder 100 bp Plus ready-to-use) > und M3328 (GenLadder 1kbp ready-to-use) > oder als ready-to-use-Prämix M3072 (GenLadder 50bp) > mit 6X Orange G DNA Loading Dye.Die DNA Gel Loading Dyes können auch separat bestellt werden: M3308 (DNA Gel Loading Dye mit Bromophenolblau und Xylencyanol FF) > und M3321 (DNAGel Loading Dye mit Orange G) >.
Reines, qualitätsgeprüftes, nukleasefreies Wasser eignet sich für alle Experimente, die nukleasefreies Wasser benötigen, einschließlich molekularbiologischer Anwendungen, z. Bsp. PCR. Nukleasefreies Wasser wird speziell prozessiert, um DNase, RNase freies, deionisiertes Wasser zu erhalten. Verunreinigungen mit Nukleasen kann zu inkonsistenten bis hin zu komplett fehl geschlagenen Experimenten führen. Genaxxon bietet daher verschiedene Nuklease-freie Wasserqualitäten an: steriles, Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltes Wasser (M6082 >) und Nuklease-freies Wasser (nicht DEPC-behandelt) (M6340 >). Unser Nuklease-freies Wasser wird in nukleasefreien PE-Behältern, oder in Glasflaschen abgefüllt.
SafeGel green stain ist ein äußert sensitiver Fluoreszenzfarbstoff zum Färben von Nukleinsäuren, der das toxische, keimbahnmutagene Ethidiumbromid (EtBr) zum Färben von dsDNA, ssDNA oder RNA in Agarose- oder Polyacrylamidgelen ersetzt. SafeGel green stain ist viel empfindlicher als EtBr, ohne dass ein Entfärbeschritt benötigt wird. SafeGel red stain ist weniger toxisch und weniger mutagen als EtBr und kann mit Blau/Grünlicht bei 480-530nm angeregt werden. SafeGel green stain kann dazu benutzt werden, dsDNA, ssDNA oder RNA mittels pre-staining oder post-staining in Agarosegelen > zu färben. SafeGel green stain stört auch eine weitergehende Verarbeitung der DNA, wie Restriktionverdaus, Southernblots oder Klonierungen nicht. Eine Serie von Sicherheitstests hat gezeigt, dass SafeGel green stain bei Verwendung der empfohlenen Arbeitskonzentrationen hinaus nicht giftig, nicht mutagen und nicht gefährlich ist. Als ein Resultat daraus kann der Fluoreszenzfarbstoff mit dem normalen Abfall entsorgt werden und spart damit neben dem separaten Handling des EtBr-Abfalls auch noch merklich an Entsorgungskosten. Der Fluoreszenzfarbstoff SafeGel green stain wird als 10,000X Lösung in Wasser geliefert. Diese Lösung kann direkt zum post-staining eingesetzt werden. Es hat sich gezeigt, dass die besten Ergebnisse erzielt werden, wenn der Farbstoff direkt mit der DNA in den Gelslot pipettiert wird. Für erstklassige Agarosegele bieten wir unsere Standard Agarose LE >, oder auch unsere Spezialagarosen mit hoher Auflösung Tiny (M3046) > oder Tiny HT (M3047) > an.
