Taq DNA-Polymerase E (Hohe Ausbeute)

Die High-Fidelity Pwo proofreading DNA Polymerase ist eine thermostabile, hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase mit zusätzlicher 3' - 5' Exonukleaseaktivität (proofreading), die es der Polymerase ermöglicht, Fehler im Nukleotideinbau zu korrigieren. Die Genaxxon bioscience Pwo High-Fidelity DNA Polymerase ist die rekombinante Form der ursprünglich aus dem thermophilen Archaebakterium Pyrococcus woesei beschriebenen Polymerase. Das entsprechende Gen wurde kloniert und in E.coli exprimiert. Das Enzym hat keine nachweisbare 5' - 3' Exonukleaseaktivität. Pwo DNA Polymerase zeigt eine erhöhte Thermostabilität und zusätzlich eine um den Faktor 10 höhere Genauigkeit gegenüber Taq-Polymerase. Einmaliges Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet. Besonderheiten: 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber Taq Polymerase High-Fidelity Polymerase Proofreading Funktion (3' - 5' Exonukleaseaktivität) Hohe Thermostabilität, Halbwertszeit bei 100°C deutlich höher als bei Taq Polymerase Generiert Blunt-End PCR-Produkte Erzeugt PCR-Produkte für Klonierung und Expression Modifizierte Nukleotide können problemlos verwendet werden Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3003 ReproFast Proofreading Polymerase- M3004 Pfu Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

ReproFast DNA Polymerase – maximale Zuverlässigkeit für Ihre Standard-PCRsReproFast DNA Polymerase - die robuste Allround-Lösung für effiziente und präzise Amplifikationen in Ihrem Laboralltag. Diese innovative Mischung aus klassischer Taq-DNA-Polymerase und einer Proofreading-Polymerase in einem präzise abgestimmten Puffer liefert überlegene Ergebnisse bei nahezu allen Standard-PCR Anwendungen – bei minimalem Optimierungsaufwand. ReproFast meistert Standard-PCRs bis zu 5 kb aus humaner genomischer DNA und bis zu 7 kb aus Lambda-DNA mit konstanter Hochausbeute. Sparen Sie Zeit und Kosten: Einheitliche Bedingungen decken ein breites Template-Spektrum ab, von Routine-Assays bis zu anspruchsvollen Targets.Die Allround Polymerase - Überzeugende VorteilePerfekte Balance: Taq für Power und Proofreading für Präzision – ideale Kombination aus Geschwindigkeit, Ausbeute und GenauigkeitUniversal einsetzbar: Optimierter Puffer für vielfältige Standard-PCR-Anwendungen, auch bei variierenden TemplatesProven Performance: Bis 5 kb (humane gDNA) / 7 kb (Lambda-DNA) – bewährt in Routine- und ForschungsworkflowsWorkflow-Boost: Weniger Enzyme, weniger Optimierung, mehr ErgebnissePraktische Labornutzen Streamlined PCR-Setups für Klonierung, Genotypisierung und ScreeningHohe Reproduzierbarkeit für Service-Labore und High-Throughput-AnwendungenNur ein Enzym reduziert Lagerplatz und Komplexität – eine smarte Wahl für effizientes Arbeiten Erweiterte Optionen HotStart PCR: Verfügbar als Hot-Start-Variante (ReproHot proofreading Polymerase, M3012): Erhöhte Spezifität, Raumtemperatur-Setup und sofortiger Start ohne Aktivierung – perfekt für sensible Reaktionen. Mit der ReproFast DNA Polymerase steht Ihnen die universelle Polymerase zur Verfügung, die ein breites Anwendungsspektrum abdeckt – leistungsstark, zuverlässig und effizient. Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3002 Pwo Proofreading Polymerase- M3004 Pfu Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