SafeGel red stain ist ein äußert sensitiver Fluoreszenzfarbstoff zum Färben von Nukleinsäuren, der das toxische, keimbahnmutagene Ethidiumbromid (EtBr) zum Färben von dsDNA, ssDNA oder RNA in Agarose- oder Polyacrylamidgelen ersetzt. SafeGel red stain ist viel empfindlicher als EtBr, ohne dass ein Entfärbeschritt benötigt wird. SafeGel red stain ist weniger toxisch und weniger mutagen als EtBr wobei beide praktisch dasselbe UV-Spektrum zeigen, so dass man EtBr direkt ersetzen kann, ohne existierende Imagingsysteme ersetzen zu müssen. SafeGel red stain kann dazu benutzt werden, dsDNA, ssDNA oder RNA mittels pre-staining oder post-staining in Agarosegelen > zu färben. PAGE-Gele können nur mit dem post-staining Verfahren angefärbt werden. SafeGel red stain stört auch eine weitergehende Verarbeitung der DNA, wie Restriktionverdaus, Southernblots oder Klonierungen nicht. Eine Serie von Sicherheitstests hat gezeigt, dass SafeGel red stain bei Verwendung der empfohlenen Arbeitskonzentrationen hinaus nicht giftig, nicht mutagen und nicht gefährlich ist. Als ein Resultat daraus kann der Fluoreszenzfarbstoff mit dem normalen Abfall entsorgt werden und spart damit neben dem separaten Handling des EtBr-Abfalls auch noch merklich an Entsorgungskosten. Der Fluoreszenzfarbstoff SafeGel red stain wird als 10,000X Lösung in Wasser geliefert. Diese Lösung kann direkt zum post-staining eingesetzt werden. Es hat sich gezeigt, dass die besten Ergebnisse erzielt werden, wenn der Farbstoff direkt mit der DNA in den Gelslot pipettiert wird. Lesen Sie auch in unserem Blogbeitrag, warum Sie jetzt Genaxxons SafeGel testen sollten. Für erstklassige Agarosegele bieten wir unsere Standard Agarose LE >, oder auch unsere Spezialagarosen mit hoher Auflösung Tiny (M3046) > oder Tiny HT (M3047) > an. * * *Discover our NEW Product: More Info PDF >
Steriles, destilliertes Wasser, das frei von DNasen, RNasen und Proteinasen ist. Zusätzlich wurde das Wasser mit DEPC behandelt, um ganz sicher zu gehen, dass keine Spuren an RNase vorhanden sind. Aus diesem Grund ist dieses Wasser speziell für RT-PCR oder andere molekularbiologische Anwendungen geeignet, bei denen RNasen zu 100% entfernt sein müssen. Genaxxon bietet daher verschiedene Nuklease-freie Wasserqualitäten an: steriles, Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltes Wasser (M6082 >) und Nuklease-freies Wasser (nicht DEPC-behandelt) (M6340 >). Unser Nuklease-freies Wasser wird in nukleasefreien PE-Behältern, oder in Glasflaschen abgefüllt.
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AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist eine proofreading Polymerase mit hoher Amplifikationsgeschwindigkeit und sehr hoher Genauigkeit (>60-fach) gegenüber Taq DNA Polymerase. AQ97 ist ideal für schwierige Targets mit sehr niedrigem oder hohem GC-Gehalt geeignet. Neben diesen Eigenschaften zeichnet sich die AQ97 auch durch Ihre Eignung, lange Targets bis zu 18 kb, zu amplifizieren aus. Dies führt zu sehr genauen und zuverlässigen PCR-Ergebnissen. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase besitzt sowohl eine 5'→3' DNA Polymerase-Aktivität als auch eine 3'→5' proofreading Exonuklease-Aktivität, die es dieser Polymerase ermöglicht, Basenpaar-Fehlpaarungen zu korrigieren. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist ein fusionierter Proteinkomplex aus DNA-Polymerase mit einer prozessivitätssteigernden DNA-Bindungsdomäne. Neben einer sehr schnellen und robusten Amplifikation komplexer und langer Zielmoleküle zeichnet sich die AQ97 High Fidelity DNA Polymerase durch eine hohe Genauigkeit aus, was dazu führt, dass auch für lange Amplicons eine genaue Amplifikation gewährleistet ist. Dadurch eignet sich die AQ97 besonders für PCR-Experimente, die eine Amplifikation mit sehr niedrigen Fehlerraten erfordern, wie z. B. Klonen/Subklonen, NGS-Anwendungen, SNP-Analysen und Mutagenese. Eigenschaften: • High Fidelity: >60x Taq fidelity• High elongation rate: 10 sec/kb (bis 6000bp pro Minute)• Long range amplification: 18 kb for human gDNA• 5'-3' polymerase acitivity and 3'-5' exonuclease activity.• generates blund ends.Picture 1: Comparison figures of fidelity values for AQ97 DNA Polymerase, AccuPol DNA Polymerase, two well-recognized high fidelity DNA polymerases P and Q and Taq DNA Polymerase were determined through NGS-based analysis of nucleotide misincorporation during PCR. Initially, PCR amplification was performed on a ~ 200 bp synthetic DNA target, generating PCR products for each of the tested polymerases (using recommended setup conditions). Picture 2: Distribution of substitution errors. PCR was performed using Taq DNA Polymerase, AQ97 High Fidelity DNA Polymerase, high fidelity DNA Polymerase Q and high fidelity DNA Polymerase P. The PCR was followed by NGS sequencing of the PCR products. The number of substitutions at each PCR target position was calculated and plotted in diagram A. Substitutions include misincorporated nucleotides and deletions at each position. Non-polymerase errors are subtracted from the total number of errors to revel true polymerase errors. Non-polymerase errors include mutations caused by thermocycling-induced DNA damage, pre-NGS sample preparation and sequencing errors. In these diagrams the average number of substitutions for Taq DNA Polymerase (Taq average) and for AQ97 High Fidelity DNA Polymerase (AQ97 average) is also plotted. Diagram B magnifies the area near the detection limit, displaying more information about the number of substitutions for AQ97 High Fidelity DNA Polymerase, high fidelity DNA Polymerase Q and high fidelity DNA polymerase P. Click to enlarge diagrams.
AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase ist eine proofreading Polymerase mit hoher Amplifikationsgeschwindigkeit und sehr hoher Genauigkeit (>60-fach) gegenüber Taq DNA Polymerase. AQ97 ist ideal für schwierige Targets mit sehr niedrigem oder hohem GC-Gehalt geeignet. Neben diesen Eigenschaften zeichnet sich die AQ97 auch durch Ihre Eignung, lange Targets bis zu 18 kb, zu amplifizieren aus. Dies führt zu sehr genauen und zuverlässigen PCR-Ergebnissen. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase besitzt sowohl eine 5'→3' DNA Polymerase-Aktivität als auch eine 3'→5' proofreading Exonuklease-Aktivität, die es dieser Polymerase ermöglicht, Basenpaar-Fehlpaarungen zu korrigieren. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist ein fusionierter Proteinkomplex aus DNA-Polymerase mit einer prozessivitätssteigernden DNA-Bindungsdomäne. Neben einer sehr schnellen und robusten Amplifikation komplexer und langer Zielmoleküle zeichnet sich die AQ97 High Fidelity DNA Polymerase durch eine hohe Genauigkeit aus, was dazu führt, dass auch für lange Amplicons eine genaue Amplifikation gewährleistet ist. Dadurch eignet sich die AQ97 besonders für PCR-Experimente, die eine Amplifikation mit sehr niedrigen Fehlerraten erfordern, wie z. B. Klonen/Subklonen, NGS-Anwendungen, SNP-Analysen und Mutagenese. Eigenschaften: • High Fidelity: >60x Taq fidelity• High elongation rate: 10 sec/kb (bis 6000bp per minute) • Built in hot start technology• Long range amplification: 18 kb for human gDNA• 5'-3' polymerase acitivity and 3'-5' exonuclease activity.• generates blund ends. Bild 1: Die Vergleichswerte der Genauigkeitswerte für die AQ97-DNA-Polymerase, die AccuPol-DNA-Polymerase, die beiden Wettbewerber High-Fidelity-DNA-Polymerasen "P" und "Q" und die Taq-DNA-Polymerase wurden durch eine NGS-basierte Analyse des Nukleotid-Fehleinbaus während der PCR ermittelt. Die PCR-Amplifikation wurde mit einem synthetischen DNA-Target von etwa 200 bp durchgeführt, wobei für jede der getesteten Polymerasen PCR-Produkte erzeugt wurden (unter Verwendung der empfohlenen Setup-Bedingungen). Bild 2: Acht verschiedene humane genomische DNA-Targets mit einer Länge von 400 bis 800 bp und einem GC-Gehalt zwischen 29% und 78% wurden mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation beobachtet. Für Targets mit einem GC-Gehalt von mehr als 70% wurde der Reaktionsmischung 2 M Betain Enhancer Solution zugesetzt. Marker: M. Bild 3: Es wurden fünf verschiedene Targets aus menschlicher genomischer DNA mit einer Länge von 2 kb bis 17,5 kb amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix beobachtet, was die Fähigkeit des Master Mixes zur Amplifikation großer und komplexer Targets belegt. Die Amplikongrößen sind am oberen Rand des Gels angegeben. Marker M: High Range DNA-Leiter.
DNA-freieTaq DNA-Polymerase DF Taq für hohe Spezifität, speziell für die Anwendung in der Mikrobiologie geeignet: Enthält praktisch keine Fremd-DNA. Die DNA-freie Taq DNA Polymerase von Genaxxon ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase ohne 3' - 5' Exonucleaseaktivität. Die hohe Prozessivität der Genaxxon DF Taq DNA Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten >7 kBasen. Besonders bei der PCR von 16S RNA-DNA Fragmenten zeigt die DNA-freie DF Taq keine falsch positiven Ergebnisse. Die DNA-freie Taq DNA Polymerase wird mit 10fach-Puffer S und separatem MgCl2 geliefert. Der Puffer S ist für eine hohe Selektivität bei der Amplifikation optimiert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 15mM MgCl2. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Genaxxon's FAST DNA polymerase is a robust enzyme, ideally suited for applications like genotyping and screening, amplifying with extreme speed of up to 2 seconds per 1kb, as well as high yield and consistency. FAST DNA polymerase has 5’-3’ exonuclease activity, but no 3’-5’ exonuclease (proofreading) activity. PCR products generated with this enzyme are A-tailed and can thus be cloned into TA cloning vectors. The extreme speed of Genaxxons' FAST DNA polymerase allows the use of an extension rate of 4-8 kb/min. Genaxxon's FAST DNA Polymerase is delivered with 5X reaction buffer already containing MgCL2, dNTPs, enhancers and stabilizers for an optimal PCR result. Genaxxon's FAST DNA polymerase is also available as a convenient 2x master mix (M3286), including an inert red tracking dye for electrophoresis, containing all required components for fast PCR, except specific primers. Example of a typical PCR protocol (graphical presentation)* Ta is the annealing temperature (Ta should be 2°C above Tm**) ** Tm is the melting temperature of a primer which is defined as the temperature at which 50% of the primer bind to the complementary sequence of the target DNA. Please note: By increasing Ta above Tm, this percentage decreases, however, primers will still anneal up to a certain degree and initiate extension. Therefore, PCR would still work with a Ta of several degrees higher than the Tm but with a dramatically reduced efficiency. Hence, we recommend optimizing the Ta by performing a temperature gradient (e.g., starting at the lowest Tm or a few degrees below and increasing with 2°C increments). *** Largest tested amplicon size: 5kb. Please note that longer extension times may be required for targets larger than 5kb!
Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase is a robust enzyme with an antibody mediated hotstart function, ideally suited for applications like genotyping and screening, amplifying with extreme speed of up to 2 seconds per 1kb, as well as high yield and consistency. PCR products generated with this enzyme are A-tailed and can thus be cloned into TA cloning vectors. The extreme speed of Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase allows the use of an extension rate of 4-8 kb/min. The buffer composition has been optimized via high-throughput screening and makes the enzyme particularly resistant to PCR inhibitors. Therefore, Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase is suitable for direct PCR from unpurified samples, including blood, urine, and bacterial colonies, making this the ideal choice for consistent results in fast complex PCR amplifications. Genaxxon's FAST HotStart DNA polymerase is also available as a convenient 2x master mix (M3288), including an inert red tracking dye for electrophoresis, containing all required components for fast PCR, except specific primers. Example of a typical PCR protocol (graphical presentation)* Ta is the annealing temperature (Ta should be 2°C above Tm**) ** Tm is the melting temperature of a primer which is defined as the temperature at which 50% of the primer bind to the complementary sequence of the target DNA. Please note: By increasing Ta above Tm, this percentage decreases, however, primers will still anneal up to a certain degree and initiate extension. Therefore, PCR would still work with a Ta of several degrees higher than the Tm but with a dramatically reduced efficiency. Hence, we recommend optimizing the Ta by performing a temperature gradient (e.g., starting at the lowest Tm or a few degrees below and increasing with 2°C increments). *** Largest tested amplicon size: 5kb. Please note that longer extension times may be required for targets larger than 5kb!