Die High-Fidelity Pfu proofreading DNA Polymerase ist eine thermostabile, hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase mit zusätzlicher 3' - 5' Exonukleaseaktivität (proofreading), die es der Polymerase ermöglicht, Fehler im Nukleotideinbau zu korrigieren. Die Genaxxon bioscience Pfund High-Fidelity DNA Polymerase ist die rekombinante Form der ursprünglich aus dem thermophilen Archaebakterium Pyrococcus furiosus (Pfu) beschriebenen Polymerase. Das entsprechende Gen wurde kloniert und in E.coli exprimiert. Das Enzym hat keine nachweisbare 5' - 3' Exonukleaseaktivität. Pfu DNA Polymerase zeigt eine erhöhte Thermostabilität und zusätzlich eine um den Faktor 10 höhere Genauigkeit gegenüber Taq-Polymerase. Einmaliges Testmuster zum Sonderpreis erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Der Testmusterpreis wird bei der ersten offiziellen Bestellung des Produkts zurückerstattet. Besonderheiten: 10-fach höhere Genauigkeit gegenüber Taq Polymerase High-Fidelity Polymerase Proofreading Funktion (3' - 5' Exonukleaseaktivität) Hohe Thermostabilität, Halbwertszeit bei 100°C deutlich höher als bei Taq Polymerase Generiert Blunt-End PCR-Produkte Erzeugt PCR-Produkte für Klonierung und Expression Modifizierte Nukleotide können problemlos verwendet werden Weitere High-Fidelity Proofreading Polymerasen von Genaxxon bioscience:- M3003 ReproFast Proofreading Polymerase- M3002 Pwo Proofreading Polymerase- M3012 ReproHot (KOD) Proofreading Polymerase- AQ97 High Fidelity proofreading Polymerase Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015) oder als Mix (M3016) oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR.

Die High-quality Taq DNA Polymerase S für hohe Selektivität ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA-Polymerase ohne 3' - 5'-Exonukleaseaktivität. Der Puffer ist für eine hohe Selektivität bei der Amplifikation optimiert. Die hohe Prozessivität der Genaxxon Taq-Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu >7 kBasen. Die Polymerase wird mit 10fach Puffer und separatem MgCl2 geliefert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 15mM MgCl2. Taq DNA Polymerase Testmuster erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Die High-quality Taq DNA Polymerase E mit Ammoniumsulfatpuffer für hohe Ausbeute ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase ohne 3' - 5' Exonukleaseaktivität. Der Puffer mit Ammoniumsulfat ist für eine hohe Ausbeute bei der Amplifikation optimiert. Die hohe Prozessivität der Genaxxon Taq-Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu >7 kBasen. Die Polymerase wird mit 10fach-Ammoniumsulfat Puffer und separatem MgCl2 geliefert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 25mM MgCl2. Taq DNA Polymerase Testmuster erhältlich! Keine Versandkosten bei Versand innerhalb Deutschlands! Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Die SuperHot Taq DNA Polymerase ist speziell für eine Erhöhung der Spezifität, der Sensitivität und der Ausbeute bei der DNA-Amplifikation entwickelt worden. Sie ist optimal für alle Anwendungen der Hotstart PCR wie schwierige Templates oder Quantifizierung der PCR geeignet. Diese Hotstart DNA Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der thermostabilen Taq Polymerase, die durch Hitze aktiviert wird. Die chemische Modifikation inhibiert die SuperHot Taq Polymerase bei niedrigen Temperaturen, so dass es nicht zur Amplifikation von Primer-Dimeren und anderen Artefakten kommen kann. Dadurch wird vor allem die Spezifität, aber auch die Sensitivität gegenüber der normalen Taq extrem verbessert. Da man mit der SuperHot Taq Polymerase auch für längere Zeit bei 95°C denaturieren kann ohne dass die Polymerase an Aktivität verliert, ist es möglich, auch schwierige Templates mit z.B. hohem GC-Gehalt ohne Probleme zu amplifizieren. Durch die erhöhte Sensitivität werden die Ergebnisse bei Multiplex Applikationen besser. Ideal für qPCR Anwendungen geeignet. Für die realtime PCR haben wir speziell optimierte 2-fach qPCR Mastermixe >, ebenso wie für die Multiplex-PCR >. SuperHot Taq Polymerase: chemisch modifiziert erhöhte Spezifität erhöhte Sensitivität für schwierige Templates mit hohem GC-Gehalt geeignet für Multiplexapplikationen empfohlen für qPCR geeignetBeachten Sie auch unseren SuperHot Hot Start Mastermix > mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Genaxxon's FAST DNA polymerase is a robust enzyme, ideally suited for applications like genotyping and screening, amplifying with extreme speed of up to 2 seconds per 1kb, as well as high yield and consistency. FAST DNA polymerase has 5’-3’ exonuclease activity, but no 3’-5’ exonuclease (proofreading) activity. PCR products generated with this enzyme are A-tailed and can thus be cloned into TA cloning vectors. The extreme speed of Genaxxons' FAST DNA polymerase allows the use of an extension rate of 4-8 kb/min. Genaxxon's FAST DNA Polymerase is delivered with 5X reaction buffer already containing MgCL2, dNTPs, enhancers and stabilizers for an optimal PCR result. Genaxxon's FAST DNA polymerase is also available as a convenient 2x master mix (M3286), including an inert red tracking dye for electrophoresis, containing all required components for fast PCR, except specific primers. Example of a typical PCR protocol (graphical presentation)* Ta is the annealing temperature (Ta should be 2°C above Tm**)  ** Tm is the melting temperature of a primer which is defined as the temperature at which 50% of the primer bind to the complementary sequence of the target DNA. Please note: By increasing Ta above Tm, this percentage decreases, however, primers will still anneal up to a certain degree and initiate extension. Therefore, PCR would still work with a Ta of several degrees higher than the Tm but with a dramatically reduced efficiency. Hence, we recommend optimizing the Ta by performing a temperature gradient (e.g., starting at the lowest Tm or a few degrees below and increasing with 2°C increments). *** Largest tested amplicon size: 5kb. Please note that longer extension times may be required for targets larger than 5kb!

DNA-freieTaq DNA-Polymerase DF Taq für hohe Spezifität, speziell für die Anwendung in der Mikrobiologie geeignet: Enthält praktisch keine Fremd-DNA. Die DNA-freie Taq DNA Polymerase von Genaxxon ist eine hochprozessive 5' - 3' DNA Polymerase ohne 3' - 5' Exonucleaseaktivität. Die hohe Prozessivität der Genaxxon DF Taq DNA Polymerase erlaubt die Amplifikation von DNA-Fragmenten >7 kBasen. Besonders bei der PCR von 16S RNA-DNA Fragmenten zeigt die DNA-freie DF Taq keine falsch positiven Ergebnisse. Die DNA-freie Taq DNA Polymerase wird mit 10fach-Puffer S und separatem MgCl2 geliefert. Der Puffer S ist für eine hohe Selektivität bei der Amplifikation optimiert. Der mitgelieferte 'complete buffer' enthält 15mM MgCl2. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

Taq DNA Hot Start Polymerase mit Aptamer Oligonukleotid: Das spezifische Aptamer inhibiert die DNA-Polymeraseaktivität unterhalb von Temperaturen von 50°C bis 55°C und ermöglicht somit eine Hot Start PCR. Bei  höheren Temperaturen fällt das Aptamer von aktiven Zentrum der Taq-Polymerase ab. Die Hot Start Taq Polymerase kann so wie eine normale Taq eingesetzt werden, ohne dass der erste Denaturierungsschritt verlängert werden muss. Die Bindung von Aptamer und Polymerase verhindert die Bildung von Primer-Dimer Konstrukten und anderen Artefakten, die durch unspezifische Primerbindungen zu Tage treten. Beachten Sie auch unseren SuperHot Hotstart Mastermix mit und ohne Farbstoff. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set oder als Mix  oder unseren DNA-Markern und unserer günstigen Standardagarose bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR.

AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist eine proofreading Polymerase mit hoher Amplifikationsgeschwindigkeit und sehr hoher Genauigkeit (>60-fach) gegenüber Taq DNA Polymerase. AQ97 ist ideal für schwierige Targets mit sehr niedrigem oder hohem GC-Gehalt geeignet. Neben diesen Eigenschaften zeichnet sich die AQ97 auch durch Ihre Eignung, lange Targets bis zu 18 kb, zu amplifizieren aus. Dies führt zu sehr genauen und zuverlässigen PCR-Ergebnissen.  AQ97 High Fidelity DNA Polymerase besitzt sowohl eine 5'→3' DNA Polymerase-Aktivität als auch eine 3'→5' proofreading Exonuklease-Aktivität, die es dieser Polymerase ermöglicht, Basenpaar-Fehlpaarungen zu korrigieren. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist ein fusionierter Proteinkomplex aus DNA-Polymerase mit einer prozessivitätssteigernden DNA-Bindungsdomäne. Neben einer sehr schnellen und robusten Amplifikation komplexer und langer Zielmoleküle zeichnet sich die AQ97 High Fidelity DNA Polymerase durch eine hohe Genauigkeit aus, was dazu führt, dass auch für lange Amplicons eine genaue Amplifikation gewährleistet ist. Dadurch eignet sich die AQ97 besonders für PCR-Experimente, die eine Amplifikation mit sehr niedrigen Fehlerraten erfordern, wie z. B. Klonen/Subklonen, NGS-Anwendungen, SNP-Analysen und Mutagenese. Eigenschaften: • High Fidelity: >60x Taq fidelity• High elongation rate: 10 sec/kb (bis 6000bp pro Minute)• Long range amplification: 18 kb for human gDNA• 5'-3' polymerase acitivity and 3'-5' exonuclease activity.• generates blund ends.Picture 1: Comparison figures of fidelity values for AQ97 DNA Polymerase, AccuPol DNA Polymerase, two well-recognized high fidelity DNA polymerases P and Q and Taq DNA Polymerase were determined through NGS-based analysis of nucleotide misincorporation during PCR. Initially, PCR amplification was performed on a ~ 200 bp synthetic DNA target, generating PCR products for each of the tested polymerases (using recommended setup conditions).  Picture 2: Distribution of substitution errors. PCR was performed using Taq DNA Polymerase, AQ97 High Fidelity DNA Polymerase, high fidelity DNA Polymerase Q and high fidelity DNA Polymerase P. The PCR was followed by NGS sequencing of the PCR products. The number of substitutions at each PCR target position was calculated and plotted in diagram A. Substitutions include misincorporated nucleotides and deletions at each position. Non-polymerase errors are subtracted from the total number of errors to revel true polymerase errors. Non-polymerase errors include mutations caused by thermocycling-induced DNA damage, pre-NGS sample preparation and sequencing errors. In these diagrams the average number of substitutions for Taq DNA Polymerase (Taq average) and for AQ97 High Fidelity DNA Polymerase (AQ97 average) is also plotted. Diagram B magnifies the area near the detection limit, displaying more information about the number of substitutions for AQ97 High Fidelity DNA Polymerase, high fidelity DNA Polymerase Q and high fidelity DNA polymerase P. Click to enlarge diagrams.  

AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase ist eine proofreading Polymerase mit hoher Amplifikationsgeschwindigkeit und sehr hoher Genauigkeit (>60-fach) gegenüber Taq DNA Polymerase. AQ97 ist ideal für schwierige Targets mit sehr niedrigem oder hohem GC-Gehalt geeignet. Neben diesen Eigenschaften zeichnet sich die AQ97 auch durch Ihre Eignung, lange Targets bis zu 18 kb, zu amplifizieren aus. Dies führt zu sehr genauen und zuverlässigen PCR-Ergebnissen.  