Taq DNA Hot Start Polymerase mit Aptamer Oligonukleotid: Das spezifische Aptamer inhibiert die DNA-Polymeraseaktivität unterhalb von Temperaturen von 50°C bis 55°C und ermöglicht somit eine Hot Start PCR. Bei höheren Temperaturen fällt das Aptamer von aktiven Zentrum der Taq-Polymerase ab. Die Hot Start Taq Polymerase kann so wie eine normale Taq eingesetzt werden, ohne dass der erste Denaturierungsschritt verlängert werden muss. Die Bindung von Aptamer und Polymerase verhindert die Bildung von Primer-Dimer Konstrukten und anderen Artefakten, die durch unspezifische Primerbindungen zu Tage treten. Beachten Sie auch unseren SuperHot Hotstart Mastermix mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set oder als Mix oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Die High-Fidelity Pfu proofreading DNA Polymerase ist eine thermostabile, hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase mit zusätzlicher 3' - 5' Exonukleaseaktivität (proofreading), die es der Polymerase ermöglicht, Fehler im Nukleotideinbau zu korrigieren. Die Genaxxon bioscience Pfund High-Fidelity DNA Polymerase ist die rekombinante Form der ursprünglich aus dem thermophilen Archaebakterium Pyrococcus furiosus (Pfu) beschriebenen Polymerase. Das entsprechende Gen wurde kloniert und in E.coli exprimiert. Das Enzym hat keine nachweisbare 5' - 3' Exonukleaseaktivität. Pfu DNA Polymerase zeigt eine erhöhte Thermostabilität und zusätzlich eine um den Faktor 10 höhere Genauigkeit gegenüber Taq-Polymerase. Einmaliges Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet. Besonderheiten: 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber Taq Polymerase High-Fidelity Polymerase Proofreading Funktion (3' - 5' Exonukleaseaktivität) Hohe Thermostabilität, Halbwertszeit bei 100°C deutlich höher als bei Taq Polymerase Generiert Blunt-End PCR-Produkte Erzeugt PCR-Produkte für Klonierung und Expression Modifizierte Nukleotide können problemlos verwendet werden Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3003 ReproFast Proofreading Polymerase- M3002 Pwo Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.
Die High-Fidelity Pwo proofreading DNA Polymerase ist eine thermostabile, hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase mit zusätzlicher 3' - 5' Exonukleaseaktivität (proofreading), die es der Polymerase ermöglicht, Fehler im Nukleotideinbau zu korrigieren. Die Genaxxon bioscience Pwo High-Fidelity DNA Polymerase ist die rekombinante Form der ursprünglich aus dem thermophilen Archaebakterium Pyrococcus woesei beschriebenen Polymerase. Das entsprechende Gen wurde kloniert und in E.coli exprimiert. Das Enzym hat keine nachweisbare 5' - 3' Exonukleaseaktivität. Pwo DNA Polymerase zeigt eine erhöhte Thermostabilität und zusätzlich eine um den Faktor 10 höhere Genauigkeit gegenüber Taq-Polymerase. Einmaliges Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet. Besonderheiten: 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber Taq Polymerase High-Fidelity Polymerase Proofreading Funktion (3' - 5' Exonukleaseaktivität) Hohe Thermostabilität, Halbwertszeit bei 100°C deutlich höher als bei Taq Polymerase Generiert Blunt-End PCR-Produkte Erzeugt PCR-Produkte für Klonierung und Expression Modifizierte Nukleotide können problemlos verwendet werden Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3003 ReproFast Proofreading Polymerase- M3004 Pfu Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.
ReproFast DNA Polymerase – maximale Zuverlässigkeit für Ihre Standard-PCRsReproFast DNA Polymerase - die robuste Allround-Lösung für effiziente und präzise Amplifikationen in Ihrem Laboralltag. Diese innovative Mischung aus klassischer Taq-DNA-Polymerase und einer Proofreading-Polymerase in einem präzise abgestimmten Puffer liefert überlegene Ergebnisse bei nahezu allen Standard-PCR Anwendungen – bei minimalem Optimierungsaufwand. ReproFast meistert Standard-PCRs bis zu 5 kb aus humaner genomischer DNA und bis zu 7 kb aus Lambda-DNA mit konstanter Hochausbeute. Sparen Sie Zeit und Kosten: Einheitliche Bedingungen decken ein breites Template-Spektrum ab, von Routine-Assays bis zu anspruchsvollen Targets.Die Allround Polymerase - Überzeugende VorteilePerfekte Balance: Taq für Power und Proofreading für Präzision – ideale Kombination aus Geschwindigkeit, Ausbeute und GenauigkeitUniversal einsetzbar: Optimierter Puffer für vielfältige Standard-PCR-Anwendungen, auch bei variierenden TemplatesProven Performance: Bis 5 kb (humane gDNA) / 7 kb (Lambda-DNA) – bewährt in Routine- und ForschungsworkflowsWorkflow-Boost: Weniger Enzyme, weniger Optimierung, mehr ErgebnissePraktische Labornutzen Streamlined PCR-Setups für Klonierung, Genotypisierung und ScreeningHohe Reproduzierbarkeit für Service-Labore und High-Throughput-AnwendungenNur ein Enzym reduziert Lagerplatz und Komplexität – eine smarte Wahl für effizientes Arbeiten Erweiterte Optionen HotStart PCR: Verfügbar als Hot-Start-Variante (ReproHot proofreading Polymerase, M3012): Erhöhte Spezifität, Raumtemperatur-Setup und sofortiger Start ohne Aktivierung – perfekt für sensible Reaktionen. Mit der ReproFast DNA Polymerase steht Ihnen die universelle Polymerase zur Verfügung, die ein breites Anwendungsspektrum abdeckt – leistungsstark, zuverlässig und effizient. Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3002 Pwo Proofreading Polymerase- M3004 Pfu Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.