AQ97 High Fidelity DNA Polymerase besitzt sowohl eine 5'→3' DNA Polymerase-Aktivität als auch eine 3'→5' proofreading Exonuklease-Aktivität, die es dieser Polymerase ermöglicht, Basenpaar-Fehlpaarungen zu korrigieren. AQ97 High Fidelity DNA Polymerase ist ein fusionierter Proteinkomplex aus DNA-Polymerase mit einer prozessivitätssteigernden DNA-Bindungsdomäne. Neben einer sehr schnellen und robusten Amplifikation komplexer und langer Zielmoleküle zeichnet sich die AQ97 High Fidelity DNA Polymerase durch eine hohe Genauigkeit aus, was dazu führt, dass auch für lange Amplicons eine genaue Amplifikation gewährleistet ist. Dadurch eignet sich die AQ97 besonders für PCR-Experimente, die eine Amplifikation mit sehr niedrigen Fehlerraten erfordern, wie z. B. Klonen/Subklonen, NGS-Anwendungen, SNP-Analysen und Mutagenese. Eigenschaften: • High Fidelity: >60x Taq fidelity• High elongation rate: 10 sec/kb (bis 6000bp per minute) • Built in hot start technology• Long range amplification: 18 kb for human gDNA• 5'-3' polymerase acitivity and 3'-5' exonuclease activity.• generates blund ends. Bild 1: Die Vergleichswerte der Genauigkeitswerte für die AQ97-DNA-Polymerase, die AccuPol-DNA-Polymerase, die beiden Wettbewerber High-Fidelity-DNA-Polymerasen "P" und "Q" und die Taq-DNA-Polymerase wurden durch eine NGS-basierte Analyse des Nukleotid-Fehleinbaus während der PCR ermittelt. Die PCR-Amplifikation wurde mit einem synthetischen DNA-Target von etwa 200 bp durchgeführt, wobei für jede der getesteten Polymerasen PCR-Produkte erzeugt wurden (unter Verwendung der empfohlenen Setup-Bedingungen). Bild 2: Acht verschiedene humane genomische DNA-Targets mit einer Länge von 400 bis 800 bp und einem GC-Gehalt zwischen 29% und 78% wurden mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation beobachtet. Für Targets mit einem GC-Gehalt von mehr als 70% wurde der Reaktionsmischung 2 M Betain Enhancer Solution zugesetzt. Marker: M.  Bild 3: Es wurden fünf verschiedene Targets aus menschlicher genomischer DNA mit einer Länge von 2 kb bis 17,5 kb amplifiziert. Für alle Targets wurde eine robuste Amplifikation mit dem AQ97 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix beobachtet, was die Fähigkeit des Master Mixes zur Amplifikation großer und komplexer Targets belegt. Die Amplikongrößen sind am oberen Rand des Gels angegeben. Marker M: High Range DNA-Leiter.

Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase is a robust enzyme with an antibody mediated hotstart function, ideally suited for applications like genotyping and screening, amplifying with extreme speed of up to 2 seconds per 1kb, as well as high yield and consistency. PCR products generated with this enzyme are A-tailed and can thus be cloned into TA cloning vectors. The extreme speed of Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase allows the use of an extension rate of 4-8 kb/min. The buffer composition has been optimized via high-throughput screening and makes the enzyme particularly resistant to PCR inhibitors. Therefore, Genaxxon’s FAST HotStart DNA polymerase is suitable for direct PCR from unpurified samples, including blood, urine, and bacterial colonies, making this the ideal choice for consistent results in fast complex PCR amplifications. Genaxxon's FAST HotStart DNA polymerase is also available as a convenient 2x master mix (M3288), including an inert red tracking dye for electrophoresis, containing all required components for fast PCR, except specific primers. Example of a typical PCR protocol (graphical presentation)* Ta is the annealing temperature (Ta should be 2°C above Tm**)  ** Tm is the melting temperature of a primer which is defined as the temperature at which 50% of the primer bind to the complementary sequence of the target DNA. Please note: By increasing Ta above Tm, this percentage decreases, however, primers will still anneal up to a certain degree and initiate extension. Therefore, PCR would still work with a Ta of several degrees higher than the Tm but with a dramatically reduced efficiency. Hence, we recommend optimizing the Ta by performing a temperature gradient (e.g., starting at the lowest Tm or a few degrees below and increasing with 2°C increments). *** Largest tested amplicon size: 5kb. Please note that longer extension times may be required for targets larger than 5kb!