SNP Pol DNA-Polymerase für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Die Variante SNP PolTaq DNA-Polymerase > besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman® Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP Pol DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher Bande Annealingtemperatur ist zu niedrig! Achtung: Die SNP Pol ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minutenreicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
Unsere SNP PolTaq DNA-Polymerase besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman™ Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Allgemein sind die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq speziell für die für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen, entwickelt worden. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP PolTaq DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: Z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher BandeAnnealingtemperatur ist zu niedrig!Achtung: Die SNP PolTaq ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minuten reicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640
Die SuperHot Taq DNA Polymerase ist speziell für eine Erhöhung der Spezifität, der Sensitivität und der Ausbeute bei der DNA-Amplifikation entwickelt worden. Sie ist optimal für alle Anwendungen der Hotstart PCR wie schwierige Templates oder Quantifizierung der PCR geeignet. Diese Hotstart DNA Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der thermostabilen Taq Polymerase, die durch Hitze aktiviert wird. Die chemische Modifikation inhibiert die SuperHot Taq Polymerase bei niedrigen Temperaturen, so dass es nicht zur Amplifikation von Primer-Dimeren und anderen Artefakten kommen kann. Dadurch wird vor allem die Spezifität, aber auch die Sensitivität gegenüber der normalen Taq extrem verbessert. Da man mit der SuperHot Taq Polymerase auch für längere Zeit bei 95°C denaturieren kann ohne dass die Polymerase an Aktivität verliert, ist es möglich, auch schwierige Templates mit z.B. hohem GC-Gehalt ohne Probleme zu amplifizieren. Durch die erhöhte Sensitivität werden die Ergebnisse bei Multiplex Applikationen besser. Ideal für qPCR Anwendungen geeignet. Für die realtime PCR haben wir speziell optimierte 2-fach qPCR Mastermixe >, ebenso wie für die Multiplex-PCR >. SuperHot Taq Polymerase: chemisch modifiziert erhöhte Spezifität erhöhte Sensitivität für schwierige Templates mit hohem GC-Gehalt geeignet für Multiplexapplikationen empfohlen für qPCR geeignetBeachten Sie auch unseren SuperHot Hot Start Mastermix > mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Die High-quality Taq DNA Polymerase E mit Ammoniumsulfatpuffer für hohe Ausbeute ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase ohne 3' - 5' Exonukleaseaktivität. Der Puffer mit Ammoniumsulfat ist für eine hohe Ausbeute bei der Amplifikation optimiert. Die hohe Prozessivität der Genaxxon Taq-Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu >7 kBasen. Die Polymerase wird mit 10fach-Ammoniumsulfat Puffer und separatem MgCl2 geliefert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 25mM MgCl2. Taq DNA Polymerase Testmuster erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.
Die High-quality Taq DNA Polymerase S für hohe Selektivität ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA-Polymerase ohne 3' - 5'-Exonukleaseaktivität. Der Puffer ist für eine hohe Selektivität bei der Amplifikation optimiert. Die hohe Prozessivität der Genaxxon Taq-Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu >7 kBasen. Die Polymerase wird mit 10fach Puffer und separatem MgCl2 geliefert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 15mM MgCl2. Taq DNA Polymerase Testmuster erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.