SNP Pol DNA-Polymerase für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Die Variante SNP PolTaq DNA-Polymerase > besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman® Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP Pol DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher Bande Annealingtemperatur ist zu niedrig! Achtung: Die SNP Pol ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minutenreicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640

Unsere SNP PolTaq DNA-Polymerase besitzt 5'-3'-Nukleaseaktivität und kann daher mit spezifischen Primersonden wie Taqman™ Sonden oder Molecular beacons eingesetzt werden. Allgemein sind die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq speziell für die für die einfache, verlässliche und schnelle spezifische Unterscheidung von Allelen, z. B. bei CRISPR/Cas9-gesetzten Punktmutationen, beim Erkennen falscher CRISPR/Cas9-Produkte oder bei der Validierung von Sequenzierergebnissen, entwickelt worden. Die SNP Pol DNA-Polymerase erkennt hochspezifisch, ob eine Fehlpaarung (Mismatch) des Primer-Template-Komplexes vorliegt oder nicht. Die Fehlpaarung (Punktmutation) muss sich am 3´-Ende des Primers befinden. Somit können mutante Allele exakt von Wildtypallelen unterschieden werden - ohne Sequenzierung, da die Polymerase im Fall einer Fehlpaarung schlichtweg nicht amplifiziert. Legen Sie Ihren Primer einfach auf die angenommene Punktmutation (Wichtig: Die Punktmutation muss am 3'-Ende sein) und die Polymerase erkennt eine Fehlpaarung in diesem Bereich mit 100% Genauigkeit: Wenn die zum 3'-Ende des Primers komplementäre Base auf dem DNA-Strang die Mutation zeigt und der Primer nicht, dann erfolgt keinerlei Amplifikation - schnelle Gewissheit zu 100%! Die SNP Pol DNA-Polymerase kann daher einfach, zeit- und kosteneffizient für das Screening von Punktmutationen eingesetzt werden. Für mehr Informationen zu unseren SNP DNA-Polymerasen und Anwendungsbereiche lesen Sie jetzt unseren Blogbeitrag. BeschreibungDie SNP PolTaq DNA-Polymerase ist eine hochselektive DNA-Polymerase zur Detektion von Single Nucleotide Polymorphisms. Sie wurde speziell für die allelspezifische Diskriminierung entwickelt, bei der eine sehr hohe Unterscheidungsrate (high discrimination) benötigt wird: Z.B. bei der Allelspezifischen PCR (ASA; AS-PCR), Allelspezifischen Primerextension (AS-PEX), SNP Analyse, Genotypisierung oder bei methylierungsspezifischen PCRs (MSP). Viele DNA-Polymerasen tolerieren fehlgepaarte Primer-Template Komplexe. Die SNP Pol DNA-Polymerase dagegen unterscheidet diese spezifisch (high discrimination) und liefert gezielt nur PCR-Produkte bei perfekt passenden Primerpaaren! Die Genaxxon SNP Pol und SNP PolTaq DNA-Polymerasen unterscheiden bis zu 100% mittels allelspezifischer PCR zwischen den beiden Allelen und ergeben nach einer simplen qPCR eine eindeutige Aussage, welches Allel vorliegt. Somit kann das prinzipiell große Potential der CRISPR/Cas9 Technologie mit der SNP PolTaq bzw. der SNP DNA-Polymerase für die Humanmedizin und Pflanzenbiotechnologie genutzt werden. Mittels allelspezifischer PCR kann man die Mutationsrate in einem Pool oder Hintergrund von Wildtyp-Sequenzen quantifizieren. Auch die Überprüfung von Mutationshäufigkeiten, die durch NGS bestimmt wurden, kann mittels allelspezifischer PCR und SNP Pol DNA-Polymerase verifiziert werden. Sehr gut geeignet ist die SNP PolTaq DNA-Polymerase zur Analyse von Liquid Biopsie Proben. Mit ihr kann die Anwesenheit und Häufigkeit von Krebsmutationen sehr gut analysiert und quantifiziert werden. Bild: Anwendungsbeispiel SNP Pol DNA Polymerase Wir empfehlen die Anwendung von Primern für kurze Amplicons (ca. 60-200 bp) für optimale Ergebnisse. Längere Amplicons sind ebenfalls möglich. Bei längeren Amplicons >500 bp ist unter Umständen der Zusatz von Magnesium (+0.5 - 1.5mM) erforderlich. Trouble shooting:Keine Banden nach PCR von 30 Zyklen!Optimierungsvorgehen bei fehlender oder schwacher BandeAnnealingtemperatur ist zu niedrig!Achtung: Die SNP PolTaq ist eine aptamer inhibierte DNA-Polymerase. Das eingesetzte Aptamer-Oligo inhibiert die Polymerase reversibel bei Temperaturen <55°C! Daher sollten die Primer eine Annealingtemperatur von am besten >57°C haben. - realtime PCR Ansatz- Überprüfen der dNTP-Konzentration. Diese sollte zwischen 200 und 300µM (in der PCR) liegen.- Erhöhen der Zyklenzahl (mindestens 35, besser gleich 40) Test Optimierung - ZyklenzahlBei der Endpunktsdetektion ist eine Zyklenanzahl von 30 nicht immer ausreichen, um eine gut sichtbare Bande zu generien. Zum Beispiel bei weniger als 200 DNA-Kopien als Ausgangswert. Daher sollte der Test mittels realtime PCR gefahren werden, oder man setzt fünf parallele PCRs an, von denen jeweils eine nach fünf unterschiedlichen Zyklen aus dem PCR-Gerät entnommen wird (Beispiel unten). Endpunktsdetektion:Setzen Sie parallel fünf gleiche PCR-Reaktionen mit der SNP Pol DNA-Polymerase an. Nehmen Sie bei 20, 25, 30,35 und 40 Zyklen jeweils eines der PCR-Tubes aus dem Cycler und tragen am Ende alle fünf Reaktionen auf ein Agarosegel auf. Damit lässt sich dann einfach erkennen, welches die optimale Zyklenzahl in der PCR für die gegebene Anwendung (Ausgangsmaterial, Target, Primer) ist. SNP Pol PCR mit ZelllysatenTierische Zellen und E.coli können direkt für die PCR mit der SNP Pol DNA-Polymerase herangezogen werden! Es ist keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau notwendig.Vorgehen PCR-Ansatz: 1. Es werden 50 - 500 Zellen pro PCR-Ansatz benötigt!2. PCR Mix mit Primern und Puffer vorbereiten und auf Eis stellen!3. Die gepickte Kolonie direkt in 10-20µL Wasser (keine separate Lyse und kein Proteinase K-Verdau) geben, kurz vortexen (5 Sekunden), diese Zell-Suspension dann direkt in den PCR-Reaktionsansatz geben, z.B. 10µL Zellsuspension für einen PCR-Ansatz mit 20µL Gesamtvolumen. Anfängliche Denaturierungszeit von 2-3 Minuten reicht aus, kann notfalls auf 5 Minuten verlängert werden.Genomische DNA pro Reaktion max. 100 Kopien ist relativ gering, sollte aber noch gehen.Der Rest dieser Zell-Suspension kann auch weggefroren werden, um weitere Tests damit durchzuführen. Optional: 4. wenn es möglich ist: real-time PCR machen! Die SNP Pol DNA-Polymerase (M3009 >) oder (M3061 >) kann zusammen mit unspezifischen Fluoreszenzfarbstoffen (z.B. Green DNA Dye > von Genaxxon oder SybrGreen®) in der realtime PCR eingesetzt werden. Wenn mit spezifischen PCR-Probes gearbeitet wird, ist nur die SNP PolTaq DNA-Polymerase dafür einsetzbar, da nur diese eine 5'-3' Exonukleaseaktivität besitzt. Mit unseren hochwertigen dNTPs als Set (M3015.4100 und M3015.0250) > oder als Mix (M3016.1010) > oder unseren DNA-Markern > und unserer günstigen Standardagarose > bieten wir Ihnen weitere qualitativ hochwertige Produkte für die PCR. Anwendungsgebiete für die SNP Pol DNA-Polymerase- Monitoring, verification and detection of point mutations- Identification of correct or wrong CRISPR/Cas9 products- Verification/validation of sequencing results- Quantification of mutations (e.g. NGS results)- SNP-detection by allele-specific amplification (ASA) / Allele-specific PCR- Methylation specific PCRs (MSP) after bisulfite treated DNA (CpG methylation sides)- HLA genotyping- micro sequencing- realtime PCR with hydrolysis probes- realtime multiplex PCRs - DamID-seq data in C. elegans. Sharma R, Ritler D, Meister P. Tools for DNA adenine methyltransferase identification analysis of nuclear organization during C. elegans development. Genesis. 2016 Feb 4. doi: 10.1002/dvg.22925. - Minisequencing SNP genotyping with SNPase DNA Polymerase can be carried out by the procedure described in: Lovmar L, Fredriksson M, Liljedahl U, Sigurdsson S, Syvänen AC. Quantitative evaluation by minisequencing and microarrays reveals accurate multiplexed SNP genotyping of whole genome amplified DNA. Nucleic Acids Res. 2003;31:e129. - Allel specific mismatch selectivity by the HiDi DNA polymerase Drum M, Kranaster R, Ewald C, Blasczyk R, Marx A (2014) Variants of a Thermus aquaticus DNA Polymerase with Increased Selectivity for Applications in Allele- and Methylation-Specific Amplification. PLoS ONE 9(5): e96640. doi:10.1371/journal.pone.0096640